本发明专利技术提供了一种农用微生物制剂，该微生物制剂含有多粘类芽孢杆菌或利用该菌培养而得的发酵清液。本发明专利技术的微生物制剂不仅可用来防治植物细菌性青枯病，而且还可用来防治植物苗期立枯病、猝倒病，以及黄瓜枯萎病、番茄枯萎病、茄子枯萎病、烟草赤星病、大豆根腐病，并且对植物具有明显的促进生长作用。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物领域。具体地说，本专利技术涉及一种防治青枯病的微生物制剂及其方法和用途。
技术介绍
青枯病是由青枯劳尔氏菌(Ralstonia Solanacearum)引起的一类世界性的土传植物病害，在热带和亚热带地区发病普遍，危害严重。青枯病菌的寄主范围很广，在植物的根内和土壤中有很强的存活能力，可侵染44个科300多种植物。对于植物青枯病的防治，多年来国内外均予以高度重视。然而迄今为止，抗青枯病的作物品种很少，抗性低且抗性极易丧失，这主要是由于青枯病病原菌群的复杂性和作物品种本身等因素所致。此外，抗病品种品质差、产量低，难以推广。其它方法，如嫁接虽获得成功，但由于其技术难度高，难以大面积推广；农业措施如水旱轮作等受地域条件限制，也难以大面积推广。农药如农用链霉素、铜试剂(如77％可杀得)等虽然在田间表现出一定的防效，但由于这些农药均不是防治青枯病的农药，因而田间防效较差，不稳定，且病原菌易对这些农药产生抗药性。因此，目前尚无防治植物青枯病的有效药剂。青枯病的发病机理大致如下存在于土壤中的青枯病病原菌在寄主作物的整个生长期均可通过植物根系侵染植物内部并潜伏，在合适条件(如高温、高湿)下潜伏在植物体内的青枯病病原菌便大量繁殖，堵塞植物的维管束发展成为病害。针对上述特点，可采用从作物苗期开始防止病原菌从根系侵入和潜伏并阻止潜伏病原菌发展成为病害的防治策略。从80年代初开始，国内外在采用无致病力的青枯假单胞菌菌株防治青枯病的研究和应用方面开展了许多工作，发表了大量的文章。但研究工作几乎都停留在温室阶段，至今大田试验尚未取得成功。同时，无致病力的青枯假单胞菌菌株在自然条件下还可能存在变异，因此，其应用潜力不大。另外，细菌素产生菌株(ABPS)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、颍壳假单胞菌(Pseudomonas glumae)及其变种、洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia B5)、青枯假单胞菌(Pseudomonas solanacearum)的变种、芽胞杆菌(Bacillus spp.B33和B36)以及泡囊丛枝菌根真菌(VAM)等生防菌株也被先后用来防治植物青枯病。然而，这些菌株也仅仅在温室或田间苗期有效果，而在定植40天后几乎没有防治效果。因此，本领域中迫切需要能够有效防治植物青枯病的新的微生物制剂和方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了提供能够防治植物青枯病的新的微生物制剂和方法。专利技术者通过研究从江西南昌郊区土壤中筛选分离获得的一株多粘类芽孢杆菌，该菌株的活菌、发酵液或发酵清液在大田试验中成功地防治了番茄、辣椒、茄子和烟草青枯病，从而完成了本专利技术。该菌株已经于2002年10月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC No.0829。因此，本专利技术第一方面提供了一种多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)HY96-2，其保藏号为CGMCC No.0829。本专利技术第二方面提供了一种农用微生物制剂，该微生物制剂含有多粘类芽孢杆菌活菌或利用该菌培养而得的发酵清液。在一个具体实施方案中，该多粘类芽孢杆菌是CGMCC No.0829。在一个较佳的实施方案中，所述微生物制剂含有利用该菌培养而得的发酵液，如含有多粘类芽孢杆菌CGMCC No.0829的活菌以及利用该菌培养而得的发酵清液。本专利技术所用的术语“发酵液”、“活菌”、“发酵清液”具有本领域技术人员通常熟知且承认的含义。所述发酵液可通过在适合生长的条件下培养本专利技术的多粘类芽孢杆菌CGMCC No.0829(即下文所称的“生防菌HY96-2”)，使其生长至一定的细菌浓度来获得；所述的活菌是指通过生物法培养生防菌而得到的具有生活能力的菌体；所述的发酵清液是指将发酵液通过分离去除其中的菌体而得到。用于培养本专利技术菌株的培养基中的营养源没有特别的限制。本领域技术人员可以根据公知的技术来选择合适的碳源、氮源和其它营养源。例如，碳源可以是淀粉、糊精、甘油、葡萄糖、蔗糖、肌醇、甘露醇等。氮源可以是胨、大豆粉、蛋白粉、肉膏、米糖、麦皮、酵母粉、玉米浆、铵盐以及其它有机或无机含氮化合物。另外，培养基中还可适当加入一些无机盐类，如氯化钠、磷酸盐如磷酸氢二钾和磷酸二氢钾、硫酸铵、硫酸锰、硫酸镁、碳酸钙等金属盐。通常可采用各种已知的常规培养基，如LB琼脂培养基、营养琼脂培养基、葡萄糖酵母膏琼脂培养基和牛肉浸汁琼脂培养基等。下文实施例中给出了一个最适培养基的配方。然而，本领域技术人员应当理解，本专利技术并不局限于本文中列举的这些具体培养基配方。培养本专利技术菌株时的温度、pH、通气比、罐压、转速等条件没有特别严格的限制，只要该条件适合所述菌的生长即可。在培养时可采用豆油、泡敌等消泡剂进行消泡。在一些较佳的实施方案中，pH宜控制在5.5-7.5之间。培养温度宜在25-35℃之间。培养时间通常在12小时至72小时之间。最终的菌浓度通常可高达1×1011CFU/ml至1×1012CFU/ml。然而，上述列举的这些参数只是实现本专利技术目的的较佳方案。因此，本领域技术人员在上述范围以外选择合适的培养条件也能获得本专利技术的活菌体、发酵清液、发酵液。本专利技术的微生物制剂例如可以直接以发酵液形式施用，也可将其适当稀释(例如稀释10倍、100倍、1000倍或更高)以稀释液形式施用，还可用本领域常规技术对所述发酵液进行分离提取。获得的活菌体、发酵清液以及从中获得的提取物也可直接施用。微生物制剂中还可含有不影响发酵液防治青枯病效果的其它物质。例如，为了便于长期贮存，可将发酵原液或其稀释液与合适的载体混合，然后适当干燥，制成载体形式的微生物制剂。这些载体对本专利技术的活菌体、发酵清液以及发酵液防治植物青枯病效果无影响。因此，在一个较佳的实施方案中，所述微生物制剂还含有选自稻壳粉、玉米秸粉、草炭土、轻质碳酸钙、滑石粉、凹凸棒土和/或硅藻土的载体及其混合物，其中较佳的载体是稻壳粉、凹凸棒土或玉米秸粉。这些载体均可市售购得。载体宜事先加工研磨成粒度在10-200目之间。载体与含活菌的菌悬液、发酵清液或发酵液宜以1∶0.1至1∶10的重量比例，更佳的为1∶0.2至1∶5的重量比例混合。上述干燥步骤可以采用本领域中的常规技术，例如但不局限于，自然干燥法、真空干燥法、气流干燥和沸腾床干燥法等。为了能使多粘类芽孢杆菌尽可能保持较高的活性和较长的贮存期，有机载体形式的微生物制剂的含水量宜控制在3-16％(重量)之间，更佳的为7-16％(重量)之间，无机载体形式的微生物制剂的含水量宜控制在3-6％(重量)之间。本专利技术另一方面提供了一种防治植物细菌性青枯病的方法，该方法包括将本专利技术上述微生物制剂施加到患青枯病植物的根部上的步骤。上述将微生物制剂施加到植物根部上的方法是本领域中的常规技术，例如可以是在播种时浸种，移栽前将植物根部浸在发酵液或其稀释液中，或者直接将发酵液或稀释液泼浇在苗床上，可定植时进行灌根，也可在植物生长过程中灌根。若微生物制剂是以载体形式保存的，则可在临用前用水稀释后再进行施加。本领域技术人员无需经过过多试验即可确定本专利技术的最适施药剂量。例如，当以稻壳粉作为载体时，较佳的施药剂量在平均每亩(667平方米)本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种多粘类芽孢杆菌（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ）ＨＹ９６－２，其保藏号为ＣＧＭＣＣ Ｎｏ．０８２９。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李元广，王伟，沈国敏，魏鸿刚，汪荣津，邓嘉璐，孙新志沈明，
申请(专利权)人：李元广，王伟，沈国敏，魏鸿刚，汪荣津，邓嘉璐，孙新志沈明，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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