人乙酰肝素酶相关多肽和核酸制造技术

技术编号:1725319 阅读:169 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术涉及新鉴定的多核苷酸和由该多核苷酸编码的多肽、这种多肽的用途及这种多核苷酸和多肽的生产。更具体地,本发明专利技术多肽为乙酰肝素酶相关的内切葡糖醛酸酶(endoglucuronidase)。本发明专利技术也涉及含有本发明专利技术多核苷酸的载体和宿主细胞。此外,本发明专利技术涉及针对本发明专利技术所述多肽的抗体和含有该抗体、多肽或多核苷酸的药物组合物和诊断试剂。本发明专利技术也涉及改变、修饰或以其它方式调节该乙酰肝素酶相关的内切葡糖醛酸酶在细胞或生物体中表达水平的方法。本发明专利技术另一方面为适于鉴别该多肽的调节剂例如激动剂或拮抗剂的分析系统。(*该技术在2020年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及新鉴定的多核苷酸和由该多核苷酸编码的多肽、多肽的用途及该多核苷酸和多肽的产生。更具体地,本专利技术多肽为乙酰肝素酶(heparanase)相关的内切葡糖醛酸酶(endoglucuronidase)。本专利技术也涉及含有本专利技术多核苷酸的载体和宿主细胞。此外,本专利技术涉及针对本专利技术所述多肽的抗体和含有该抗体、多肽或多核苷酸的药物组合物和诊断试剂。本专利技术也涉及改变、修饰或其它方式调节该乙酰肝素酶相关的内切葡糖醛酸酶在细胞或生物体中表达水平的方法。本专利技术另一方面为适于鉴定调节剂例如该多肽的激动剂或拮抗剂的分析系统。
技术介绍
胞外基质(ECM)和基底膜(BM)蛋白植埋于主要由硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)组成的纤维网状结构中。HSPG是血管的主要化合物(内皮下基底膜),其支撑着血管壁内皮细胞并使毛细管壁的结构稳定。乙酰肝素酶(一种内切-β-D-葡糖醛酸酶)在血小板、胎盘滋养层和白细胞中的表达证实了乙酰肝素酶在胚胎形态发生、伤口愈合、组织修复和炎症中的常规功能。与消化ECM的蛋白酶一样,乙酰肝素酶可以使细胞穿过基底膜并释放贮存于ECM中的结合肝素的生长因子(如bFGF,VEGF)(Finkel等,科学,1999,28533-34;Eccles,自然医学,1999,5735-736)最近,乙酰肝素酶已被4个独立的研究小组克隆成功(Vlodavsky等,自然医学,1999,5793-802;Hulett等,自然医学,1999,5803-809;Toyoshima和Nakajima,生物化学杂志,1999,27424153-24160;Kussie等,生物化学和生物物理研究通讯,1999,261183-187),其作为65kDa前体蛋白得以表达,该前体蛋白的N端被加工后成为50kDa的活性酶。该活性酶的重组表达已在CHO、NIH3T3和COS-7细胞中成功进行。虽然以前已经对几个活性明显不同的乙酰肝素酶有所描述,但克隆了不同来源(正常细胞和肿瘤细胞)乙酰肝素酶cDNA的4个研究小组报导的cDNA序列却一致。几种迹象都表明在肿瘤生长和转移形成中有降解ECM的葡糖醛酸酶参与(1)与相应的正常组织相比,乙酰肝素酶优先在人肿瘤组织的mRNA和蛋白水平上进行表达,如乳房侵入性导管癌、肝癌、卵巢腺癌、子宫颈鳞状细胞癌、结肠腺癌(Vlodavsky等,同前)。(2)在患有转移性瘤动物的血清和尿里及癌症患者上发现有乙酰肝素酶水平的增加。(3)乙酰肝素酶mRNA的表达和酶活性与人和大鼠乳房瘤细胞系的转移潜能有关。(4)低转移性瘤细胞需要在乙酰肝素酶cDNA的转染方面具有高转移表型,如鼠科T淋巴瘤L5178Y和小鼠B16-F1黑色素瘤(Vlodavsky等,同前)。(5)抑制乙酰肝素酶活性的硫酸寡糖PI-88(磷酸甘露戊糖(phosphomannopentaose)SO4)抑制初级肿瘤生长、转移形成和肿瘤血管化(Parish等,癌症,1999,593433-3441)。专利技术概述本专利技术提供了一种新的、分离的核酸分子,其含有一段编码具有内切葡糖醛酸酶活性多肽或其片段的核酸序列或与该核酸序列互补。本专利技术也涉及由该多核苷酸编码的多肽、其功能片段或功能衍生物或功能类似物。本专利技术另一方面涉及制备此多肽或此多核苷酸的方法。本专利技术再一方面涉及含有此多核苷酸的重组载体(优选与表达控制序列有效连接的)和用此重组载体转化的宿主细胞。而且,本专利技术涉及改变、修饰或以其它方式调节此多肽或此多核苷酸在细胞或生物体中表达水平的方法。本专利技术另一方面涉及利用此多核苷酸、或其片段或衍生物,或多肽、或其片段或衍生物进行诊断的方法。而且,本专利技术涉及特异性识别并结合于此多肽的抗体和利用此抗体进行诊断的方法。而且,本专利技术涉及含有此多核苷酸或此多肽或此抗体或其片段的药物组合物及含有此多核苷酸或此多肽或此抗体或其片段给药的治疗方法。本专利技术再一方面涉及鉴定能够调节该多肽生物活性的物质的方法及由此方法得到的物质。专利技术详述本专利技术提供了一种分离的核酸分子,其含有一段编码具有内切葡糖醛酸酶活性的多肽的核酸序列或其与该核酸序列互补。在其中的一个优选实施方案中,本专利技术所述的分离的核酸分子是这样的核酸分子,其含有(a)至少SEQ ID NO1所列核苷酸序列的蛋白编码部分,(b)在遗传密码的简并范围内与(a)序列相应的核苷酸序列,或(c)在严格条件下与(a)和/或(b)的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。本专利技术也提供了由本专利技术所述核酸分子编码的多肽。该多肽优选含有(a)SEQ ID NO2中列出的氨基酸序列或(b)与(a)的氨基酸序列具有至少70%,优选至少85%,更优选至少95%同源性的氨基酸序列。除了SEQ ID NO1中所列核苷酸序列和在遗传密码简并范围内与其相应的核苷酸序列以外,本专利技术也包括在严格条件下与上述序列之一杂交的核苷酸序列。本专利技术所述术语“在严格条件下杂交”是按Sambrook等(分子克隆,实验手册,冷泉港实验室出版,1989,1∶1.101-1.104)定义的。优选地,在严格条件下的杂交是指在用1xSSC和0.1%SDS在50℃(优选55℃,更优选62℃,最优选68℃)洗涤1小时后,特别是在0.2xSSC和0.1%SDS中50℃(优选55℃,更优选62℃,最优选68℃)洗涤1小时后可以观察到阳性的杂交信号。在上述洗涤条件下与SEQ ID NO1中所列核苷酸序列或在遗传密码简并范围内与其相应的核苷酸序列杂交的核苷酸序列也包括在本专利技术之内。本专利技术所述核苷酸序列优选DNA,例如cDNA、基因组DNA或合成DNA,其可以是双链也可以是单链,并且假如是单链的话可以是编码链也可以是非编码(反义)链。然而,它可以含有RNA,例如编码或非编码(反义)链的mRNA、前体mRNA和合成RNA或核酸类似物(如peptidic核酸)。本专利技术所述核苷酸序列特别优选含有SEQ ID NO1中所示核苷酸序列的蛋白编码部分或与SEQ ID NO1中所示核苷酸序列具有多于70%,优选多于85%,更优选多于95%同源性的序列或其具有长度为优选至少20个核苷酸,更优选至少30个核苷酸,最优选至少50个核苷酸的部分。在核苷酸或蛋白水平上的同源性测定如下I=n∶L,其中I代表同源性百分比,n代表在受检序列与分别选自核苷酸序列SEQ ID NO1、氨基酸序列SEQ ID NO2或其一部分的基本序列之间不同核苷酸或氨基酸的数目,L是与受检序列进行比较的基本序列的长度。本专利技术的多核苷酸可以从哺乳动物(例如人细胞)或从来源于哺乳动物(例如人细胞)的cDNA文库或基因组文库中获得。具体地说,此处描述的多核苷酸可从购自Incyte公司的cDNA文库(PENCNOT07,BLADNOT09,PROSTUT08,BRSTNOT27,MIXDNOP01,ESOGNOT04,PENCNOT03)中分离得到。SEQ ID NO1中所示的cDNA插入子长度为3943碱基对(bp)并含有编码长度为492个氨基酸蛋白的开放阅读框架。本专利技术多肽推断出的氨基酸序列与人乙酰肝素酶有38%的氨基酸同源性(附图说明图1)。本专利技术cDNA的5’末端是不完整的;推断的成熟蛋白从其与人乙酰肝素酶的同源性推测来看是完整的。电子表达(Northern)分析本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多核苷酸,含有(a)SEQ ID NO 1中所列序列或至少其蛋白编码部分,(b)在遗传密码的简并范围内与(a)序列相应的核苷酸序列,或(c)在严格条件下与(a)和/或(b)的序列杂交的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员:格哈德西梅斯特贝尔特拉姆魏斯
申请(专利权)人:舍林股份公司
类型:发明
国别省市:DE[德国]

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