促胃动素同系物制造技术

本发明专利技术涉及与促胃动素有同源性的新型ｃＤＮＡ序列的多核苷酸、多肽及其肽片段，以及它们的用途。该新多肽的ｍＲＮＡ特异地分布于胃小肠和胰腺组织中。本发明专利技术还包括激动剂、拮抗剂、抗体、表达新型促胃动素同系物编码ｃＤＮＡ的宿主细胞，以及利用该新分子提高胃动力的方法。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

技术介绍
在胃肠环境中存在许多对维持营养状况的内环境稳定起重要作用的调节肽。这些肽可在消化系统合成并在局部作用，但也可在大脑中鉴定到。此外，也有相反的情况，即肽虽合成于大脑，但却调节胃肠道内的细胞。这一现象被称为“脑肠轴”，它对发出饱腹信号、调节体温及其它要求在大脑和消化道之间发生反馈的生理过程是重要的。胃肠肽激素包括促胃液素、缩胆囊素(CCK)、促胰液素、促胃液素抑制肽(GIP)、血管活性肠肽(VIP)、促胃动素、抑生长素、胰多肽(PP)、P物质和神经肽Y(NPY)，它们以各种不同的机制进行作用。例如，促胃液素、促胃动素和缩胆囊素(CCK)是作为内分泌和神经分泌型激素起作用的。其它一些激素，诸如促胃液素和促胃液素抑制肽之类，被认为是完全以内分泌形式作用的。其它的作用方式包括内分泌、神经分泌和旁分泌作用的联合(抑生长素)、完全的神经分泌作用(神经肽Y)；及神经分泌和旁分泌作用的联合(血管活性肠肽和P物质)。大部分胃肠激素作用是由膜结合受体介导的，它们激活第二信使系统。有关胃肠肽的回顾可见以下文献Muluihill等，在《基础与临床内分泌学》中，pp.551-570，第四版，Greenspan F.S.和Baxter J.D.编.Appleton和LangeNowalk，康涅狄格，1994。这些胃肠肽中的许多是以非活性前体分子形式合成的，它们需经复杂的多重肽裂解而被激活。已知的“胰高血糖素-促胰液素”家族包括例如血管活性肠肽、促胃液素、促胰液素、促胃动素、胰高血糖素和galanin等肽，它们就是通过复杂裂解和翻译后修饰而被调节的肽的例子。促胃动素是存在于哺乳类肠道组织中的一种22个氨基酸的肽(Domschke，W.，消化类疾病，22(5)454-461，1977)。猪前促胃动素原的DNA和氨基酸序列已被确定了(美国专利5,006,469)。促胃动素已被认为是能提高胃运动、通过刺激胃蛋白酶分泌而影响胃的分泌功能的一个因子(Brown等，加拿大生理学及药学杂志(Canadian J.of Physid.Pharmacol.)，49399-405，1971)，最近有证据显示，它还具有胃和小肠肌动调节的作用。促胃动素的循环系统浓度增加与消化中的肌电复合物第三阶段及十二指肠的饥饿收缩相关(chey等，在《肠激素》中，Bloom，S.R.(编)，第355-358页，Edinkurgh，churchitl Liuing stone，1978；Lee等人，美国消化类疾病杂志(Am.J.Digestive Diseqses)，23789-795，1978；及Itoh等人，美国消化类疾病杂志，23929-935，1978)。现已证明促胃动素及其同系物会引起胃肠平滑肌的收缩，但不会引起其它类型平滑肌细胞收缩(Strunz等，胃肠病学，68卷；1485-1491页，1975)。本专利技术涉及与促胃动素具同源性的一种新分泌蛋白，已发现它在胃肠系统中得到转录。这一新肽的发现对于进一步阐明机体如何维持其营养状况的内环境平衡有重要意义，对于开发一些治疗方法以干预那些过程，以及根据本文教导而很显而易见的其它一些用途也很重要。专利技术概述一方面，本专利技术提供了编码多肽的分离的多核苷酸分子，其选自(a)包含SEQ ID NO1所示70位至111位核苷酸的核苷酸序列的多核苷酸分子；(b)(a)的等位变体；(c)(a)和(b)的正同系物(ortholog)；和(d)(a)、(b)或者(c)的简并核苷酸序列。另一方面，本专利技术提供了选自下组的分离的多肽(a)包含SEQ IDNO2所示24位至37位残基的氨基酸序列的多肽分子；(b)(a)的等位变体；(c)(a)或者(b)的正同系物。另一方面，本专利技术提供了含有下列可操作性地连接在一起的元件的表达载体转录启动子；选自下组的DNA片段(a)包含SEQ ID NO1所示70位至111位核苷酸的核苷酸序列的多核苷酸分子；(b)(a)的等位变体；(c)(a)或(b)的正同系物；和(d)(a)、(b)或者(c)的简并核苷酸序列；及转录终止子。另一方面，本专利技术提供了已导入表达载体的培养细胞，所述表达载体包含下列可操作性地连接在一起的元件转录启动子；选自下组的DNA片段包含SEQ ID NO1所示70位至111位核苷酸的核苷酸序列的多核苷酸分子；(b)(a)的等位变体；(c)(a)或(b)的正同系物；和(d)(a)、(b)或者(c)的简并核苷酸序列；及转录终止子，其中所述细胞表达该DNA片段所编码的多肽。另一方面，本专利技术提供了含有与药学上可接受载体组合的、选自下组的纯化多肽的药物组合物(a)包含SEQ ID NO2所示24位至37位残基的氨基酸序列的多肽分子；(b)(a)的等位变体；(c)(a)或者(b)的正同系物。另一方面，本专利技术提供了可与选自下组之多肽的表位结合的抗体(a)包含SEQ ID NO2所示24位至117位残基的氨基酸序列的多肽分子；(b)(a)的等位变体；(c)(a)或者(b)的正同系物。另一方面，本专利技术提供了生产zsig33多肽的方法，包括培养已导入了表达载体的细胞，该表达载体包含下列可操作性地连接在一起的元件转录启动子；选自下组的DNA片段包含SEQ ID NO1所示70位至111位核苷酸的核苷酸序列的多核苷酸分子；(b)(a)的等位变体；(c)(a)或(b)的正同系物；和(d)(a)、(b)或者(c)的简并核苷酸序列；及转录终止子，其中所述细胞表达该DNA片段所编码的多肽；和回收该多肽。另一方面，本专利技术提供了刺激胃活动的方法，包括给有此需要的哺乳动物施用于药学上可接受载体中的、含有选自下组之分离多肽的组合物(a)包含SEQ ID NO2所示24位至37位残基的氨基酸序列的多肽分子；(b)(a)的等位变体；(c)(a)或者(b)的正同系物；其施用量足以提高摄入物质的运送时间(transit time)或者胃排空(gastric emptying)。专利技术详述在详细描述本专利技术之前，有必要确定本文所用的某些术语。术语“正同系物”(ortholog)表示从一个种获得的多肽或蛋白质，它是不同种来源的多肽或蛋白质的功能性对应物。正同系物间的序列差异是物种化的结果。术语“副同系物”(paralog)表示由一种生物体生成的截然不同、但结构上相关的蛋白质。人们认为副同系物源于基因的重复。例如，α-球蛋白、β-球蛋白和肌球蛋白相互之间是副同系物。术语“等位变体”表示占据相同染色体位点的基因的两种或多种可互换形式的任一种。等位变体通过突变自然产生，可在种群内导致表型多态性。基因突变可以是沉默的(编码的多肽中没有变化)，或可编码含有改变的氨基酸序列的多肽。术语等位变体此处也用于表示由基因的等位变体编码的蛋白质。术语“表达载体”表示包含编码目的多肽的区段与提供其转录的其它区段可操作连接的线性或环状DNA分子。这样的其它区段可以包括启动子和终止子序列，并且可以选择性包括一个或多个复制起点、一个或多个选择性标记、增强子、多聚腺苷酸化信号等。表达载体一般起源于质粒或病毒DNA，或可以含有两者的元件。术语“分离的”，当用于多核苷酸分子时，表示多核苷酸已从其天然的遗传环境中取出、因而不含有其它额外或不需要的编码序列，并且是适合于本文档来自技高网...

【技术保护点】
编码多肽的分离多核苷酸分子，其选自： （ａ）包含如ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１的第７０位至１１１位核苷酸所示的核苷酸序列的多核苷酸分子； （ｂ）（ａ）的等位变体； （ｃ）（ａ）和（ｂ）的正同系物；和 （ｄ）（ａ）、（ｂ）或（ｃ）的简并核苷酸序列。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：PO舍帕德，TA戴舍尔，
申请(专利权)人：津莫吉尼蒂克斯公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]