一种芍药地下芽徒手切片方法及其应用技术

本发明专利技术涉及生物切片领域，尤其涉及一种芍药地下芽徒手切片方法及其应用。该徒手切片方法包括以下步骤：(1)将芍药地下芽的芽基部沿与其生长相垂直的方向削平，并将芽基部削成长方体状；(2)将经步骤(1)处理后的地下芽横放于台面上，用刀片从芽基部中部沿芽的生长方向垂直切入并向地下芽的生长点推进，直至将所述地下芽完全切开为两瓣。该徒手切片方法的应用，即将所述两瓣芽切片的切面朝上，室温下晾置4～6min后，置于解剖镜下观察。该切片方法操作简单，节省了科研经费；而且不需要使用任何化学试剂，绿色环保，为芍药花芽分化研究提供了便利，也为其他具有类似花芽的植物的花芽分化研究提供了参考依据。

A method and application of bare hand slices of Paeonia lactiflora

The invention relates to the field of biological slicing, in particular to a method for the bare hand slicing of the root bud of the Paeonia lactiflora and its application. The freehand method comprises the following steps: (1) the basal shoot buds along with peony underground growth direction perpendicular to the flat, and the basal shoot cut into rectangular shape; (2) the step (1) after the treatment of underground buds placed horizontally on the table, with a blade from the middle of the blastema along the growth direction of the vertical cut and bud growth point to the underground buds in advance, until the complete cut into two pieces of underground buds. The application of the free hand section method, the cutting surface of the two petal sliced up, after 4 ~ 6min at room temperature, was observed under the anatomical mirror. The slicing method is simple in operation, saves research funds, and does not need to use any chemical reagents. It provides convenience for flower bud differentiation research of Paeonia lactiflora Pall. It also provides reference for flower bud differentiation research of other plants with similar flower buds.

【技术实现步骤摘要】
一种芍药地下芽徒手切片方法及其应用
本专利技术涉及生物切片领域，尤其涉及一种芍药地下芽徒手切片方法及其应用。
技术介绍
芍药属芍药科芍药属植物，其花大色艳，花型丰富，自古以来深受我国人民喜爱，是我国的传统名花。作为观赏花卉，花是芍药最为重要的观赏部位，也是芍药千百年以来得以绵延不绝进行文化传承的重要载体。花芽分化是有花植物生长发育中一个十分重要的阶段，花芽分化对观赏植物开花的数量、质量及产量等都有直接影响。对芍药而言，花芽分化是其完成生命周期得以种群繁衍的重要过程，不同品种间花芽分化的差异也是花期各异、花型得以多样化进化的重要原因，因而花芽分化是在芍药中开展品种分类、花发育生理代谢调控及分子生物学等基础研究及花期调控方面研究的重要内容。因此，对芍药花芽分化的解剖学研究极具理论和现实意义。传统上，对芍药花芽形态分化观察研究，主要有冰冻切片法和石蜡切片方法。而实践过程中冰冻切片法试验过程复杂和繁琐，切片效果不尽理想，而石蜡切片法虽然切片效果相对冰冻切片法要好，但是从材料固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片及染色等需要经历一个较长的实验周期，其中每个环节都直接影响最终的实验效果，传统上需要使用二甲苯等有毒试剂进行透明及脱蜡处理，目前虽然已有相关无毒试剂替代，但是实验周期及成本仍然较高，大大影响了实验的效率。对于科研工作者来说，好的切片方法的关键在于：1、切片能清晰、真实地反映实物。2、方法具有通用性，不受发育阶段及材料大小差异的限制。3、节省时间和经济成本、操作简单、环保、高效。以前芍药花芽切片方法不能完全满足上述条件，因而表现出一定的不足。采用徒手切片方法，能对不同发育时期的花芽快速、高效地进行观察，并能获得高质量的花芽分化解剖图，整个操作过程绿色、环保，简单易学，因而特别适宜用于花芽分化的解剖学研究。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种芍药地下芽徒手切片方法及其应用。所述徒手切片方法包括以下步骤：(1)将芍药地下芽的芽基部沿与其生长相垂直的方向削平，并将所述芽基部削成长方体状；(2)将经步骤(1)处理后的地下芽横放于台面上，用刀片从其芽基部中部沿芽的生长方向垂直切入并向芽的生长点推进，直至将所述地下芽完全切开为两瓣。本专利技术所述的地下芽徒手切片方法，刀片从芽基部中部沿芽的生长方向垂直切入，然后刀片向芽的生长点方向推进，切割过程中不会对花芽造成破坏，而且切割效率高；整个切割过程不需使用任何化学试剂，免去了使用二甲苯、甲醛等有毒试剂；所得到的地下芽切片含有清晰的花芽结构，因此便于观察花芽的分化；而且利用所得的切片材料能够得到清晰、高质量的芍药地下芽解剖图片，与传统切片相比，该切片的视域范围更广，从而能更直接、清晰地从整体把握花芽分化结构；该方法简单易操作，相比传统石蜡切片，其极大地缩短了实验周期，实验成功率高达99％。本专利技术的地下芽徒手切片方法，所述步骤(2)具体为：将经步骤(1)处理后的地下芽横放于台面上，地下芽与台面之间设有一层干净的滤纸，左手的拇指和食指捏紧刀片的一端，右手的拇指和食指捏紧刀片的另一端，刀口朝下，并保持视线和刀片处于同一垂直面上，靠近芽基部的一侧先落刀，用刀片从芽基部中部沿芽的生长方向垂直切入并向芽的生长点推进，直至将所述地下芽完全切开为两瓣。地下芽与台面之间设有一层干净的滤纸，确保了切割面的整洁，而且避免了切割时芽在台面上的滑动；保持视线、刀片和芽处于同一垂直面上，能够更加精准地进行垂直切割，确保了切割面的平整。本专利技术的地下芽徒手切片方法，当所述地下芽长度大于1cm时，在切片前进行剥鳞处理(即将芽外部的鳞片剥去)；当所述地下芽长度小于1cm时，在切片前不进行剥鳞处理。因为长度小于1cm的芽体通常处于发育早期，对其进行剥鳞处理极易对其造成损坏。本专利技术的地下芽徒手切片方法，其所述地下芽可选自不同发育时期正常生长的芍药地下芽，取样时将所述地下芽从根冠部切下，切割时应保证其鳞片完整，以防止杂物污染内部组织，然后放入含有吸水纸的自封袋中，并置于冰上保存，以防止过分失水或发生褐色现象。这说明本专利技术的切片方法适用于芽的各个发育阶段，不受芽发育阶段的限制，确保了实验的灵活性。对于3～4天不用的材料可在用冰盒带回实验室后直接将自封袋置于4℃冰箱中进行保存备用，长期不用的材料可以参考传统石蜡切片方法用FAA固定液(50％乙醇：冰醋酸：甲醛＝90:5:5(体积比))进行保存备用，切片时将材料从固定液中取出并用吸水纸吸干表现的液体后按照上面的操作步骤进行切片。本专利技术所述刀片为不锈钢双面刀片，(该刀片质地薄，韧性好，不易腐蚀，非常利于制作切片)用作切片时将刀片对半折断。另外，本专利技术所用的自封袋、冰盒、解剖刀、不锈钢双面刀片等均为市售。本专利技术还提供了一种所述徒手切片方法的应用，即将所述两瓣芽切片的切面朝上，室温下晾置4～6min，优选晾置5min，使花原基缝隙中沾有的水分挥发掉，以免花原基内部含水过多而影响观察，然后置于解剖镜下进行观察，拍照。优选的，所述拍照应在芽切割完之后的15min内完成，否则材料表面容易褐化或失水过多导致照片效果不佳。优选的，所述解剖镜为体式显微镜；和/或，观察时将切割后的芽置于黑色背景纸上，以便于图像搜索和采集。本专利技术的所述切片方法操作简单，用时短，理论上一个芽从解剖到拍片观察只需5～10min，比传统石蜡切片一个流程至少需要5～10天的效率提高上百倍；同时本专利技术所用工具简易，工具损耗基本可以忽略不计，节省了大量的科研经费；而且不需要使用任何化学试剂，绿色环保；为芍药花芽分化研究提供了便利，也为其他具有类似花芽的植物的花芽分化研究提供了参考依据。附图说明图1为本专利技术实施例的“大富贵”芍药的地下芽解剖图；图2为本专利技术实施例的“粉玉奴”芍药的地下芽解剖图；图3为本专利技术实施例的“种生粉”芍药的地下芽解剖图；图4为本专利技术实施例的“朱砂判”芍药的地下芽解剖图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术的实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本专利技术，但不能用来限制本专利技术的范围。于7月初至次年3月底，对种植在国家花卉工程中心实验苗圃(北京，昌平区，小汤山镇)的芍药芽进行观察取样，此时芍药处于地下芽发育时期。取样品种为“大富贵”、“粉玉奴”、“种生粉”、“朱砂判”四个品种。用小铁铲将芍药茎段基部覆盖的泥土铲去，直至着生在基部的芽露出，清除芽周围的泥土及杂物，然后用解剖刀将芽从基部完整切下，置于装有浸水吸水纸(吸水纸的含水量以手捏不滴水为宜)的3号塑料自封袋中。每个芍药品种各取一株，每株取5个芽，作三个重复。然后将密封的自封袋，放入事先准备好的冰盒中存放，带至实验室备用。在进行切片操作前，将芽从自封袋中取出，用清水将芽外鳞片上附带的泥土及杂物清除，并用吸水纸擦干。对于发育早期芽体长度不超过1cm的芽不进行剥鳞处理，对于发育晚期的长度超过1cm的芽将外鳞片剥离后进行切片操作。刀片切完后如果暂时不用，应擦干表面的水分，原包装保存待用。本实施例提供了一种上述芍药地下芽的徒手切片方法，其包括以下步骤：(1)用解剖刀将地下芽的芽基部沿与其生长相垂直的方向削平，并将芽基部削成长方体状；(2)将经步骤(1)处理后的地下芽横放于台面上，地下芽与台面之间设有一层干净的滤纸，左手的拇指和食指捏紧刀片本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种芍药地下芽徒手切片方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将芍药地下芽的芽基部沿与其生长相垂直的方向削平，并将所述芽基部削成长方体状；(2)将经步骤(1)处理后的地下芽横放于台面上，用刀片从其芽基部中部沿芽的生长方向垂直切入并向芽的生长点推进，直至将所述芽完全切开为两瓣。

【技术特征摘要】
1.一种芍药地下芽徒手切片方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将芍药地下芽的芽基部沿与其生长相垂直的方向削平，并将所述芽基部削成长方体状；(2)将经步骤(1)处理后的地下芽横放于台面上，用刀片从其芽基部中部沿芽的生长方向垂直切入并向芽的生长点推进，直至将所述芽完全切开为两瓣。2.根据权利要求1所述的地下芽徒手切片方法，其特征在于，所述步骤(2)具体为：将经步骤(1)处理后的地下芽横放于台面上，地下芽与台面之间设有一层干净的滤纸，左手的拇指和食指捏紧刀片的一端，右手的拇指和食指捏紧刀片的另一端，刀口朝下，并保持视线和刀片处于同一垂直面上，用刀片从芽基部中部沿芽的生长方向垂直切入并向芽的生长点推进，直至将所述地下芽完全切开为两瓣。3.根据权利要求1或2所述的地下芽徒手切片方法，其特征在于，当所述地下芽长度大于1cm时，在切片前进行剥鳞处理；当所...

【专利技术属性】
技术研发人员：于晓南，张建军，张启翔，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11