一种生产L‑酪氨酸重组工程菌的方法及该重组工程菌的应用技术

一种生产L‑酪氨酸重组工程菌的方法及该重组工程菌的应用,以大肠杆菌SyBE‑002447作为出发菌株，分别整合全化学合成模块Plac‑aroG‑tyrA‑aroE和Ptrc‑pps‑tkt‑glk，构建L‑酪氨酸的底盘菌株SyBE‑22002；然后用全化学合成模块Ptacs‑hpaBC‑ldh整合插入到染色体上nupG下游位置，获得菌株SyBE‑22011。本发明专利技术解决发酵过程需要添加抗生素以及诱导剂异丙基‑β‑D‑硫代吡喃半乳糖苷的问题，能高效生产L‑酪氨酸和丹参素，简化下游分离纯化过程，降低工业生产成本，避免抗生素和诱导剂对环境的污染，提高经济效益。

The application of a method for producing L tyrosine recombinant engineering bacteria and the recombinant engineering bacteria

【技术实现步骤摘要】
一种生产L-酪氨酸重组工程菌的方法及该重组工程菌的应用
本专利技术所属生物
，特别涉及一种L-酪氨酸重组工程菌的构建及其生产L-酪氨酸和丹参素的方法。
技术介绍
L-酪氨酸是一种重要的营养必需氨基酸，对人和动物的新陈代谢、生长发育起着重要的作用。其常作为、苯丙酮尿症患者的营养补充剂，以及多肽类激素、抗生素、L-多巴、黑色素、对羟基肉桂酸、对羟基苯乙烯等的制备原料而广泛应用在食品、饲料、医药和化工等行业。基于此，最近几年L-酪氨酸及其衍生物的合成吸引了越来越多研究者的目光。由于天然微生物合成积累L-酪氨酸的能力很低，即使构建的重组工程菌，仍然需要使用抗生素维持质粒和诱导剂使基因过表达，存在破坏和污染环境的潜在危害性。丹参素是一种L-酪氨酸的衍生物，其化学名为β-(3,4-二羟基苯基)乳酸。最新的药理研究表明，丹参素能够抑制血小板合成和聚集，提高心肌耐缺氧能力、保护心肌，同时增加冠脉流量。这些药理作用是丹参注射液治疗冠心病、心肌缺血的主要机制。因此丹参素在心脑血管疾病方面具有非常好的功效，如：抗动脉粥样硬化及降血脂，抗血栓形成，扩张冠状动脉，保护心肌线粒体免受氧自由基引发的脂质过氧化物的损伤等作用。此外有研究发现其在抗菌消炎，防止创面的过度愈合，抗脑缺血损伤，素抗肿瘤，治疗银屑病等方面也有较好的作用。因此丹参素拥有广阔的市场和应用前景。目前丹参素主要从丹参根中提取，但含量低，受到种植季节和原材料的限制，生产能力低。微生物合成具有成本低、产量高的优点，本专利就是构建出L-酪氨酸生产重组工程菌及其衍生菌株，实现L-酪氨酸和丹参素的微生物发酵生产。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对目前L-酪氨酸和丹参素生产现状，提供生产L-酪氨酸和丹参素的重组工程菌。本专利技术的第二个目的是提供上述重组工程菌在发酵生产L-酪氨酸和丹参素的应用。本专利技术的技术方案概述如下：一种生产L-酪氨酸的重组工程菌，用下述方法构建：(1)以大肠杆菌SyBE-002447基因组为模板，以SEQIDNo.1所示序列为上游引物，以SEQIDNo.2所示序列为下游引物，克隆得到500bp的片段F1；设计并化学合成模块Plac-aroG-tyrA-aroE，序列如SEQIDNo.3所示，以该序列为模板，以SEQIDNo.4所示序列为上游引物，以SEQIDNo.5所示序列为下游引物，克隆得到3500bp左右的片段F2；以化学合成序列CHL基因为模板，其序列如SEQIDNO.6所示，以SEQIDNo.7所示序列为上游引物，以SEQIDNo.8所示序列为下游引物，扩增得到1000bp的F3片段；以大肠杆菌SyBE-002447基因组为模板，以SEQIDNo.9所示序列为上游引物，以SEQIDNo.10所示序列为下游引物，克隆得到500bp的片段F4。(2)把(1)中获得的四个重组片段通过重叠延伸的方法组装成重组片段F1-F2-F3-F4。以大肠杆菌SyBE-002447菌株为底盘细胞，利用λred同源重组的方法整合F1-F2-F3-F4片段到SyBE-002447菌株的染色体上，然后从染色体上丢失氯霉素抗性基因，得到重组菌株SyBE-22001，用于发酵生产L-酪氨酸。(3)以(2)中得到的菌株SyBE-22001基因组为模板，以SEQIDNo.11所示序列为上游引物，以SEQIDNo.12所示序列为下游引物，克隆得到500bp的片段F5；设计并化学合成L-酪氨酸合成模块Ptrc-pps-tkt-glk，序列如SEQIDNo.13所示，以该序列为模板，以SEQIDNo.14所示序列为上游引物，以SEQIDNo.15所示序列为下游引物，克隆得到5700bp左右的片段F6；以序列SEQIDNo.6(CHL基因)为模板，以SEQIDNo.16所示序列为上游引物，以SEQIDNo.17所示序列为下游引物，扩增得到1000bp的片段F7。以菌株SyBE-22001基因组为模板，以SEQIDNo.18所示序列为上游引物，以SEQIDNo.19所示序列为下游引物，克隆得到500bp的片段F8。(4)把(3)中获得的四个重组片段通过重叠延伸的方法组装构建重组片段F5-F6-F7-F8。利用λred同源重组的方法整合片段F5-F6-F7-F8到SyBE-22001菌株的染色体上，然后从染色体上丢失氯霉素抗性基因，得到重组菌株SyBE-22002，用于发酵生产L-酪氨酸。(5)以菌株SyBE-22002基因组为模板，以SEQIDNo.20所示序列为上游引物，以SEQIDNo.21所示序列为下游引物，克隆得到500bp左右的片段F9。以设计并全化学合成的丹参素合成模块序列SEQIDNo.22(Ptacs-hpaBC-ldh)为模板，以SEQIDNo.23所示序列为上游引物，以SEQIDNo.24所示序列为下游引物，克隆得3600bp左右的片段F10；以序列SEQIDNo.6(CHL基因)为模板，以SEQIDNo.25所示序列为上游引物，以SEQIDNo.26所示序列为下游引物，扩增得到1000bp左右的F11片段。以菌株SyBE-22002基因组为模板，以SEQIDNo.27所示序列为上游引物，以SEQIDNo.28所示序列为下游引物，克隆得到500bp左右的片段F12。(6)把(5)中获得的四个重组片段通过重叠延伸的方法组装构建重组片段F9-F10-F11-F12，利用λred同源重组的方法到SyBE-22002菌株的染色体上，丢失氯霉素抗性基因，得到重组的整合菌株SyBE-22011，上罐发酵合成的丹参素。本专利技术的技术效果是：本专利技术克服了依靠质粒表达系统的L-酪氨酸和丹参素生产菌株的不足，提供了一种新的利用微生物发酵生产L-酪氨酸和丹参素的方法，利用工程大肠杆菌实现从葡萄糖生产L-酪氨酸和丹参素，发酵过程无需需添加任何前体、抗生素以及诱导剂，有利于下游的分离纯化，降低生产成本，提高经济效益，大大加速L-酪氨酸和丹参素的工业化生产。具体实施方式下面结合具体实施例进一步说明本专利技术的技术方案。各个使用质粒具体信息如下：质粒pJET1.2购自北京全式金生物技术有限公司(北京市海淀区西小口路66号中关村东升科技园B-3号楼四层)；质粒pKD46和pCP20购自北京中原公司(北京市朝阳区东方东路11号)。本专利技术所用大肠杆菌为SyBE-002447，现于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏中心登记入册编号为CGMCCNo.7962。保藏时间为2013年7月22日，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。实施例1：L-酪氨酸重组工程菌株的构建以SyBE-002447作为出发菌株，通过λred同源重组分别在其基因组上的paa基因簇的位置合成基因片段Plac-aroG-tyrA-aroE，在LacI基因的位置整合Ptrc-pps-tkt-glk片段，得到最终底盘菌株SyBE-22002。具体过程如下：(1)用Plac-aroG-tyrA-aroE替换SyBE-002447染色体上paa基因簇。以大肠杆菌SyBE-002447基因组为模板，设计上游同源臂引物F1-F和F1-R，以SEQIDNo.1所示序列为上游引物，以SEQIDNo.2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生产L‑酪氨酸的重组工程菌的方法，其特征在于用下述方法构建：(1)以大肠杆菌SyBE‑002447作为出发菌株，采用λred同源重组和抗性丢失方法，用全化学合成模块Plac‑aroG‑tyrA‑aroE整合替换染色体上的paa基因簇位置，获得菌株SyBE‑22001；(2)在(1)中得到的菌株SyBE‑22001，采用λred同源重组和抗性丢失方法，用全化学合成模块Ptrc‑pps‑tkt‑glk整合替换染色体上的lacI基因的位置，获得菌株SyBE‑22002；(3)在(2)中得到的菌株SyBE‑22002，采用λred同源重组和抗性丢失方法，用全化学合成模块Ptacs‑hpaBC‑ldh整合插入到染色体上nupG下游位置，获得菌株SyBE‑22011。

【技术特征摘要】
1.一种生产L-酪氨酸的重组工程菌的方法，其特征在于用下述方法构建：(1)以大肠杆菌SyBE-002447作为出发菌株，采用λred同源重组和抗性丢失方法，用全化学合成模块Plac-aroG-tyrA-aroE整合替换染色体上的paa基因簇位置，获得菌株SyBE-22001；(2)在(1)中得到的菌株SyBE-22001，采用λred同源重组和抗性丢失方法，用全化学合成模块Ptrc-pps-tkt-glk整合替换染色体上的lacI基因的位置，获得菌株SyBE-22002；(3)在(2)中得到的菌株SyBE-22002，采用λred同源重组和抗性丢失方法，用全化学合成模块Ptacs-hpaBC-ldh整合插入到染色体上nupG下游位置，获得菌株SyBE-22011。2.根据权利要求1所述的生产L-酪氨酸的重组工程菌的方法，其特征在于步骤(1)的具体方法是：以大肠杆菌SyBE-002447基因组为模板，以SEQIDNo.1所示序列为上游引物，以SEQIDNo.2所示序列为下游引物，克隆得到500bp的片段F1；设计并化学合成模块Plac-aroG-tyrA-aroE，序列如SEQIDNo.3所示，以该序列为模板，以SEQIDNo.4所示序列为上游引物，以SEQIDNo.5所示序列为下游引物，克隆得到3500bp左右的片段F2；以化学合成序列CHL基因为模板，其序列如SEQIDNO.6所示，以SEQIDNo.7所示序列为上游引物，以SEQIDNo.8所示序列为下游引物，扩增得到1000bp的F3片段；以大肠杆菌SyBE-002447基因组为模板，以SEQIDNo.9所示序列为上游引物，以SEQIDNo.10所示序列为下游引物，克隆得到500bp的片段F4；把中获得的四个重组片段通过重叠延伸的方法组装成重组片段F1-F2-F3-F4，以大肠杆菌SyBE-002447菌株为底盘细胞，利用λred同源重组的方法整合F1-F2-F3-F4片段到SyBE-002447菌株的染色体上，然后从染色体上丢失氯霉素抗性基因，得到重组菌株SyBE-22001。3.根据权利要求1所述的生产L-酪氨酸的重组工程菌的方法，其特征在于步骤(2)的具体方法是：以步骤(1)中得到的菌株SyBE-22001基因组为模板，以SEQIDNo.11所示序列为上游引物，以SEQIDNo.12所示序列为下游引物，克隆得到500bp的片段F5；设计并化学合成L-酪氨酸合成模块Ptrc-pps-tkt-glk，序列如SEQIDNo.13所示，以该序列为模板，以SEQIDNo.14所示序列为上游引物，以SEQIDNo.15所示序列为下游引物，克隆得到5700bp左右的片段F6；以序列SEQIDNo.6(CHL基因)为模板，以SEQIDNo.16所示序列为上游引物，以SEQIDNo.17所示序列为下游引物，扩增得到1000bp的片段F7；以菌株SyBE-22001基因组为模板，以SEQIDNo.18所示序列为上游引物，以SEQIDNo.19所示序列为下游引物，克隆得到500bp的片段F8；把获得的四个重组片段通过重叠延伸的方法组装构建重组片段F5-F6-F7-F8，利用λred同源重组的方法整合片段F5-F6-F7-F8到SyBE-22001菌株的染色体上，然后从染色体上丢失氯霉素抗性基因，得到重组菌株SyBE-22002。4.根据权利要求1所述的生产L-酪氨酸的重组工程菌的方法，其特征在于步骤(3)的具体方法是：以步骤(2)中得到的菌株SyBE-22002基因组为模板，以SEQIDNo.20所示序列为上游引物，以SEQIDNo.21所示序列为下游引物，克隆得到500bp左右的片段F9；以设计并全化学合成的丹参素合成模块序列SEQIDNo.22(Ptacs-hpaBC-ldh)为模板，以SEQIDNo.23所示序列为上游引物，以SEQIDNo.24所示序列为下游引物，克隆得3600bp左右的片段F10；以序列SEQIDNo.6(CHL基因)为模板，以SEQIDNo.25所示序列为上游引物，以SEQIDNo.26所示序列为下游引物，扩增得到1000bp左右的F11片段；以菌株SyBE-22002基因组为模板，以SEQIDNo.27所示序列为上游引物，以SEQIDNo.28所示序列为下游引物，克隆得到500bp左右的片段F12；把获得的四个重组片段通过重叠延伸的方法组装构建重组片段F9-F10-F11-F12，利用λred同源重组的方法到SyBE-22002菌株的染色体上，丢失氯霉素抗性基因，得到重组的整合菌株SyBE-22011。5.根据权利要求2所述的生产L-酪氨酸的重组工程菌的方法，其特征在于：其中SEQIDNo.1的序列为：5’-GAAGTCGCTGCACCTAAGGAACCGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGG-3’；SEQIDNo.2的序列为：5’-CGCCTTCTCCTGTAGCGTTATCCCGATAT-3’；SEQIDNo.3的序列为：CCCAATACGCAAACCGCCTCTCCACAGCTGATTGCCCTTCACCGCCTGGCCCTGAGAGAGTTGCAGCAAGCGGTCCCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCAATTGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAGATATCAAGCTTACATGCTCTAGAAAAGGAGAATATCATGAATTATCAGAACGACGATTTACGCATCAAAGAAATCAAAGAGTTACTTCCTCCTGTCGCATTGCTGGAAAAATTCCCCGCTACTGAAAATGCCGCGAATACGGTTGCCCATGCCCGAAAAGCGATCCATAAGATCCTGAAAGGTAATGATGATCGCCTGTTGGTTGTGATTGGCCCATGCTCAATTCATGATCCTGTCGCGGCAAAAGAGTATGCCACTCGCTTGCTGGCGCTGCGTGAAGAGCTGAAAGATGAGCTGGAAATCGTAATGCGCGTCTATTTTGAAAAGCCGCGTACCACGGTGGGCTGGAAAGGGCTGATTAACGATCCGCATATGGATAATAGCTTCCAGATCAACGACGGTCTGCGTATAGCCCGTAAATTGCTGCTTGATATTAACGACAGCGGTCTGCCAGCGGCAGGTGAGTTTCTCGATATGATCACCCTACAATATCTCGCTGACCTGATGAGCTGGGGCGCAATTGGCGCACGTACCACCGAATCGCAGGTGCACCGCGAACTGGCATCAGGGCTTTCTTGTCCGGTCGGCTTCAAAAATGGCACCGACGGTACGATTAAAGTGGCTATCGATGCCATTAATGCCGCCGGTGCGCCGCACTGCTTCCTGTCCGTAACGAAATGGGGGCATTCGGCGATTGTGAATACCAGCGGTAACGGCGATTGCCATATCATTCTGCGCGGCGGTAAAGAGCCTAACTACAGCGCGAAGCACGTTGCTGAAGTGAAAGAAGGGCTGAACAAAGCAGGCCTGCCAGCACAGGTGATGATCGATTTCAGCCATGCTAACTCGTCCAAACAATTCAAAAAGCAGATGGATGTTTGTGCTGACGTTTGCCAGCAGATTGCCGGTGGCGAAAAGGCCATTATTGGCGTGATGGTGGAAAGCCATCTGGTGGAAGGCAATCAGAGCCTCGAGAGCGGGGAGCCGCTGGCCTACGGTAAGAGCATCACCGATGCCTGCATCGGCTGGGAAGATACCGATGCTCTGTTACGTCAACTGGCGAATGCAGTAAAAGCGCGTCGCGGGTAAAAGCTTACATGCTCTAGAAAAGGAGAATATTATGGTTGCTGAATTGACCGCATTACGCGATCAAATTGATGAAGTCGATAAAGCGCTGCTGAATTTATTAGCGAAGCGTCTGGAACTGGTTGCTGAAGTGGGCGAGGTGAAAAGCCGCTTTGGACTGCCTATTTATGTTCCGGAGCGCGAGGCATCTATTTTGGCCTCGCGTCGTGCAGAGGCGGAAGCTCTGGGTGTACCGCCAGATCTGATTGAGGATGTTTTGCGTCGGGTGATGCGTGAATCTTACTCCAGTGAAAACGACAAAGGATTTAAAACACTTTGTCCGTCACTGCGTCCGGTGGTTATCGTCGGCGGTGGCGGTCAGATGGGACGCCTGTTCGAGAAGATGCTGACCCTCTCGGGTTATCAGGTGCGGATTCTGGAGCAACATGACTGGGATCGAGCGGCTGATATTGTTGCCGATGCCGGAATGGTGATTGTTAGTGTGCCAATCCACGTTACTGAGCAAGTTATTGGCAAATTACCGCCTTTACCGAAAGATTGTATTCTGGTCGATCTGGCATCAGTGAAAAATGGGCCATTACAGGCCATGCTGGTGGCGCATGATGGTCCGGTGCTGGGGCTACACCCGATGTTCGGTCCGGACAGCGGTAGCCTGGCAAAGCAAGTTGTGGTCTGGTGTGATGGACGTAAACCGGAAGCATACCAATGGTTTCTGGAGCAAATTCAGGTCTGGGGCGCTCGGCTGCATCGTATTAGCGCCGTCGAGCACGATCAGAATATGGCGTTTATTCAGGCACTGCGCCACTTTGCTACTTTTGCTTACGGGCTGCACCTGGCAGAAGAAAATGTTCAGCTTGAGCAACTTCTGGCGCTCTCTTCGCCGATTTACCGCCTTGAGCTGGCGATGGTCGGGCGACTGTTTGCTCAGGATCCGCAGCTTTATGCCGACATCATTATGTCGTCAGAGCGTAATCTGGCGTTAATCAAACGTTACTATAAGCGTTTCGGCGAGGCGATTGAGTTGCTGGAGCAGGGCGATAAGCAGGCGTTTATTGACAGTTTCCGCAAGGTGGAGCACTGGTTCGGCGATTACGTGCAGCGTTTTCAGAGTGAAAGCCGCGTGTTATTGCGTCAGGCGAATGACAATCGCCAGTAAAAGCTTACATGCTCTAGAAAAGGAGGAATATCATGGAAACCTATGCTGTTTTTGGTAATCCGATAGCCCACAGCAAATCGCCATTCATTCATCAGCAATTTGCTCAGCAACTGAATATTGAACATCCCTATGGGCGCGTGTTGGCACCCATCAATGATTTCATCAACACACTGAACGCTTTCTTTAGTGCTGGTGGTAAAGGTGCGAATGTGACGGTGCCTTTTAAAGAAGAGGCTTTTGCCAGAGCGGATGAGCTTACTGAACGGGCAGCGTTGGCTGGTGCTGTTAATACCCTCATGCGGTTAGAAGATGGACGCCTGCTGGGTGACAATACCGATGGTGTAGGCTTGTTAAGCGATCTGGAACGTCTGTCTTTTATCCGCCCTGGTTTACGTATTCTGCTTATCGGCGCTGGTGGAGCATCTCGCGGCGTACTACTGCCACTCCTTTCCCTGGACTGTGCGGTGACAATAACTAATCGGACGGTATCCCGCGCGGAAGAGTTGGCTAAATTGTTTGCGCACACTGGCAGTATTCAGGCGTTGAGTATGGACGAACTGGAAGGTCATGAGTTTGATCTCATTATTAATGCAACATCCAGTGGCATCAGTGGTGATATTCCGGCGATCCCGTCATCGCTCATTCATCCAGGCATTTATTGCTATGACATGTTCTATCAGAAAGGAAAAACTCCTTTTCTGGCATGGTGTGAGCAGCGAGGCTCAAAGCGTAATGCTGATGGTTTAGGAATGCTGGTGGCACAGGCGGCTCATGCCTTTCTTCTCTGGCACGGTGTTCTGCCTGACGTAGAACCAGTTATAAAGCAATTGCAGGAGGAATTGTCCGCGTGAACTAGTCCGGCTTATCGGTCAGTTTCACCTGATTTACGTAAAAACCCGCTTCGGCGGGTTTTTGCTTTTGGAGGGGCAGAAAGATGAATGACTGTCCACGACGCTATACCCAAAAGAAACGAGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGA；SEQIDNo.4的序列为：5’-CCCAATACGCAAACCGCCTCTCC-3’；SEQIDNo.5的序列为：5’-TCCCAATACGCAAACCGCCTCTCC-3’；SEQIDNo.6的序列为：GTGTAGGCTGGAGCTGCTTCGAAGTTCCTATACTTTCTAGAGAATAGGAACTTCGGAATAGGAACTTCATTTAAATGGCGCGCCTTACGCCCCGCCCTGCCACTCATCGCAGTACTGTTGTATTCATTAAGCATCTGCCGACATGGAAGCCATCACAAACGGCATGATGAACCTGAATCGCCAGCGGCATCAGCACCTTGTCGCCTTGCGTATAATATTTGCCCATGGTGAAAACGGGGGCGAAGAAGTTGTCCATATTGGCCACGTTTAAATCAAAACTGGTGAAACTCACCCAGGGATTGGCTGAGACGAAAAACATATTCTCAATAAACCCTTTAGGGAAATAGGCCAGGTTTTCACCGTAACACGCCACATCTTGCGAATATATGTGTAGAAACTGCCGGAAATCGTCGTGGTATTCACTCCAGAGCGATGAAAACGTTTCAGTTTGCTCATGGAAAACGGTGTAACAAGGGTGAACACTATCCCATATCACCAGCTCACCGTCTTTCATTGCCATACGTAATTCCGGATGAGCATTCATCAGGCGGGCAAGAATGTGAATAAAGGCCGGATAAAACTTGTGCTTATTTTTCTTTACGGTCTTTAAAAAGGCCGTAATATCCAGCTGAACGGTCTGGTTATAGGTACATTGAGCAACTGACTGAAATGCCTCAAAATGTTCTTTACGATGCCATTGGGATATATCAACGGTGGTATATCCAGTGATTTTTTTCTCCATTTTAGCTTCCTTAGCTCCTGAAAATCTCGACAACTCAAAAAATACGCCCGGTAGTGATCTTATTTCATTATGGTGAAAGTTGGAACCTCTTACGTGCCGATCAACGTCTCATTTTCGCCAAAAGTTGGCCCAGGGCTTCCCGGTATCAACAGGGACACCAGGATTTATTTATTCTGCGAAGTGATCTTCCGTCACAGGTAGGCGCGCCGAAGTTCCTATACTTTCTAGAGAATAGGAACTTCGGAATAGGAACTAAGGAGGATATTCATATGGACCATGGCTAATTCCCAT；SEQIDNo.7的序列为：5’-GGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGAGTGTAGGCTGGAGCTGCTTC-3’；SEQIDNo.8的序列为：5’-GTCTCGAATTTGTATTGAGACGAAATATTAATGGGAATTAGCCATGGTCC-3’；SEQIDNo.9的序列为：5’-TAATATTTCGTCTCAATACAAATTC-3’；SEQIDNo.10的序列为：5’-AGGCCGTGATTAACGCAGCAGCG-3’。6.根据权利要求3所述的生产L-酪氨酸的重组工程菌的方法，其特征在于：其中SEQIDNo.11的序列为：5’-CGGCATTGGCTGGGTCGCGG-3’；SEQIDNo.12的序列为：5’-CGTTAATTACACTCAATCGAGTGCAGGTGAAACTGACCGATAAGCCG-3’；SEQIDNo.13的序列为：CTGCAGCGACTGCACGGTGCACCAATGCTTCTGGCGTCAGGCAGCCATCGGAAGCTGTGGTATGGCTGTGCAGGTCGTAAATCACTGCATAATTCGTGTCGCTCAAGGCGCACTCCCGTTCTGGATAATGTTTTTTGCGCCGACATCATAACGGTTCTGGCAAATATTCTGAAATGAGCTGTTGACAATTAATCATCCGGCTCGTATAATGTGTGGGAGAGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGGAATTCCGGAGATGAAGATCTTATAAGAAGGAGATATACATATGTCCAACAATGGCTCGTCACCGCTGGTGCTTTGGTATAACCAACTCGGCATGAATGATGTAGACAGGGTTGGGGGCAAAAATGCCTCCCTGGGTGAAATGATTACTAATCTTTCCGGAATGGGTGTTTCCGTTCCGAATGGTTTCGCCACAACCGCCGACGCGTTTAACCAGTTTCTGGACCAAAGCGGCGTAAACCAGCGCATTTATGAACTGCTGGATAAAACGGATATTGACGATGTTACTCAGCTTGCGAAAGCGGGCGCGCAAATCCGCCAGTGGATTATCGACACTCCCTTCCAGCCTGAGCTGGAAAACGCCATCCGCGAAGCCTATGCACAGCTTTCCGCCGATGACGAAAACGCCTCTTTTGCGGTGCGCTCCTCCGCCACCGCAGAAGATATGCCGGACGCTTCTTTTGCCGGTCAGCAGGAAACCTTCCTCAACGTTCAGGGTTTTGACGCCGTTCTCGTGGCAGTGAAACATGTATTTGCTTCTCTGTTTAACGATCGCGCCATCTCTTATCGTGTGCACCAGGGTTACGATCACCGTGGTGTGGCGCTCTCCGCCGGTGTTCAACGGATGGTGCGCTCTGACCTCGCATCATCTGGCGTGATGTTCTCCATTGATACCGAATCCGGCTTTGACCAGGTGGTGTTTATCACTTCCGCATGGGGCCTTGGTGAGATGGTCGTGCAGGGTGCGGTTAACCCGGATGAGTTTTACGTGCATAAACCGACACTGGCGGCGAATCGCCCGGCTATCGTGCGCCGCACCATGGGGTCGAAAAAAATCCGCATGGTTTACGCGCCGACCCAGGAGCACGGCAAGCAGGTTAAAATCGAAGACGTACCGCAGGAACAGCGTGACATCTTCTCGCTGACCAACGAAGAAGTGCAGGAACTGGCAAAACAGGCCGTACAAATTGAGAAACACTACGGTCGCCCGATGGATATTGAGTGGGCGAAAGATGGCCACACCGGTAAACTGTTCATTGTGCAGGCGCGTCCGGAAACCGTGCGCTCACGCGGTCAGGTCATGGAGCGTTATACGCTGCATTCACAGGGTAAGATTATCGCCGAAGGCCGTGCTATCGGTCATCGCATCGGTGCGGGTCCGGTGAAAGTCATCCATGACATCAGCGAAATGAACCGCATCGAACCTGGCGACGTGCTGGTTACTGACATGACCGACCCGGACTGGGAACCGATCATGAAGAAAGCATCTGCCATCGTCACCAACCGTGGCGGTCGTACCTGTCACGCGGCGATCATCGCTCGTGAACTGGGCATTCCGGCGGTAGTGGGCTGTGGAGATGCAACAGAACGGATGAAAGACGGTGAGAACGTCACTGTTTCTTGTGCCGAAGGTGATACCGGTTACGTCT...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵广荣，周亮，丁琦，王海燕，
申请(专利权)人：天津大学前沿技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12