癌症的治疗制造技术

本发明专利技术涉及治疗肿瘤的方法，该方法包括在需要治疗的个体中抑制血管发生，其特征在于通过给予该个体抑制ＥＧＲ诱导的制剂、降低ＥＧＲ表达的制剂或降低ＥＧＲ的核累积或活性的制剂而抑制血管发生。本发明专利技术还涉及筛选抑制血管发生的制剂的方法。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及治疗癌症的组合物和方法。越来越多的迹象表明肿瘤生长的细胞和分子学机制，不是仅涉及肿瘤细胞的增殖和迁移。重要地，据信肿瘤生长和转移依赖于血管发生，即新血管形成的过程(Crystal，1999)。血管发生(也称为新血管化)是通过血管内皮细胞的迁移和增殖介导的，萌发自现有的血管形成不断生长的微血管网，为不断生长的肿瘤提供必需的营养。如果没有活性的血管发生，原发的固体肿瘤的直径不会超过1-2mm(Harris，1998)。人HepG2肝细胞性癌细胞已经用作癌细胞系模型，以评估抗肿瘤药物(Yang等，1997)。这些细胞基础表达及可诱导地表达立即早期基因和转录调节物即早期生长应答因子-1(EGR-1)(Kosaki等，1995)。早期生长应答蛋白(EGR-1)早期生长应答因子-1(EGR-1，也称为Egr-1，NGFI-A，zif268，krox24和TIS8)，是一种立即早期基因的产物，及是转录调节物的锌指家族的一个原型成员(Gashler等，1995)。Egr-1结合参与动脉硬化和再狭窄的发病机理中的一系列基因的启动子。这些包括血小板衍生生长因子(PDGF)A-链(Khachigian等，1995)，PDGF-B(Khachigian等，1996)，转化生长因子-β2(Liu等，1996，1998)，成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)(Hu等，1994；Biesiada等，1996)，1型膜基质金属蛋白酶(Haas等，1999)，组织因子(Cui等，1996)和细胞间粘着分子-1(Malzman等，1996)。EGR-1还已经定位于人动脉硬化斑中的内皮细胞和平滑肌细胞(McCaffrey等，2000)。用序列特异性催化DNA抑制Egr-1基因诱导，会抑制进行气囊血管成形术后的大鼠颈动脉内膜增厚(Santiago等，1999a)。DNAzymes在人类基因治疗中，反义核酸技术是选择用于灭活这样一些基因的主要手段之一，所述基因的表达导致疾病及因此是非所需的。反义方法应用一种核酸分子，其互补于并从而与编码非所需基因的一种mRNA分子杂交。这种杂交导致基因表达受抑制。反义技术有一些缺点。反义杂交导致DNA/靶mRNA异源双链体形成。此异源双链体充当RNA酶H介导的靶mRNA组分降解的底物。在此，DNA反义分子以被动方式起作用，主要是通过内源性RNA酶H促进所需的裂解。考虑到反义分子具有与其靶mRNA形成稳定的异源双链体的化学性和能力，这种对RNA酶H依赖性限制了反义分子的设计。反义DNA分子还具有非特异性活性及在较高浓度甚至有毒性的问题。反义抑制靶mRNA表达的另一种机制例如是空间抑制翻译器沿着mRNA移动。作为反义分子的替代，催化性核酸分子已经示出可作为治疗剂抑制基因表达，在文献中已经广泛论述(Haseloff(1988)；Breaker(1994)；Koizumi(1989)；Otsuka；Kashani-Sabet(1992)；Raillard(1996)；和Carmi(1996))。因此，与常规反义分子不同，催化性核酸分子通过实际上裂解其靶mRNA分子而不是只与其结合而起作用。催化性核酸分子只能裂解一种靶核酸序列，如果这种靶序列符合某些最基本要求。靶序列必须互补于催化性核酸的杂交臂，及靶序列在裂解位点必须含有一个特异性序列。催化性RNA分子(核酶)已经充分论证(Haseloff(1988)Symonds(1992)；和Sun(1997))，并已经示出能裂解RNA(Haseloff(1988))和DNA(Raillard(1996))分子。确实，体外选择和演变技术的发展已经使得可使用己知核酶的随机变体或随机序列RNA作为起始点而获得新的抗已知底物的核酶(Pan(1992)；Tsang(1994)；和Breaker(1994))。然而，核酶在打算进行其功能的细胞内对酶解非常敏感。这反过来限制了其药物学应用。近来，产生了一类称为“DNAzymes”新的催化性分子(Breaker和Joyce(1995)；Santoro(1997))。DNAzymes是单链的，并裂解RNA(Breaker(1994)；Santoro(1997))和DNA(Carmi(1996))。已经提出一种DNAzyme的一般模型，称为“10-23”模型。根据“10-23”模型的DNAzymes，也简称为“10-23 DNAzymes”，具有由15个脱氧核糖核苷酸组成的一个催化结构域，两侧是均由7-9个脱氧核糖核苷酸组成的两个底物识别结构域。体外分析示出这种类型的DNAzymes在生理条件下，能在嘌呤嘧啶连接处有效地裂解其底物RNA(Santoro(1997))。DNAzymes示出作为治疗剂的前景。然而，DNAzymes是否成功对抗由存在已知mRNA分子所导致的疾病还不可预测。此不可预测性部分是由于两个因素，首先，一些mRNA的二级结构可阻止DNAzymes结合及连接其靶mRNA的能力。其次，表达靶mRNA的细胞对DNAzymes的吸收也许不足以有效产生有治疗意义的结果。本文所用术语“EGR”是指EGR家族的一个成员。EGR家族成员见Gashler等，1995所述，并包括EGR-1-EGR-4。通常优选的EGR家族成员是EGR-1。因此，本专利技术的第一方面提供了一种治疗肿瘤的方法，此方法包括为治疗对象施用一种抑制EGR诱导的制剂、降低EGR表达的制剂或降低EGR的核累积或活性的制剂。本专利技术的第二方面提供了一种抑制肿瘤细胞生长或增殖的方法，此方法包括将肿瘤细胞与抑制EGR诱导的制剂、降低EGR表达的制剂或降低EGR的核累积或活性的制剂接触。本专利技术的第三方面提供一种肿瘤细胞，该细胞已经通过在细胞中导入一种核酸分子而转化，此核酸分子包含或编码(i)一种抑制EGR诱导的制剂，(ii)一种降低EGR表达的制剂，或(iii)一种降低EGR的核累积或活性的制剂。本专利技术的第四方面是提供一种筛选抑制血管发生的制剂的方法，该方法包括测试一种推定制剂的抑制EGR诱导、降低EGR表达或降低EGR的核累积或活性的能力。在本专利技术的一个优选的实施方案中，所述制剂选自以下一组EGR反义寡核苷酸，定向针对EGR的核酶，定向针对EGR dsDNA的ssDNA，这样ssDNA与EGR-1 dsDNA形成三链体，和定向针对EGR的DNAzyme。附图说明图1胰岛素刺激血管内皮细胞中Egr-1依赖性基因表达。将预先用pEBSl3foscat使用FuGENE6转染的生长停滞的牛大动脉内皮细胞与D一葡萄糖(5-30mM)，胰岛素(100nM)或FGF-2(25ng/ml)如示温育，之后制备细胞裂解物。CAT活性根据裂解物中蛋白质浓度归一化。图2在大动脉内皮细胞中胰岛素诱导的DNA合成被定向于Egr-1的反义寡核苷酸阻断。A.胰岛素刺激DNA合成。将生长停滞的内皮细胞用胰岛素(100nM或500nM)或FBS(2.5％)温育18小时，之后用3H-胸苷另外脉冲6小时。B.反义Egr-1寡核苷酸抑制胰岛素诱导的DNA合成。将内皮细胞用0.8μM的AS2，AS2C或E3温育，之后暴露于胰岛素(500nM或1000nM)18小时，并用3H-胸苷脉冲6小时。C.胰岛素本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗肿瘤的方法，该方法包括为需要治疗的对象施用抑制ＥＧＲ诱导的制剂、降低ＥＧＲ表达的制剂或降低ＥＧＲ的核累积或活性的制剂。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：莱翁迈克尔卡奇吉安，
申请(专利权)人：尤尼瑟驰有限公司，
类型：发明
国别省市：AU[澳大利亚]