The invention discloses a purification method of hydrophobic column he d effects based on the specific steps are as follows: S1: will ulinastatin Ding Cu products and pure water dissolved in a beaker, then add to the amount of salt in the beaker, and control the pH of the solution in a beaker of pH 5 6, 60min put stirring 150min on a magnetic stirrer, and mesh filter, get the deposit reserve. S2: the hydrophobic column washed and dried, fixed on the operating table, take steps in the preparation of S1 precipitate dissolved in deionized water 2 times 1 mixed evenly, followed by the upper end of the hydrophobic column after adding 1 2H homogeneous reaction, then adding 1 salt buffer 2mol/L cleaning. The invention was found after the test yield above 82% on average, after purification of ulinastatin purity as high as 99.90%, for at least 5100U/mg protein specific activity, and the shape is a colorless liquid, can meet the requirements of national standards, the purification process is simple and feasible, and it is worth popularizing.
【技术实现步骤摘要】
一种基于疏水柱的乌司他丁纯化方法
本专利技术涉及生物
,具体为一种基于疏水柱的乌司他丁纯化方法。
技术介绍
乌司他丁是从健康成年男性新鲜尿液中分离纯化出来的一种酸性糖蛋白,是一种广谱的蛋白酶抑制剂,主要在肝脏中合成,由肾脏代谢随尿液排出,且其分解形成的低分子量成分也具有很强的抑制水解酶的作用。乌司他丁由143个氨基酸组成,相对分子质量约37000~43000,属于蛋白酶抑制剂,对胰蛋白酶、α-糜蛋白酶等丝氨酸蛋白酶及粒细胞弹性蛋白酶、透明质酸酶、巯基酶、纤溶酶等多种酶有抑制作用,还具有稳定溶酶体膜、抑制溶酶体酶的释放、抑制心肌抑制因子(MDF)产生、清除氧自由基及抑制炎症介质释放的作用。乌司他丁还可改善手术刺激引起的免疫功能下降、蛋白代谢异常。中国专利授权公开号:CN103864922B公开的一种亲和层析纯化乌司他丁的方法。具体的说,就是以健康成年男性新鲜尿液为原料,经过甲壳质吸附、氨水洗脱、硫酸铵盐析、吸附柱层析以及亲和层析等现代蛋白质高端生化分离技术来制备高纯度的乌司他丁,可以将总收率提高到70%以上,总效价不低于5000iu/mg。但是,采用该方法纯化后的乌司他丁,在纯化工艺的过程中分别加入甲质壳、氨水、硫酸铵、五氧化二磷、洗脱液A和洗脱液B等化学试剂,不利于得到较纯净的乌司他丁,且有可能对乌司他丁的内部结构造成损害等问题。中国专利授权公开号:CN103880951B公开了一种通过乌司他丁亲和层析介质制备纯品乌司他丁的方法,此层析介质由乌司他丁亲和配体和普通层析介质连接而成。其亲和配体为聚赖氨酸3000,普通层析介质是Sephadex,亲和配体 ...
【技术保护点】
一种基于疏水柱的乌司他丁纯化方法,其特征在于,具体步骤如下:S1:将乌司他丁粗制品和纯净水一起溶解在烧杯中,接着往烧杯中加入适量的盐类,并控制烧杯中溶液的酸碱度pH 5‑6之间,放在磁力搅拌器上均匀搅拌60min‑150min,并用滤网进行过滤,得到沉淀物,备用。S2:把疏水柱清洗后并烘干,固定在操作台上,取S1步骤中制备的沉淀物溶解于1‑2倍的去离子水中混合均匀后,依次在疏水柱的上端均匀加入后反应1‑2h,接着,加入1‑2mol/L的盐类缓冲液进行清洗。S3:接着,再用低浓度的缓冲液进行清洗后过滤,得到乌司他丁的样品,最后,把乌司他丁的样品放入冷冻机中进行冷冻直至冻干。S4:把S2中用好的疏水柱用一定浓度的尿素缓冲溶液进行清洗,接着用平衡缓冲液进行清洗后,进行烘干备用。
【技术特征摘要】
1.一种基于疏水柱的乌司他丁纯化方法,其特征在于,具体步骤如下:S1:将乌司他丁粗制品和纯净水一起溶解在烧杯中,接着往烧杯中加入适量的盐类,并控制烧杯中溶液的酸碱度pH5-6之间,放在磁力搅拌器上均匀搅拌60min-150min,并用滤网进行过滤,得到沉淀物,备用。S2:把疏水柱清洗后并烘干,固定在操作台上,取S1步骤中制备的沉淀物溶解于1-2倍的去离子水中混合均匀后,依次在疏水柱的上端均匀加入后反应1-2h,接着,加入1-2mol/L的盐类缓冲液进行清洗。S3:接着,再用低浓度的缓冲液进行清洗后过滤,得到乌司他丁的样品,最后,把乌司他丁的样品放入冷冻机中进行冷冻直至冻干。S4:把S2中用好的疏水柱用一定浓度的尿素缓冲溶液进行清洗,接着用平衡缓冲液进行清洗后,进行烘干备用。2.根据权利要求1所述的一种基...
【专利技术属性】
技术研发人员:郑少亮,王旭,肖益热,
申请(专利权)人:广东天普生化医药股份有限公司,
类型:发明
国别省市:广东,44
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