高表达、高纯度、高活性基因重组人溶菌酶的生产及用途制造技术

本发明专利技术涉及一种高表达、高纯度、高活性基因重组人溶菌酶的生产方法及其新用途。提供了利用提取纯化的基因工程技术表达的人溶菌酶的溶菌活性，用于临床上细菌和真菌的感染，特别是耐药性细菌感染的治疗方法，以及革兰阴性菌感染治疗后内毒素引发的后遗症的治疗方法。提供了用于各种治疗用途的抗生素和人溶菌酶的药用组合物。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

【技术保护点】
一种高表达、高纯度、高活性基因重组人溶菌酶的生产及用途，其特征在于：所述的生产用的材料是：采用毕赤酵母的ｓｍｄ１１６５（ｈｉｓ４．ｐｒｂ１），ｓｍｄ１１６３（ｈｉｓ．ｐｅｐ４．ｐｒｂ１），Ｇｓ１１５、ｋｍ７１菌株；其基因工程人溶菌酶的质粒主要是以ｐＰＩＣ９ｋ系列的质粒整合在上述菌株染色体上；生产步骤是：１、摇瓶种子制备：以配制２００毫升培养基为基准，用Ｈ↓［３］ＰＯ↓［４］（磷酸）４－８毫升、ＭｇＳＯ↓［４］（硫酸镁）１－５克，Ｋ↓［２］ＳＯ↓［４］（硫酸钾）２－６克，ＫＯＨ（氢氧化钾）１－３克，ＣａＳＯ↓［４］２Ｈ↓［２］Ｏ（硫酸钙）１－３．５克，加蒸馏水至２００毫升，高压灭菌后接种甘油管种子，摇床转数为每分钟２５０转，培养温度为２０－３５℃，在恒温床上培养３６－４８小时。２、种子罐培养：以种子罐最大体积１升为基准，配制培养基用Ｈ↓［３］ＰＯ↓［４］（磷酸）２５－１９毫升，ＭｇＳＯ↓［４］（硫酸镁）１３－１７克，ＣａＳＯ↓［４］２Ｈ↓［２］Ｏ（硫酸钙）０．４－０．８克，Ｋ↓［２］ＳＯ↓［４］（硫酸钾）１６－２０克，ＫＯＨ（氢氧化钾）２．１２－６．１２克，加蒸馏水至５００毫升，高压灭菌后接种摇床种子；发酵反应器操作参数温度为２０－３２℃，ＰＨ值为２．０－８．０；溶解氧浓度为１０－６０％，当培养液中的细胞密度提高至ＯＤ２００左右，种子培养结束。３、生产罐培养：以１０升为生产罐配制培养基，用Ｈ↓［３］ＰＯ↓［４］（磷酸）９３－９７毫升，ＭｇＳＯ↓［４］（硫酸镁）５１－５５克，ＣａＳＯ↓［４］２Ｈ↓［２］Ｏ（硫酸钙）１９－２３克，Ｋ↓［２］ＳＯ↓［４］（硫酸钾）６１－６５克，ＫＯＨ（氢氧化钾）１３－１７克加蒸馏水至７升，高压灭菌后接种种子罐种子，发酵反应器操作参数温度控制在２５－３２℃，ＰＨ值为４．０－８．０，溶解氧浓度为１０－６０％；当培养液中细胞达到一定密度后，向培养液中流加甲醇诱导，此阶段的持续时间５０－６０小时，然后放罐培养结束。提取纯化工艺：将含有基因工程表达的人溶菌酶的毕赤酵母菌培养液用１０－５０万截流分子量膜超滤，收集滤液；用５０００截流分子量超滤，收集浓液；浓液上羧甲基纤维素，洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱液，过－５０柱除盐，冰冻干燥，测定蛋白量和溶菌酶活性。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：安米，张华，李元，安献禄，
申请(专利权)人：长春奇龙生物技术研究所，香港国升实业有限公司，深圳市九益祥实业有限公司，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]