一种可用于制作禽类疫苗的重组杆状病毒的制备方法技术

一种可用于制作禽类疫苗的重组杆状病毒的制备方法，它涉及一种重组杆状病毒的制备方法。它为制作出可防治禽类传染性疾病的重组杆状病毒疫苗奠定了物质基础。其制备方法：（一）构建含有ＣＭＶ－ＩＥ启动子的载体；（二）构建带有ＣＭＶ－ＩＥ启动子和外源基因的重组载体；（三）构建重组杆状病毒，收集病毒粒子测定病毒效价；（四）检测重组杆状病毒外源基因的表达；步骤（三）包括１．重组载体转化ＤＨ１０Ｂａｃ细胞；２．提取重组杆状病毒ＢａｃｍｉｄＤＮＡ；３．ＰＣＲ扩增Ｂａｃｍｉｄ　　ＤＮＡ；４．Ｂａｃｍｉｄ　　ＤＮＡ转染Ｓｆ９细胞，获得重组杆状病毒；５．扩增重组杆状病毒；６．蚀斑试验；７．蚀斑纯化；８．收集重组杆状病毒粒子；９．测定重组杆状病毒效价。本发明专利技术为制作出可防治禽类传染性疾病的重组杆状病毒疫苗奠定了物质基础。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种可用于制作禽类疫苗的重组杆状病毒的制备方法，其特征在于按下述步骤制备重组杆状病毒：（一）构建含有ＣＭＶ－ＩＥ启动子的穿梭质粒载体ｐＦａｓｔＢａｃ１－ｐｃＤＮＡ３．１（－）；（二）构建带有ＣＭＶ－ＩＥ启动子和外源基因的重组穿梭质粒载体ｐＦａｓｔＢａｃ１－ｐｃＤＮＡ３．１（－）’；（三）构建重组杆状病毒，并收集病毒粒子测定病毒效价；（四）检测重组杆状病毒外源基因的表达；所述的步骤（三）包括１．用重组穿梭质粒载体ｐＦａｓｔＢａｃ１－ｐｃＤＮＡ３．１（－）’转化ＤＨ１０Ｂａｃ细胞；２．提取重组杆状病毒ＢａｃｍｉｄＤＮＡ；３．特异引物ＰＣＲ扩增重组杆状病毒ＢａｃｍｉｄＤＮＡ；４．重组杆状病毒ＢａｃｍｉｄＤＮＡ转染Ｓｆ９细胞，获得重组杆状病毒；５．扩增重组杆状病毒；６．蚀斑试验；７．蚀斑纯化；８．收集重组杆 状病毒的病毒粒子；９．测定重组杆状病毒的病毒效价。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：楼庄伟，平文祥，葛菁萍，李盛贤，宋刚，凌宏志，高冬妮，张贺楠，
申请(专利权)人：黑龙江大学，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]