抗PD‑1抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抗PD‑1抗体或其抗原结合片段。本发明专利技术还提供了编码该抗体的核酸，包含该抗体的组合物，以及制备该抗体并使用该抗体治疗或预防诸如癌症和自身免疫性疾病的疾病的方法。

1 anti PD antibody and its application

The invention provides a anti PD 1 antibody or antigen binding fragment. The invention also provides a nucleic acid encoding the antibody, a composition comprising the antibody, and a method for preparing the antibody and using the antibody to treat or prevent diseases such as cancer and autoimmune diseases.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗PD-1抗体及其应用相关申请的交叉引用本申请要求2015年7月28日提交的中国专利申请号为201510451773.6的优先权，其全部内容通过引用整体并入本文。引用电子提交的序列表本申请包含一个序列表，它通过EFS-Web以电子方式提交，作为ASCII格式的序列表，文件名为“序列表文件”，创建日期为2016年7月6日，大小约为40kB。通过EFS-Web提交的序列表是本说明书的一部分，并且其全部内容通过引用整体并入本文。专利
本专利技术涉及单克隆抗PD-1抗体，编码所述抗体的核酸和表达载体，含有所述载体的重组细胞，以及包含所述抗体的组合物。还提供了制备所述抗体的方法，以及使用所述抗体治疗包括癌症和自身免疫疾病在内的疾病的方法。专利技术背景肿瘤细胞能够通过各种方式“编辑”肿瘤微环境中的宿主免疫来逃避免疫系统。肿瘤实施这种所谓的“癌症免疫逃逸”的一种方式，是通过上调作为免疫系统关键调节剂的免疫检查点蛋白的表达，从而抑制免疫应答。一种这样的免疫抑制共信号由PD-1受体及其配体PD-L1介导。PD-1(程序性细胞死亡蛋白1)是一种I型跨膜蛋白，长288个氨基酸，是主要的免疫检查点分子之一(Blank等，2005，癌症免疫疗法，54：307-314)。PD-1主要在激活的T细胞上表达，并且其与配体PD-L1和PD-L2相互作用以诱导抑制信号，从而减少T细胞增殖、细胞因子产生和细胞毒性(Freeman等,2000,J.Exp.Med.,192:1027-34).PD-L1在许多细胞类型上表达，包括T细胞、B细胞、内皮细胞、上皮细胞和抗原呈递细胞，以及肺、肝和心脏组织细胞和几种类型的肿瘤细胞上。相反，PD-L2仅仅在专职抗原呈递的细胞，如树突状细胞和巨噬细胞上表达。PD-1和PD-L1之间的相互作用对于调节免疫应答是关键的，并且它是表达PD-L1的肿瘤细胞逃避免疫监视的主要机制(Zippelius等，2015，癌症免疫研究.3(3)：236-44)。T细胞PD-1的持续表达高度表征耗竭的表型，因效应功能的下降而被注意。在不同类型的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中观察到这种表型，并且与不良预后和肿瘤复发相关(Wherry，2011，Nat.Immunol.,12：492-99)。阻断PD-1/PD-L1的相互作用可以激活免疫系统并增强抗肿瘤免疫应答，并且已经在多个同源小鼠肿瘤模型中得到证明，阻断PD-1或其配体促进抗肿瘤活性(Hirano等，2005，癌症研究，65：1089-96)。因此，PD-1和PD-L1之间的相互作用是癌症免疫治疗的有吸引力的靶点。癌症免疫治疗是癌症治疗的最新突破，其利用患者自身的免疫系统攻击肿瘤细胞。免疫检查点蛋白的抑制剂具有治疗多种肿瘤类型(例如转移性黑素瘤，肺癌，乳腺癌，肾细胞癌等)的潜力。最近，应用癌症免疫疗法的研究已经显示出有希望的结果，特别是在转移癌方面(Weinstock和McDermott，2015，TherAdvUrol.，7(6)：365-77)。此外，癌症免疫治疗在包括霍奇金淋巴瘤，多发性骨髓瘤，骨髓发育不良综合征，非霍奇金淋巴瘤等在内的血液癌症的治疗中显示出巨大的潜力(Zou和ChenL，2008，NatRevImmunol.，8(6)：467-77)。免疫检查点抑制剂引起的副作用是可以忽略的，可逆的和可控的，并且有效的免疫检查点抑制剂可以实质上改善癌症患者的总生存期。免疫检查点抑制剂可以与靶向治疗或传统放疗和化疗联合应用，并且此类联合治疗可以有效治疗许多类型的癌症。BMS、Merck、MedImmune和CureTech已经启动了抗PD-1单克隆抗体的临床试验，包括，例如市场阶段的三次试验；并且Roche、MedImmune、MerckSerono和BMS也已经启动了抗PD-L1mAb的临床试验，包括，例如已经撤销或终止的三次试验(clinicaltrials.gov，2015)。BMS，Nivolumab的全人IgG4mAb已经进行了I期临床试验。这些试验中的第一次在2010年，在39名晚期实体瘤患者中进行(Brahmer等，2010，J.Clin.Oncol.,28:3167-75)。响应结果是3/39，伴有大多数的免疫相关不良反应(AE)和一例严重的AE。第二次试验在2012年，在294名患者中进行(Topalian等，2014，J.Clin.Oncol.,32:1020-30)。在16％的非小细胞肺癌患者，28％的转移性黑素瘤患者，29％的肾细胞癌患者和0％的去势难治性前列腺癌患者或结直肠癌患者中存在客观反应。在15％的患者中发生3/4级治疗相关的AE，并且有3例死亡。因此，尽管有所进步，但是本领域需要更有效的治疗剂，其包含有效抑制PD-1/PD-L1信号传导活性，同时对人产生最小不利副作用的抗PD-1抗体。专利技术概述为满足此类需求，本专利技术提供了以高亲和力特异性结合PD-1并诱导免疫细胞分泌IFN-γ和IL-2的单克隆抗体，正如混合淋巴细胞反应和T淋巴细胞刺激试验中所测定的。具体而言，与纳武单抗(Nivolumab)相比，本专利技术的全人抗PD-1抗体对PD-1具有更高的亲和力。此外，所述抗体表现出与派姆单抗(Pembrolizumab)Merck)(一种人源化IgG4抗PD-1mAb)相当的特性，但由于其是全人的，而非简单的人源化mAb，因此预测其在人体中具有比派姆单抗(Pembrolizumab)更少的免疫原性的不利副作用。在一个一般方面，本专利技术涉及结合PD-1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段。根据一具体方面，本专利技术涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含具有以下多肽序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2和HCDR3：分别为SEQIDNOs:30、31、32、26、27、和28；分别为SEQIDNOs:6、7、8、2、3、和4；分别为SEQIDNOs:14、15、16、10、11、和12；分别为SEQIDNOs:22、23、24、18、19、和20；分别为SEQIDNOs:38、39、40、34、35、和36；分别为SEQIDNOs:46、47、48、42、43、和44；或分别为SEQIDNOs:54、55、56、50、51、和52；其中，所述抗体或其抗原结合片段结合PD-1，优选地特异性结合人PD-1。根据另一具体方面，本专利技术涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含具有与SEQIDNO：25、1、9、17、33、41或49至少95％同源性的多肽序列的重链可变区，或具有与SEQIDNO：29、5、13、21、37、45或53至少95％同源性的多肽序列的轻链可变区。根据一种实施方式，本专利技术的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段是人/鼠嵌合的。根据另一种实施方式，本专利技术的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段是人的。根据另一种实施方式，本专利技术的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段进一步包含一恒定区，优选一人重链IgG4恒定区，更优选具有一个或多个突变(例如S228P突变)的人重链IgG4恒定区，和一人抗体轻链κ恒定区。在另一个一般方面，本专利技术涉及一种分离的编码本专利技术单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸。在另一个一般方面，本专利技术涉及一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含具有以下多肽序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2和HCDR3：(1)分别为SEQ ID NOs:30、31、32、26、27、和28；(2)分别为SEQ ID NOs:6、7、8、2、3、和4；(3)分别为SEQ ID NOs:14、15、16、10、11、和12；(4)分别为SEQ ID NOs:22、23、24、18、19、和20；(5)分别为SEQ ID NOs:38、39、40、34、35、和36；(6)分别为SEQ ID NOs:46、47、48、42、43、和44；或(7)分别为SEQ ID NOs:54、55、56、50、51、和52；其中，所述的抗体或其抗原结合片段结合PD‑1。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.28 CN 20151045177361.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含具有以下多肽序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2和HCDR3：(1)分别为SEQIDNOs:30、31、32、26、27、和28；(2)分别为SEQIDNOs:6、7、8、2、3、和4；(3)分别为SEQIDNOs:14、15、16、10、11、和12；(4)分别为SEQIDNOs:22、23、24、18、19、和20；(5)分别为SEQIDNOs:38、39、40、34、35、和36；(6)分别为SEQIDNOs:46、47、48、42、43、和44；或(7)分别为SEQIDNOs:54、55、56、50、51、和52；其中，所述的抗体或其抗原结合片段结合PD-1。2.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其包含具有与SEQIDNO：25、1、9、17、33、41或49至少95％同源性的多肽序列的重链可变区，或具有与SEQIDNO：29、5、13、21、37、45或53至少95％同源性的多肽序列的轻链可变区。3.如权利要求1或2所述的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其包含：a.具有SEQIDNO：25的多肽序列的重链可变区，和具有SEQIDNo：29的多肽序列的轻链可变区；b.具有SEQIDNO：1的多肽序列的重链可变区，和具有SEQIDNo：5的多肽序列的轻链可变区；c.具有SEQIDNO：9的多肽序列的重链可变区，和具有SEQIDNo：13的多肽序列的轻链可变区；d.具有SEQIDNO：17的多肽序列的重链可变区，和具有SEQIDNo：21的多肽序列的轻链可变区；e.具有SEQIDNO：33的多肽序列的重链可变区，和具有SEQIDNo：37的多肽序列的轻链可变区；f.具有SEQIDNO：41的多肽序列的重链可变区，和具有SEQIDNo：45的多肽序列的轻链可变区；或g.具有SEQIDNO：49的多肽...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘礼乐，杨欣秀，罗海山，刘虎，帅正蓉，王健，钟勤，段清，顾红专，杨达志，
申请(专利权)人：钜川生物医药，
类型：发明
国别省市：维尔京群岛,VG