二苯乙烯苷降低DNA甲基化酶3a表达水平的新功能制造技术

二苯乙烯苷是来自于中药材何首乌的重要活性成分。本申请介绍二苯乙烯苷的一种新功能，通过其对神经细胞系的作用实验，我们发现二苯乙烯苷的加入能够降低DNMT3A基因的表达水平。DNMT3A是造成DNA甲基化的关键酶，而DNA甲基化是表观遗传学的重要组成部分，其变化表征神经系统对二苯乙烯苷做出了全局性的应激反应。

Two styrene glycoside reduces the new function of DNA methylation enzyme 3A expression level

Two styrene glycoside is an important active ingredient from Radix Polygoni Multiflori. This application introduces a new function of two styrene glycoside. Through its action experiments on nerve cell lines, we find that the addition of two styrene glucoside can reduce the expression level of DNMT3A gene. DNMT3A is the key enzyme to cause DNA methylation, and DNA methylation is an important part of epigenetics. Its change indicates that the nervous system has made a global stress response to two styrene glycoside.

【技术实现步骤摘要】
二苯乙烯苷降低DNA甲基化酶3a表达水平的新功能
本申请属于药材活性成分新功能的
，尤其涉及于一种分离于中药材何首乌的活性成分可降低神经细胞DNMT3A基因表达水平的新功能。
技术介绍
蛋DNA甲基转移酶3，即DNMT3A，是一种催化DNA胞嘧啶甲基化的关键酶。DNA甲基化是生命体感受外界输入信号、调控结构基因表达的重要修饰手段，是表观遗传学的主要范畴之一。DNMT3A在维持DNA甲基化特征及DNA的复制修复方面都有重要的作用。在不同的生理病理背景下，DNMT3A表达量的改变指示着目标基因的整体改变，体现出机体整体上的适应性或损伤性变化。何首乌作为传统滋补类中药，使用历史悠久，且临床药效广泛。何首乌主要含有蒽醌类、二苯乙烯苷类、黄酮类、多糖、卵磷脂、鞣质、微量元素等化学成分，其中二苯乙烯苷被认为是其最重要的水溶性活性物质，已经成为何首乌质量控制的专属指标。研究表明，何首乌具有抗氧化、抗衰老、心肌保护作用等方面的药理作用，但同时也有引起肝细胞损伤等方面的毒性作用。但何首乌活性成分，尤其是二苯乙烯苷对中枢神经系统的功能作用目前报道较少。
技术实现思路
何首乌为常用中药材，其购自安徽省中医院药房。二苯乙烯苷标准品购自上海生工有限公司。何首乌活性成分的分离过程为：称取5.0g何首乌药材打成粗粉，置于圆底烧瓶中，用75ml的70％乙醇超声提取30min，超声结束后抽滤，滤渣再加75ml的70％乙醇超声提取30min，超声结束后抽滤。合并滤液，浓缩至5ml。利用高速逆流色谱进行进一步纯化。将试剂按照比例正己烷：乙酸乙酯：乙醇：水＝1：50：1：50置于分液漏斗中充分震荡，静置分层，上层作为固定相，下层作为流动相。主机转速800r/min，顺时针旋转，紫外检测波长为280nm。进样量1mL(样品浓度按生药算1g/mL)，根据色谱图手动收集各色谱峰组分。经比较，何首乌活性成分主要为二苯乙烯苷。所购得二苯乙烯苷的分子式为：因此，我们以二苯乙烯苷标准品作为研究对象来进行后续的神经系统功能试验。二苯乙烯苷的生理活性检测：SH-SY5Y细胞为本领域常用神经细胞系，购自上海赛齐生物。培养条件为37℃5％水平的二氧化碳。培养至36h时，向其中三孔的培养细胞加入终浓度为100μM的二苯乙烯苷，另外三孔加入同样体积的无菌水作为对照组。继续培养至96h时，回收细胞。使用本领域常规的技术手段提取细胞中总mRNA、反转录为cDNA，并使用Cycle480(Roche)荧光定量PCR仪(使用SybrGreen染料)对Pkn1的表达量进行定量分析。所使用的PCR条件为：95℃预变性5min，然后是95℃10s，60℃10s，72℃30s扩增共40个循环。所使用的引物为：上游tccccaatcccttgcagagg；下游atcttggtcttactatcctgc。所获得的定量数值为Pkn1表达量与内参基因GAPDH的相对比值。实验组和对照组所获得的mRNA相对定量结果如图1所示。从图1中可以看出，经过二苯乙烯苷的处理，Pkn1基因的表达量有所下降，其表达量为对照组的0.8倍。本申请证明了何首乌活性成分二苯乙烯苷对凋亡相关信号转导通路的调节作用，该结果意味着二苯乙烯苷可以对生理逆境造成的细胞凋亡倾向有抑制作用，有利于对细胞凋亡信号分子的精细变化的研究。附图说明图1二苯乙烯苷的添加导致神经细胞系DNMT3AmRNA表达水平的变化。Control指对照组；substance’saddition指二苯乙烯苷处理组；纵坐标为DNMT3A相对GAPDH的mRNA表达水平。具体实施方式实施例1二苯乙烯苷的生理活性检测过程为：培养条件为37℃5％水平的二氧化碳。培养至36h时，向其中三孔的培养细胞加入终浓度为100μM的二苯乙烯苷，另外三孔加入同样体积的无菌水作为对照组。继续培养至96h时，回收细胞。使用本领域常规的技术手段提取细胞中总mRNA、反转录为cDNA，并使用Cycle480(Roche)荧光定量PCR仪(使用SybrGreen染料)对DNMT3A的表达量进行定量分析。所使用的PCR条件为：95℃预变性5min，然后是95℃10s，60℃10s，72℃30s扩增共40个循环。所使用的引物为：上游AGGATGGCCGGGGCTTTGGC；下游GCTTTGCGGTACATGGGCTG。所获得的定量数值为DNMT3A表达量与内参基因GAPDH的相对比值。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离于何首乌的活性成分，其特征在于，其分子化学本质为二苯乙烯苷。

【技术特征摘要】
1.一种分离于何首乌的活性成分，其特征在于，其分子化学本质为二苯乙烯苷。2.一种二苯乙烯苷的新功能，其特征在于，该成分的加入可促使...

【专利技术属性】
技术研发人员：高宁馨，张松影，徐晓莉，
申请(专利权)人：安徽古尔特科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34