一种与结直肠癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种与结直肠癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物及其应用，该标志物为miR‑103a‑3p、miR‑127‑3p、miR‑151a‑5p、miR‑17‑5p、miR‑181a‑5p、miR‑18a‑5p和miR‑18b‑5p中的一种或多种。血浆miRNA作为新型的生物标志物，具有稳定性好、微创、易获取、灵敏性和特异性高的特点。这类分子标志物的开发利用将为包括肿瘤在内的各种疾病的诊断以及进一步治疗提供新的方向。本研究将更有针对性的得出具有临床诊断潜能的结直肠癌血浆miRNA标记物。研究证实了这组miRNA作为诊断结直肠癌的无创标记物的可靠性以及可重复性。

A plasma miRNA marker associated with colorectal cancer assisted diagnosis and its application

The present invention discloses a colorectal cancer diagnosis plasma miRNA markers and its application, the markers for one or more miR 103a 3P, miR 127, miR 3P 151a 5p, miR 5p, miR 17 181a 5p, miR 18a and miR 5p 18B in 5p. Plasma miRNA, as a new biomarker, has the characteristics of good stability, minimal invasion, easy access, high sensitivity and high specificity. The development and utilization of these molecular markers will provide a new direction for the diagnosis and further treatment of various diseases, including tumors. This study will be more targeted to determine the clinical diagnostic potential of colorectal cancer plasma miRNA markers. The study confirmed the reliability and repeatability of this group of miRNA as a noninvasive marker for the diagnosis of colorectal cancer.

【技术实现步骤摘要】
一种与结直肠癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物及其应用
本专利技术属于基因工程及肿瘤学领域，涉及一种与结直肠癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物及其应用。
技术介绍
结直肠癌(Colorectal,CRC)是全球发病率和死亡率较高的恶性肿瘤之一。在中国，结直肠癌的死亡率仍居肿瘤第五位。在生存期方面，早期结直肠癌患者的五年生存率可以达到90％以上，而IV期患者只有略大于10％的生存率。目前，由于经济条件和人群接受水平，我国尚未能推广以肠镜为基础的早期结直肠癌筛查项目。而且由于肠镜检测依赖于检查者经验，且有一定的创伤风险，亦导致无法推广。目前临床应用最为广泛的肿瘤标志物，如癌胚抗原(CEA)和糖类抗原19-9(CA19-9)，以及粪便隐血实验(FOBT)筛查结直肠癌，均缺乏一定的灵敏性和特异性。随着基因组学、蛋白组学以及代谢组学等生物技术的发展，越来越多的生物标志物已被发现或研究。因此，发现新的能够早期诊断结直肠癌的标记物指日可待，从而促进结直肠癌早期干预和治疗，延长病人的生存期。微小RNA(miRNAs)是一类长度在22个左右的核苷酸的小非编码RNA分子，其通过转录后调控广泛参与了各种生命活动过程，包括肿瘤的发生、侵袭及转移等。研究发现，miRNA的表达在肿瘤中有不同程度的上调和下调，为其能够作为一种新兴的肿瘤标志物奠定了基础。2008年，Mitchell在外周血中检测到游离的miRNA，发现其能够稳定存在于外周血中，并且可以作为诊断肿瘤的无创标志物。现已有研究证实了循环miRNA在胃癌、肺癌、乳腺癌等肿瘤中的潜在诊断价值。但由于研究方法及纳入人群的差异，导致研究结果不完全一致。因此，本研究利用ExiqonmiRNAqPCRpanel芯片以及基于qRT-PCR的绝对定量法，通过对大样本的结直肠癌血浆的研究，旨在寻找对结直肠癌具有潜在诊断价值的血浆miRNA。并对这些miRNA在结直肠癌组织中以及外周血浆外泌体中的表达进行验证，以进一步明确其与结直肠癌的关系。若根据这类miRNA设计针对结直肠癌的诊断试剂盒，将会推动我国结直肠癌的诊治水平，也为将来对结直肠癌的进一步研究提供思路。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种与结直肠癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物。本专利技术的另一目的在于提供上述血浆miRNA标志物及其引物在制备结直肠癌辅助诊断试剂盒以及在制备治疗结直肠癌的药物中的应用。本专利技术的又一目的在于提供一种用于结直肠癌辅助诊断和治疗的试剂盒及药物。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：一种与结直肠癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物，该标志物为miR-103a-3(AGCAGCAUUGUACAGGGCUAUGA)，miR-127-3p(UCGGAUCCGUCUGAGCUUGGCU)，miR-151a-5p(UCGAGGAGCUCACAGUCUAGU)，miR-17-5p(CAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG)，miR-181a-5p(AACAUUCAACGCUGUCGGUGAGU)，miR-18a-5p(UAAGGUGCAUCUAGUGCAGAUAG和miR-18b-5p(UAAGGUGCAUCUAGUGCAGUUAG)中的一种或多种。该血浆miRNA标志物优选为miR-103a-3p、miR-127-3p、miR-151a-5p、miR-17-5p、miR-181a-5p、miR-18a-5p和miR-18b-5p中两种或两种以上的组合，进一步优选为miR-103a-3p、miR-127-3p、miR-151a-5p、miR-17-5p、miR-181a-5p、miR-18a-5p和miR-18b-5p七种miRNA所组成的组合。上述的血浆miRNA标志物在辅助诊断结直肠癌中的应用。上述的血浆miRNA标志物在制备结直肠癌辅助诊断试剂盒中的应用。上述的血浆miRNA标志物在制备治疗结直肠癌药物中的应用。一种与结直肠癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物的引物，该引物包含miR-103a-3p、miR-127-3p、miR-151a-5p、miR-17-5p、miR-181a-5p、miR-18a-5p和miR-18b-5p中的一种或多种miRNA的引物；优选为包含血浆miRNA中miR-103a-3p、miR-127-3p、miR-151a-5p、miR-17-5p、miR-181a-5p、miR-18a-5p和miR-18b-5p中两种或两种以上miRNA的引物；进一步优选为包含血浆miR-103a-3p、miR-127-3p、miR-151a-5p、miR-17-5p、miR-181a-5p、miR-18a-5p和miR-18b-5p七种miRNA的引物。上述的引物在辅助诊断结直肠癌或制备结直肠癌辅助诊断试剂盒中的应用。一种结直肠癌辅助诊断试剂盒，该试剂盒中含有血浆miRNA中miR-103a-3p、miR-127-3p、miR-151a-5p、miR-17-5p、miR-181a-5p、miR-18a-5p和miR-18b-5p中的一种或多种miRNA的引物；优选为含有血浆miRNA中miR-103a-3p、miR-127-3p、miR-151a-5p、miR-17-5p、miR-181a-5p、miR-18a-5p和miR-18b-5p中两种或两种以上miRNA的引物；进一步优选为含有血浆miRNA中miR-103a-3p、miR-127-3p、miR-151a-5p、miR-17-5p、miR-181a-5p、miR-18a-5p和miR-18b-5p七种miRNA的引物。该试剂盒中还包括PCR技术常用的试剂。如逆转录酶，缓冲液，dNTPs，MgCl2，DEPC水和Taq酶等；还可以含有标准品和/或对照品。本专利技术所涉及的与结直肠癌诊断相关的血浆miRNA标志物miR-103a-3p、miR-127-3p、miR-151a-5p、miR-17-5p、miR-181a-5p、miR-18a-5p和miR-18b-5p中的每种miRNA的序列均已公开，但是将各miRNA标志物进行组合作为结直肠癌辅助诊断标志物需要本领域技术人员付出创造性劳动。各miRNA标志物的扩增引物均可通过市场购买获得，本专利技术实施例中使用的血浆miRNA标志物的引物为购自广州锐博公司所合成生产的特异性miRNA茎环RT-PCR引物。具体地说，本专利技术解决问题的技术方案包括：(1)建立统一标准的标本库和数据库：以标准操作程序(SOP)采集符合标准的血液样本，系统收集完整的人口学资料和临床资料。(2)血浆miRNA差异表达谱分析：分析结直肠癌和正常对照人群中差异表达的血浆miRNA，并对差异表达miRNAs进行进一步大样本多阶段验证。(3)通过多阶段的验证，明确这些miRNA诊断结直肠癌的能力。(4)血浆miRNA诊断试剂盒的研制：根据结直肠癌患者与正常人群血浆中的差异表达miRNA开发miRNAs诊断试剂盒，实现对结直肠癌患者的无创辅助诊断。(4)分析这些miRNA在结直肠癌组织以及外泌体中的表达情况，揭示这些miRNA与结直肠癌的关系，为将来研制可能与这些miRNA相关的治疗结直肠癌的药物提供依据。本专利技术人以标本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种与结直肠癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物，其特征在于该标志物为miR‑103a‑3p、miR‑127‑3p、miR‑151a‑5p、miR‑17‑5p、miR‑181a‑5p、miR‑18a‑5p和miR‑18b‑5p中的一种或多种。

【技术特征摘要】
1.一种与结直肠癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物，其特征在于该标志物为miR-103a-3p、miR-127-3p、miR-151a-5p、miR-17-5p、miR-181a-5p、miR-18a-5p和miR-18b-5p中的一种或多种。2.根据权利要求1所述的血浆miRNA标志物，其特征在于该血浆miRNA标志物为miR-103a-3p、miR-127-3p、miR-151a-5p、miR-17-5p、miR-181a-5p、miR-18a-5p和miR-18b-5p中两种或两种以上的组合。3.根据权利要求2所述的血浆miRNA标志物，其特征在于该血浆miRNA标志物为miR-103a-3p、miR-127-3p、miR-151a-5p、miR-17-5p、miR-181a-5p、miR-18a-5p和miR-18b-5p七种miRNA的组合。4.权利要求1、2或3所述的血浆miRNA标志物在辅助诊断结直肠癌中的应用。5.权利要求1、2或3所述的血浆miRNA标志物在制备结直肠癌辅助诊断试剂盒中的应用。6.权利要求1、2或3所述的血浆miRNA标志物在制备治疗结直肠癌药物中的应用。7.一种与结直肠癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物的引物，其特征在于该引物包含miR-103a-3p、miR-127-3p、miR-151a-5p、miR-17-5p、miR-181a-5p、miR-18a-5p和miR-18b-5p中的一种或多种miRN...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱伟，周鑫，张澜，张获，黄泽波，朱明霞，王同杉，刘平，
申请(专利权)人：朱伟，
类型：发明
国别省市：江苏,32