皮肤细胞喷雾及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种皮肤细胞喷雾及其制备方法。本发明专利技术的皮肤细胞喷雾的制备方法包括：制备营养液、高分子悬液和混合细胞悬液；将上述的营养液、高分子悬液、混合细胞悬液中的一种或几种按照一定比例混合。本发明专利技术的皮肤细胞喷雾由上述的皮肤细胞喷雾的制备方法制得，所述皮肤细胞喷雾按照喷涂扩张面积与所述皮肤损伤面积的一定比例进行喷涂，具有细胞存活率高和存活时间较长，原位喷涂，操作简单等特点。

Skin cell spray and its preparation methods

The present invention provides a skin cell spray and a preparation method. The preparation method of the skin cell spray includes: preparing nutrient solution, polymer suspension and mixed cell suspension; mixing one or more of the above nutrient solution, polymer suspension and mixed cell suspension in a certain proportion. The invention of the spray skin cells from skin cells. Spray the preparation method, the skin cells in a certain proportion and sprayed spray expansion and the skin damage area of spraying, with high cell survival rate and survival time longer, in situ spraying, simple operation etc..

【技术实现步骤摘要】
皮肤细胞喷雾及其制备方法
本专利技术涉及生物医用材料领域，尤其涉及一种应用于皮肤组织损伤修复领域的皮肤细胞喷雾及其制备方法。
技术介绍
皮肤是人体最大，也是最重要的器官之一，烧烫伤治疗是临床外科手术最重要的领域之一。创面烧伤程度一般分四级：浅度、浅二度、深二度和三度，浅层皮肤缺损后，随着表皮细胞增殖、分化和迁移，皮肤得以再生修复。如果是深度(深二度和三度)烧伤患者，创面的修复常需要通过各种皮片移植手术才能完成。深度烧伤创面的修复目前主要采用“拆东墙补西墙”的自体皮片移植，如深度烧伤创面面积不大，供皮区较充足，可采用自体大张皮或网状皮移植，创面愈合后瘢痕增生较轻，外观和功能较理想。尽管该方法成功救治了许多大面积深度烧伤患者，但是也带来了诸多问题：一是：创面修复时间过长，增加了医疗费用，且在漫长的创面修复过程中常发生感染、器官功能不全等并发症，甚至危及生命；二是：由于缺乏真皮层，移植自体表皮后，即使病人能得到及时救治完成创面的封闭，但后期会出现瘢痕挛缩畸形和功能障碍，是一个目前亟待攻克的难题。为了解决临床上治疗深度烧伤、瘢痕整形患者的需求，异体真皮和人工皮肤产品孕育而生。由于异体皮肤涉及病毒传染风险、伦理问题、社会观念、来源限制等多重因素，异体皮肤在临床使用中受到极大的限制，而且价格及其昂贵。人工皮肤替代物被用于深度烧伤真皮修复，并取得良好的治疗效果。目前市场上的人工皮肤有：等产品。然而仍然存在诸多问题。如移植成活率较低，制备周期长，不易储存运输，大面积组织工程皮肤制备技术尚未解决等问题尚未解决。干细胞治疗技术是组织工程的一大飞跃，是生物材料与细胞协同作用修复缺损组织的一大进步。在治疗皮肤损伤方面，干细胞治疗法是一种完美治愈皮肤缺损的新兴手段，可以替代目前市场上的人工皮肤，并具有显著的优势。如干细胞通过分泌一些生物活性因子，诱导体内成纤维细胞和血管内皮细胞等修复细胞的迁移、浸入和增殖，可以永久性修复创面，尤其是瘢痕少、挛缩小、触感柔软、活动度好、无功能障碍。目前细胞治疗方法一般采用干细胞与生物材料支架协同作用治疗。目前支架主要有两大类：一类是人工合成的真皮支架，另一类是基因天然材料的人工真皮支架。然而此类方法对支架材料的性能具有较高的要求，如孔径，力学性能，材料的韧性，生物相容性等，并且具有手术操作复杂，活动度差，材料价格昂贵等缺陷。
技术实现思路
鉴于上述状况，本专利技术提供一种应用于皮肤组织损伤修复领域的皮肤细胞喷雾及其制备方法。一种皮肤细胞喷雾的制备方法，其包括如下步骤：A.配置营养液，所述营养液为乳酸盐溶液、细胞培养基混合溶液、生长因子中的两种或几种组合；B.配置高分子悬液，所述高分子悬液中的高分子为透明质酸钠、胶原、明胶、硫酸软骨素、海藻酸钠、丝素蛋白、壳聚糖、多肽中的一种或几种组合；C.制备混合细胞悬液，选取真皮干细胞、表皮干细胞、骨髓间充质干细胞、祖细胞、毛囊干细胞、造血干细胞、脂肪干细胞、角质细胞、成纤维母细胞、T细胞、脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、羊水间充质干细胞中的一种或者几种组合，置于培养皿中，加入细胞特定的培养基，制得所述混合细胞悬液；D.制备皮肤细胞喷雾，将步骤A、B、C中所得的营养液、高分子悬液、混合细胞悬液中的一种或几种混合，制得所述皮肤细胞喷雾并置于喷雾装置内。优选地，所述乳酸盐溶液由氯化钠、乳酸钠、氯化钙、氯化钾及注射用水组成，所述氯化钠的浓度为0.05-0.15mol/L，所述乳酸钠的浓度为0.02-0.03mol/L，所述氯化钙的浓度为0.001-0.002mol/L，所述氯化钾的浓度为0.001-0.005mol/L，所述乳酸盐溶液pH值为6.0-7.5。优选地，所述细胞培养基混合溶液由选取DMEM细胞培养基、RPMI1640细胞培养基、MEM细胞培养基、1640细胞培养基、DMEM/F12细胞培养基、IMDM细胞培养基、McCoy5A细胞培养基、KSFM细胞培养基中的一种或几种组合，再添加血清蛋白和青霉素/链霉素混合溶液，或生长因子中的一种或几种组合而获得，所述生长因子的浓度为0.5-10ng/mL。所述青霉素/链霉素混合溶液为双抗溶液。优选地，所述生长因子由碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、转化生长因子、血小板衍生生长因子、血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、胰岛素生长因子中的一种或几种构成。优选地，所述配置高分子悬液包括：用溶剂溶解所述高分子，所述溶剂为醋酸、丙二酸、水或所述营养液中的一种；用氢氧化钠，或盐酸,或醋酸，或醋酸钠调节溶液的pH值，直至溶液出现微小颗粒状高分子聚集体或高分子微小纤维。优选地，通过用溶剂溶解高分子得到的壳聚糖溶液的浓度为0.5-20mg/mL，丝素蛋白溶液的浓度为0.1-10mg/mL，胶原蛋白溶液的浓度为0.1-10mg/mL，多肽溶液的浓度为0.1-20mg/mL，透明质酸钠溶液的浓度为0.1-30mg/mL，海藻酸钠溶液的浓度为0.1-30mg/mL，硫酸软骨素溶液的浓度为0.1-25mg/mL。优选地，所述壳聚糖溶液的pH值为4.0-6.5，分子量为1万-30万道尔顿(Dalton,Da)；所述丝素蛋白溶液的pH值为5.2-7.4；所述胶原蛋白溶液的pH值6.5-7.8；所述多肽溶液的pH值为5.5-7.5，分子量为0.5-1Da；所述透明质酸钠溶液的pH值为6.5-7.4，分子量为800-20000Da；所述海藻酸钠溶液的pH值为6.5-7.4，分子量为7.5万-10万Da，D-古罗糖醛酸的含量大于60％；所述硫酸软骨素溶液的pH为6.5-7.4，分子量为1000-50000Da。优选地，所述氢氧化钠的浓度为0.01-1mol/L，所述盐酸的浓度为0.01-1mol/L，所述醋酸的浓度为0.01-0.5mol/L，所述醋酸钠的浓度为0.01-0.5mol/L。优选地，所述高分子悬液中的高分子颗粒的大小为20-500微米。优选地，所述混合细胞悬液中的细胞是自体组织提取。优选地，所述混合细胞悬液中的细胞数目为1×105-2×107个/mL，检测细胞存活率为80％-100％。优选地，所述营养液、高分子悬液、混合细胞悬液、皮肤细胞喷雾制剂的制备均在无菌条件下进行，材料选择医用级，溶液选择注射级。一种皮肤细胞喷雾，所述皮肤细胞喷雾由以上描述的皮肤细胞喷雾的制备方法制得。一种皮肤细胞喷雾的应用方法，将皮肤细胞喷雾按照喷涂扩张面积与所述皮肤损伤面积的一定比例进行喷涂，所述的一定比例为1:10-1:50。由于本专利技术的皮肤细胞喷雾是由混合细胞悬液与营养液和高分子悬液混合制得，所述混合细胞悬液中含有干细胞，所述营养液中含有细胞培养基混合液，所以本专利技术的皮肤细胞具有以下优点：(1)细胞存活率高，且存活时间较长，具有良好的可注射性，通过喷涂的方式，将皮肤细胞喷雾喷射于皮肤损伤部位，操作简单；(2)永久性修复创面，尤其是瘢痕少、挛缩小、触感柔软、活动度好、无功能障碍。由于所述混合细胞悬液中的干细胞从自体组织中提取，所以本专利技术的皮肤细胞喷雾可以避免动物源性。具体实施方式：为使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，以进一步阐述本专利技术。显然，所描述的实施例仅是本专利技术的一部本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种皮肤细胞喷雾的制备方法，其包括如下步骤：A.配置营养液，所述营养液为乳酸盐溶液、细胞培养基混合溶液、生长因子中的两种或几种组合；B.配置高分子悬液，所述高分子悬液中的高分子为透明质酸钠、胶原、明胶、硫酸软骨素、海藻酸钠、丝素蛋白、壳聚糖、多肽中的一种或几种组合；C.制备混合细胞悬液，选取真皮干细胞、表皮干细胞、骨髓间充质干细胞、祖细胞、毛囊干细胞、造血干细胞、脂肪干细胞、角质细胞、成纤维母细胞、T细胞、脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、羊水间充质干细胞中的一种或者几种组合，置于培养皿中，加入细胞特定的培养基，制得所述混合细胞悬液；D.制备皮肤细胞喷雾制剂，将步骤A、B、C中所得的营养液、高分子悬液、混合细胞悬液中的一种或几种混合形成制剂。

【技术特征摘要】
1.一种皮肤细胞喷雾的制备方法，其包括如下步骤：A.配置营养液，所述营养液为乳酸盐溶液、细胞培养基混合溶液、生长因子中的两种或几种组合；B.配置高分子悬液，所述高分子悬液中的高分子为透明质酸钠、胶原、明胶、硫酸软骨素、海藻酸钠、丝素蛋白、壳聚糖、多肽中的一种或几种组合；C.制备混合细胞悬液，选取真皮干细胞、表皮干细胞、骨髓间充质干细胞、祖细胞、毛囊干细胞、造血干细胞、脂肪干细胞、角质细胞、成纤维母细胞、T细胞、脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、羊水间充质干细胞中的一种或者几种组合，置于培养皿中，加入细胞特定的培养基，制得所述混合细胞悬液；D.制备皮肤细胞喷雾制剂，将步骤A、B、C中所得的营养液、高分子悬液、混合细胞悬液中的一种或几种混合形成制剂。2.如权利要求1所述的皮肤细胞喷雾的制备方法，其特征在于，所述生长因子由碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、转化生长因子、血小板衍生生长因子、血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、胰岛素生长因子中的一种或几种构成。3.如权利要求1所述的皮肤细胞喷雾的制备方法，其特征在于，所述配置高分子悬液包括：用溶剂溶解所述高分子，所述溶剂为醋酸、丙二酸、水或所述营养液中的一种；用氢氧化钠，或盐酸，或醋酸，或醋酸钠调节溶液的pH值，直至溶液出现微小颗粒状高分子聚集体或高分子微小纤维。4.如权利要求3所述的皮肤细胞喷雾的制备方法，其特征在于，通过用溶剂溶解所述高分子得到的壳聚糖溶液的浓度为0.5-20mg/mL，丝素蛋白溶液的浓度为0.1-10mg/mL，胶原蛋白溶液的浓度为0.1-10mg/mL，多肽溶液的浓度为0.1-20mg/mL，透明质酸钠溶液的浓度为0.1-30mg/mL，海藻酸钠溶液的浓度为0.1-30mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：李小丽，陈昌盛，刘伟强，
申请(专利权)人：深圳清华大学研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44