一种与肺鳞癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种与肺鳞癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物及其应用，该标志物为miR‑181a‑5p、miR‑21‑5p、miR‑106a‑5p和miR‑93‑5p中的一种或多种。血浆miRNA作为新型的生物标志物，具有稳定性好、微创易获取、灵敏性和特异性高的特点。这类分子标志物的开发利用将为包括肿瘤在内的各种疾病的诊断以及进一步治疗提供新的方向。本研究将更有针对性的得出具有临床诊断潜能的肺鳞癌血浆miRNA标记物。研究证实了这组miRNA作为诊断肺鳞癌的无创标记物的可靠性以及可重复性。

【技术实现步骤摘要】
一种与肺鳞癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物及其应用
本专利技术属于基因工程及肿瘤学领域，涉及一种与肺鳞癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物及其应用。
技术介绍
肺癌(LungCancer)是当前全球最常见的恶性肿瘤之一。在中国，肺癌的发病率和死亡率均居首位。非小细胞肺癌(NSCLC)约占肺癌的85％。其中，肺鳞癌是NSCLC中最常见的亚型之一。虽然外科治疗目前是肺鳞癌首选和最主要的治疗方法，并且能对早期的肺鳞癌患者达到治愈的目的，但由于肺鳞癌患者早期临床表现无明显特异性，在我国早期诊断率仍较低。目前，低剂量CT检查(Low-dosecomputedtomography(LDCT))是较为推荐的用于肺癌及肺部结节的筛查。但由于如高误报率，潜在的过度诊断可能，过高的成本以及可能造成的辐射暴露危害等原因导致其使用受到一定限制。目前临床应用最为广泛的肿瘤标志物，如squamouscellcarcinomaantigen(SCC)，carcinoembryonicantigen(CEA),neuronspecificenolase(NSE)andCyfra21-1，也缺乏一定的灵敏性和特异性。随着基因组学、蛋白组学以及代谢组学等生物技术的发展，越来越多的生物标志物已被发现或研究。因此，发现新的能够早期诊断肺鳞癌的标记物指日可待，从而促进肺鳞癌早期干预和治疗，延长病人的生存期。微小RNA(miRNAs)是一类长度在22个左右的核苷酸的小非编码RNA分子，其通过转录后调控广泛参与了各种生命活动过程，包括肿瘤的发生、侵袭及转移等。研究发现，miRNA的表达在肿瘤中有不同程度的上调和下调，为其能够作为一种新兴的肿瘤标志物奠定了基础。2008年，Mitchell在外周血中检测到游离的miRNA，发现其能够稳定存在于外周血中，并且可以作为诊断肿瘤的无创标志物。现已有研究证实了循环miRNA在胃癌、乳腺癌、结直肠癌等肿瘤中的潜在诊断价值。但由于研究方法及纳入人群的差异，导致研究结果不完全一致。因此，本研究利用ExiqonmiRNAqPCRpanel芯片以及基于qRT-PCR的绝对定量法，通过对大样本的肺鳞癌血浆的研究，旨在寻找对肺鳞癌具有潜在诊断价值的血浆miRNA。并对这些miRNA在肺鳞癌组织中以及外周血浆外泌体中的表达进行验证，以进一步明确其与肺鳞癌的关系。若根据这类miRNA设计针对于肺鳞癌的诊断试剂盒，将会推动我国肺鳞癌的诊治水平，也为将来对肺鳞癌的进一步研究提供思路。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种与肺鳞癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物。本专利技术的另一目的在于提供上述血浆miRNA标志物及其引物在制备肺鳞癌辅助诊断试剂盒以及在制备治疗肺鳞癌的药物中的应用。本专利技术的又一目的在于提供用于肺鳞癌辅助诊断和治疗的试剂盒及药物。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：一种与肺鳞癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物，该标志物为miR-181a-5p(AACAUUCAACGCUGUCGGUGAGU),miR-21-5p(UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA)，miR-106a-5p(AAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG)和miR-93-5p(CAAAGUGCUGUUCGUGCAGGUAG)中的一种或多种。该血浆miRNA标志物优选为miR-181a-5p、miR-21-5p、miR-106a-5p和miR-93-5p中两种或两种以上的组合，进一步优选为miR-181a-5p、miR-21-5p、miR-106a-5p和miR-93-5p四种miRNA所组成的组合。上述的血浆miRNA标志物在辅助诊断肺鳞癌中的应用。上述的血浆miRNA标志物在制备肺鳞癌辅助诊断试剂盒中的应用。上述的血浆miRNA标志物在制备治疗肺鳞癌药物中的应用。一种与肺鳞癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物的引物，该引物包含miR-181a-5p、miR-21-5p、miR-106a-5p和miR-93-5p中的一种或多种miRNA的引物；优选为包含血浆miRNA中miR-181a-5p、miR-21-5p、miR-106a-5p和miR-93-5p中两种或两种以上miRNA的引物；进一步优选为包含血浆miRNA中miR-181a-5p、miR-21-5p、miR-106a-5p和miR-93-5p四种miRNA的引物。上述的引物在辅助诊断肺鳞癌或制备肺鳞癌辅助诊断试剂盒中的应用。一种肺鳞癌辅助诊断试剂盒，该试剂盒中含有血浆miRNA中miR-181a-5p、miR-21-5p、miR-106a-5p和miR-93-5p中的一种或多种miRNA的引物；优选为含有血浆miRNA中miR-181a-5p、miR-21-5p、miR-106a-5p和miR-93-5p中两种或两种以上miRNA的引物；进一步优选为含有血浆miRNA中miR-181a-5p、miR-21-5p、miR-106a-5p和miR-93-5p四种miRNA的引物。该试剂盒中还包括PCR技术常用的试剂。如逆转录酶，缓冲液，dNTPs，MgCl2，DEPC水和Taq酶等；还可以含有标准品和/或对照品。本专利技术所涉及的与肺鳞癌诊断相关的血浆miRNA标志物miR-181a-5p、miR-21-5p、miR-106a-5p和miR-93-5p中的每种miRNA的序列均已公开，但是将各miRNA标志物进行组合作为肺鳞癌辅助诊断标志物需要本领域技术人员付出创造性劳动。各miRNA标志物的扩增引物均可通过市场购买获得，本专利技术实施例中使用的血浆miRNA标志物的引物为购自广州锐博公司所合成生产的特异性miRNA茎环RT-PCR引物。具体地说，本专利技术解决问题的技术方案包括：(1)建立统一标准的标本库和数据库：以标准操作程序(SOP)采集符合标准的血液样本，系统收集完整的人口学资料和临床资料。(2)血浆miRNA差异表达谱分析：分析肺鳞癌和正常对照人群中差异表达的血浆miRNA，并对差异表达miRNAs进行进一步大样本多阶段验证。(3)通过多阶段的验证，明确这些miRNA诊断肺鳞癌的能力。(4)血浆miRNA诊断试剂盒的研制：根据肺鳞癌患者与正常人群血浆中的差异表达miRNA开发miRNAs诊断试剂盒，实现对肺鳞癌患者的无创辅助诊断。(5)分析这些miRNA在肺鳞癌组织以及外泌体中的表达情况，揭示这些miRNA与肺鳞癌的关系，为将来研制可能与这些miRNA相关的治疗肺鳞癌的药物提供依据。本专利技术人以标准操作程序(SOP)采集符合标准的血液样本，系统收集完整的人口学资料、临床资料，并采用了ExiqonmiRNAqPCRpanel芯片以及qRT-PCR方法等。具体来说研究的实验方法主要包括以下几个部分：1.研究样本选择：初治、未行手术以及放化疗干预且经病理确认为肺鳞癌的患者。正常对照为在医院进行体检的正常人群。2.ExiqonmiRNAqPCRpanel芯片初筛：利用TRIZOL-LS试剂对血浆混合样本进行RNA提取，并进行qRT-PCR操作获得初筛结果。3.训练集、验证集：利用AM1556试剂盒(ABI公司)对每个血浆样本进行RNA提取，通过逆转录反应得到cDNA样品，加入PCR本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种与肺鳞癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物，其特征在于该标志物为miR‑181a‑5p、miR‑21‑5p、miR‑106a‑5p和miR‑93‑5p中的一种或多种。

【技术特征摘要】
1.一种与肺鳞癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物，其特征在于该标志物为miR-181a-5p、miR-21-5p、miR-106a-5p和miR-93-5p中的一种或多种。2.根据权利要求1所述的血浆miRNA标志物，其特征在于该血浆miRNA标志物为miR-181a-5p、miR-21-5p、miR-106a-5p和miR-93-5p中两种或两种以上的组合。3.根据权利要求2所述的血浆miRNA标志物，其特征在于该血浆miRNA标志物为miR-181a-5p、miR-21-5p、miR-106a-5p和miR-93-5p四种miRNA的组合。4.权利要求1、2或3所述的血浆miRNA标志物在辅助诊断肺鳞癌中的应用。5.权利要求1、2或3所述的血浆miRNA标志物在制备肺鳞癌辅助诊断试剂盒中的应用。6.权利要求1、2或3所述的血浆miRNA标志物在制备治疗肺鳞癌药物中的应用。7.一种与肺鳞癌辅助诊断相关的血浆miRNA标志物的引物，其特征在于该引物包含miR-181a-5p、miR-21-5p、miR-106a-5p和miR-93-5p...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱伟，周鑫，张澜，张获，闻伟，王同杉，刘平，
申请(专利权)人：朱伟，
类型：发明
国别省市：江苏,32