一种可同时标记细胞核的封片剂的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种可同时标记细胞核的封片剂的制备方法，包含如下步骤：1)配制1mol/L Trizma Base；2)配制1mol/L NaH2PO4·2H2O；3)配制Tris‑磷酸盐缓冲液；4)配制50%甘油；5)封片剂配制。本发明专利技术制备的可同时标记细胞核的封片剂，省去了染色和洗涤的步骤，能有效简化实验流程，节约时间成本，提高工作效率。该封片剂可用于冰冻切片、石蜡切片、细胞爬片和血液涂片等样本的细胞核标记及封片。该封片剂不仅可以用于荧光显微镜的观察，也可用于激光共聚焦显微镜的观察。

【技术实现步骤摘要】
一种可同时标记细胞核的封片剂的制备方法
本专利技术涉及生物医学，具体为一种可同时标记细胞核的封片剂的制备方法。
技术介绍
在生物医学实验中，经常需要用荧光染料对细胞和组织中的特异成分进行染色，然后在荧光显微镜下观察。并且，几乎所有样本的荧光标记都会对细胞核进行染色。目前普遍采用的实验方法是依次对细胞中的特异成分和细胞核进行标记，用封片剂封片后，在荧光显微镜下观察。每一种荧光标记后都需要多次洗涤，步骤繁琐，也耗费不少时间。由于荧光容易淬灭，荧光标记操作时间越短越好，因此很有必要找到一种缩短荧光染色的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述
技术介绍
困难，提供一种可同时标记细胞核的封片剂的制备方法。为达到上述目的，采用的技术方案为：一种可同时标记细胞核的封片剂的制备方法，包含如下步骤：1).配制1mol/LTrizmaBase：取12.11gTrizmaBase溶于100ml去离子水，备用；2).配制1mol/LNaH2PO4·2H2O：取15.62gNaH2PO4·2H2O溶于100ml去离子水，备用；3).配制Tris-磷酸盐缓冲液：取1mol/LTrizmaBase50ml，用1mol/LNaH2PO4·2H2O调节pH至7.6，备用；4).配制50%甘油：取甘油100ml，加入100ml去离子水，充分混匀，高压灭菌，备用；5).封片剂配制：a.取上述配制好的Tris-磷酸盐缓冲液5ml和75ml去离子水充分混合；b.向步骤a制备的混合溶液中加入20g聚乙烯醇，充分搅拌混合，用保鲜膜密封，放置60℃水浴过夜；c.取三氯叔丁醇100mg与50%甘油30ml充分搅拌混合；d.取DAPI0.1mg加入步骤c的溶液中，充分混匀；e.将步骤d溶液缓慢加入步骤b溶液中，一边加一边混匀；f.混合后的液体用保鲜膜密封，并用锡箔纸包裹避光，4℃保存，即成。上述步骤5）b中，聚乙烯醇的醇解度为87%-90%，分子量为30,000-70,000。采用上述方案的有益效果为：本专利技术制备的可同时标记细胞核的封片剂，省去了染色和洗涤的步骤，能有效简化实验流程，节约时间成本，提高工作效率。该封片剂可用于冰冻切片、石蜡切片、细胞爬片和血液涂片等样本的细胞核标记及封片。该封片剂不仅可以用于荧光显微镜的观察，也可用于激光共聚焦显微镜的观察。具体实施方式下面结合实施例进一步介绍本专利技术，但本专利技术不仅限于下述实施例，可以预见本领域技术人员在结合现有技术的情况下，实施情况可能产生种种变化。一种可同时标记细胞核的封片剂的制备方法，包含如下步骤：1).配制1mol/LTrizmaBase：取12.11gTrizmaBase溶于100ml去离子水，备用；2).配制1mol/LNaH2PO4·2H2O：取15.62gNaH2PO4·2H2O溶于100ml去离子水，备用；3).配制Tris-磷酸盐缓冲液：取1mol/LTrizmaBase50ml，用1mol/LNaH2PO4·2H2O调节pH至7.6，备用；4).配制50%甘油：取甘油100ml，加入100ml去离子水，充分混匀，高压灭菌，备用；5).封片剂配制：a.取上述配制好的Tris-磷酸盐缓冲液5ml和75ml去离子水充分混合；b.向步骤a制备的混合溶液中加入20g聚乙烯醇，充分搅拌混合，用保鲜膜密封，放置60℃水浴过夜；c.取三氯叔丁醇100mg与50%甘油30ml充分搅拌混合；d.取DAPI0.1mg加入步骤c的溶液中，充分混匀；e.将步骤d溶液缓慢加入步骤b溶液中，一边加一边混匀；f.混合后的液体用保鲜膜密封，并用锡箔纸包裹避光，4℃保存，即成。上述步骤5）b中，聚乙烯醇的醇解度为87%-90%，分子量为30,000-70,000。TrizmaBase是一种生物缓冲剂，Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多重要用途。Tris被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长。Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫（C.elegans）核纤层蛋白（lamin）的中间纤维的形成。Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。此外，Tris还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。Tris也被用作滴定标准物。NaH2PO4·2H2O二水合磷酸二氢钠，是磷酸二氢钠的二水物，为无色至白色结晶或结晶性粉末，易溶于水，几乎不溶于乙醇。100℃失去结晶水后继续加热，则生成酸性焦磷酸钠。磷酸二氢钠中文别名：磷酸二氢钠(无水)；磷酸二氢钠,无水；磷酸一钠；无水磷酸二氢钠；磷酸二氢钠无水；MSP。英文名称：sodiumdihydrogenphosphateanhydrous，英文别名：Sodiumphosphatemonobasicdihydrate，Acidsodiumphosphate，Monosodiumorthophosphate，Primarysodiumphosphate，Sodiumdihydrogenphosphate，Sodiumbiphosphate，Monosodiumphosphate，MSP。CAS号：7558-80-7。化学式及相对分子质量：NaH2PO4，119.98，无色结晶或白色结晶性粉末。无臭，味咸，酸。热至100℃失去全部结晶水，灼热变成偏磷酸钠。易溶于水，几乎不溶于乙醇，其水溶液呈酸性。0.1mol/L水溶液在25℃时的pH为4.5。相对密度1.915。熔点60℃。商品也有一分子结晶水的。常用于缓冲剂，软水剂。制造六偏磷酸钠和焦磷酸钠。测定镁。单倍体育种中配制改良怀特培养基。DAPI（4'6-二脒基-2-苯基吲哚）英文名称：DAPI；4,6-Diamidino-2-phenylindoledihydrochloride。分子式：C16H15N5，分子量：277.324。可用于细胞核染色的试剂。是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB（ethidiumbromide）相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。在荧光显微镜观察下，DAPI染剂利用紫外光波长的光线激发。当DAPI与双股DNA结合时，最大吸收波长为358nm，最大发射波长为461nm，其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。DAPI也可以和RNA结合，但产生的荧光强度不及与DNA结合的结果，其发散光的波长范围约在500nm左右。本专利技术制备的可同时标记细胞核的封片剂，省去了染色和洗涤的步骤，能有效简化实验流程，节约时间成本，提高工作效率。该封片剂可用于冰冻切片、石蜡切片、细胞爬片和血液涂片等样本的细胞核标记及封片。该封片剂不仅可以用于荧光显微镜的观察，也可用于激光共聚焦显微镜的观察。。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可同时标记细胞核的封片剂的制备方法，其特征是，包含如下步骤：1). 配制1mol/L Trizma Base：取12.11g Trizma Base溶于100ml去离子水，备用；2). 配制1mol/L NaH2PO4·2H2O：取15.62g NaH2PO4·2H2O溶于100ml去离子水，备用；3). 配制Tris‑磷酸盐缓冲液：取1mol/L Trizma Base 50ml，用1mol/L NaH2PO4·2H2O调节pH至7.6，备用；4). 配制50%甘油：取甘油100ml，加入100ml去离子水，充分混匀，高压灭菌，备用；5). 封片剂配制：a. 取上述配制好的Tris‑磷酸盐缓冲液5ml和75ml去离子水充分混合；b. 向步骤a制备的混合溶液中加入20g聚乙烯醇，充分搅拌混合，用保鲜膜密封，放置60℃水浴过夜；c. 取三氯叔丁醇100mg与50%甘油30ml充分搅拌混合；d. 取DAPI 0.1mg加入步骤c的溶液中，充分混匀；e. 将步骤d溶液缓慢加入步骤b溶液中，一边加一边混匀；f. 混合后的液体用保鲜膜密封，并用锡箔纸包裹避光，4℃保存，即成。

【技术特征摘要】
1.一种可同时标记细胞核的封片剂的制备方法，其特征是，包含如下步骤：1).配制1mol/LTrizmaBase：取12.11gTrizmaBase溶于100ml去离子水，备用；2).配制1mol/LNaH2PO4·2H2O：取15.62gNaH2PO4·2H2O溶于100ml去离子水，备用；3).配制Tris-磷酸盐缓冲液：取1mol/LTrizmaBase50ml，用1mol/LNaH2PO4·2H2O调节pH至7.6，备用；4).配制50%甘油：取甘油100ml，加入100ml去离子水，充分混匀，高压灭菌，备用；5).封片剂配制：a.取上述...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨明理，何波，
申请(专利权)人：遵义医学院，
类型：发明
国别省市：贵州,52