靶点PTP‑1B寡肽抑制剂制造技术

本发明专利技术属于寡肽药物领域，目的在于提供三类具有特征C端氨基酸的寡肽类PTP‑1B的抑制剂，结构如通式(I)，其C端特征氨基酸分别可为Trp，Asp，Glu，其后可连接1‑5个天然氨基酸残基。所述化合物在活性实验中显示了对蛋白酪氨酸磷酸酶1B的良好的抑制活性。

Target PTP 1B peptide inhibitor

The invention belongs to the field of oligopeptide, aims to provide three kinds of terminal amino acid inhibitor PTP 1B oligopeptides with the characteristics of C, such as the structure of general formula (I), the C terminal characteristics of amino acids respectively Trp, Asp, Glu, it can connect 1 5 natural amino acid residues. The compounds showed good inhibitory activity to protein tyrosine phosphatase 1B in the activity test.

【技术实现步骤摘要】
靶点PTP-1B寡肽抑制剂一、
：本专利技术属于寡肽药物领域，具体的涉及三类具有特征C端氨基酸的寡肽类PTP-1B抑制剂。二、
技术介绍
：与人类重大疾病相关的药物靶标的发现及其药物的研发是疾病治疗研究中的重要环节。蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)家族在体内信号转导过程中扮演重要的角色，蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(PTP-1B)是PTP中最具有代表性的一种酶，与蛋白酪氨酸激酶(PTK)共同维持酪氨酸磷酸化的平衡，调节细胞生长、分化、基因转录、免疫应答等过程。对胰岛素的信号转导具有负调节的作用，其过表达可降低PTK的活性，使胰岛素受体和胰岛素无法结合，进而引起胰岛素抵抗，导致糖尿病的发生。另外，对小鼠进行PTP-1B基因敲除及反义核苷酸的处理后，小鼠表现出肥胖抵抗的特性及对胰岛素敏感性增强因此，PTP-1B是具有较大潜力的治疗2型糖尿病和肥胖症的新靶点。但是由于较差的亚型选择性及理化性质，目前为止只有两个抑制剂进入临床研究阶段并因为严重的副作用而停止研究。所以研究出性质较好的PTP-1B抑制剂具有重要意义。在本实验室的前期研究中发现，部分天然氨基酸具有对PTP-1B的抑制活性，因此以有效天然氨基酸为起始氨基酸，分别为Trp，Asp，Glu，构建多种类型寡肽，以分子对接为研究技术，虚拟筛选PTP-1B的寡肽类抑制剂。本研究专利技术了三类具有特征C端氨基酸的寡肽类PTP-1B的抑制剂，并进行了抑制PTP-1B的活性实验，结果较好。三、
技术实现思路
本专利技术的目的是提供三种PTP-1B抑制剂。具体地，本专利技术提供三类具有特征C端氨基酸的寡肽类PTP-1B的抑制剂，其C端特征氨基酸分别可为Trp，Asp，Glu，其后可连接1-5个天然氨基酸残基。本专利技术所述虚拟筛选是用DiscoveryStudio2.5中的CDOCKER模块实现的，筛选参考项目为-ECD值和非键相互作用。抑制PTP-1B活性测定方法采用体外酶学实验方法，测定寡肽化合物对PTP-1B的抑制作用。钒酸钠为阳性对照药，磷酸对硝基苯酯(pNPP)为底物，pNPP在PTP-1B的作用下会水解生成黄色的对硝基苯酚pNP，pNP产生的荧光在405nm处有较强吸收峰，可通过测定pNP的生成量来反应化合物对PTP-1B的抑制水平并计算抑制率。四、具体实施方式实施例1：体外活性实验方案反应在96孔板中进行，100μL反应体系，2μL化合物(溶于DMSO)加入10μL酶(10μg/mLPTP1B)和反应缓冲液(Hepes25mM，pH7.5，3mMDTT，0.15MNaCl，1mMEDTA，1mg/mLBSA)，在37℃下反应10分钟，之后加入10μLpNPP(10mM)，37C下反应20分钟，反应通过加入10μLNaOH(10M)终止。在酶标仪中405nm波长下测定OD值，计算抑制率及IC50值。化合物浓度梯度为5mM，3mM，2.6mM，2.5mM，2.4mM，2.3mM，2.2mMand2.1mM。抑制率(100％)＝[1-(Atest-Ablank)/(Acontrol-Ablank)]×100Acontrol指对照组DMSO孔的吸光度，Atest是指实验组孔的吸光度，Ablank是指无酶组孔的吸光度。IC50的计算由SPSS18.0实现。实施例2：虚拟筛选材料及参数设置蛋白晶体结构文件来源于网络数据库PDB，编号为：1Q6M。选用A链作为受体，对受体进行去除水分子、补充缺失残基等处理，用自带配体定义活性口袋。氨基酸及寡肽的构建使用ChemDrawProfessional15.0。所有配体及受体的电荷状态处理为pH值为7的状态。CDOCKER模块执行虚拟筛选，tophits设置为20，randomconformations设置为200。其余参数为默认值。筛选结果参考项目为-ECD值和非键相互作用。实施例3：天然氨基酸的筛选20种天然氨基酸，虚拟筛选选取结果前三的选项，分别为Trp，Asp，Glu。实施例4：以Trp为C端氨基酸的寡肽抑制剂以Trp为C端或N端起始氨基酸建立二肽，结果为C端较好，结果选取Trp-Asp，以Trp-Asp为C端建立三肽，选取Trp-Asp-Glu，以Trp-Asp-Glu构建四肽，选取Trp-Asp-Glu-Glu，以Trp-Asp-Glu-Glu构建五肽，选取Trp-Asp-Glu-Glu-Asp，以Trp-Asp-Glu-Glu-Asp构建六肽，选取Trp-Asp-Glu-Glu-Asp-Ser，以Trp-Asp-Glu-Glu-Asp-Ser构建七肽，结果-ECD值及非键相互作用情况不再增加或优化。故结果选取以Trp为C端氨基酸的六肽化合物，Trp-Asp-Glu-Glu-Asp-Ser(序列号1)，体外活性实验中IC50为3.301mM。实施例5：以Asp为C端氨基酸的寡肽抑制剂以Asp为C端或N端起始氨基酸建立二肽，结果为C端较好，选取Asp-Asp，以Asp-Asp为C端构建三肽，选取Asp-Asp-Glu，以Asp-Asp-Glu构建四肽，选取Asp-Asp-Glu-Glu，以Asp-Asp-Glu-Glu构建五肽，选取Asp-Asp-Glu-Glu-Asp，以Asp-Asp-Glu-Glu-Asp构建六肽，选取Asp-Asp-Glu-Glu-Asp-Asp，以Asp-Asp-Glu-Glu-Asp-Asp构建七肽，结果-ECD值及非键相互作用情况不再增加或优化。故结果选取以Asp为C端氨基酸的六肽化合物，Asp-Asp-Glu-Glu-Asp-Asp(序列号2)，体外活性实验中IC50为2.294mM。实施例6：以Glu为C端氨基酸的寡肽抑制剂以Glu为C端或N端起始氨基酸建立二肽，结果为C端较好，选取Glu-Asp，以Glu-Asp为C端构建三肽，选取Glu-Asp-Glu，以Glu-Asp-Glu构建四肽，选取Glu-Asp-Glu-Glu，以Glu-Asp-Glu-Glu构建五肽，选取Glu-Asp-Glu-Glu-Asp，以Glu-Asp-Glu-Glu-Asp构建六肽，选取Glu-Asp-Glu-Glu-Asp-Glu，以Glu-Asp-Glu-Glu-Asp-Glu构建七肽，结果-ECD值及非键相互作用情况不再增加或优化。故结果选取以Glu为C端氨基酸的六肽化合物，Glu-Asp-Glu-Glu-Asp-Glu(序列号3)，体外活性实验中IC50为2.239mM。序列表文件序列号1～3：人工序列(合成寡肽)本文档来自技高网...

【技术保护点】
如通式(I)的寡肽类PTP‑1B抑制剂：(W/D/E)Xn(I)其特征在于，C端氨基酸残基可为Trp，Asp，Glu中的一个，X指任意天然氨基酸残基，n选自1～5的整数。

【技术特征摘要】
1.如通式(I)的寡肽类PTP-1B抑制剂：(W/D/E)Xn(I)其特征在于，C端氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶小彤，王耘，杜冉峰，余文康，张毅，
申请(专利权)人：北京中医药大学，
类型：发明
国别省市：北京,11