一种简化的细胞冻存降温方法技术

技术编号:1725235 阅读:229 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
一种简化的细胞冻存降温方法,其特征在于:将活性细胞混入细胞冻存液中,分装于无菌塑料小管内,直接浸入液态氮中,长期保存。本发明专利技术与现有技术相比,其优点是:缩短了细胞冻存的操作过程,节约时间8-24小时;省去了三种不同温度的低温设备,降低工作成本,提高工作效率,不影响冻存细胞的复苏率。(*该技术在2022年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及组织细胞培养技术,广泛适用于细胞生物学
长期以来,国内外常用的组织培养冻存细胞技术中的降温过程,是将具有生物活性的细胞溶液,从37℃的生长状态,采用逐级降温法的过程冻存,即活性细胞悬液→-20℃,2-4小时→-40℃,2-4小时→-80℃,8-16小时→浸入液态氮(-196℃),此过程最短需要8小时,最长需要4-24小时,同时需要3种不同温度的低温设备。采用常规逐级降温法冻存的细胞,在排除其他影响的条件下,是安全、可靠的,不影响细胞的复苏率,细胞复苏率是指在长期冷冻保存状态下的细胞,经过复苏过程,恢复其活性与生物学特性的细胞数量。所以细胞冻存、复苏的任一过程都与复苏率相关。专利技术的
技术实现思路
本专利技术目的是提供,该方法可以在保持较高细胞复苏率的前提下,减少冻存操作时间,并且同时减少了低温设备。为了达到上述专利技术目的,本专利技术采用的技术措施是将活性细胞混入细胞冻存液中,分装于无菌塑料小管内,直接浸入液态氮中,长期保存。本专利技术与现有技术相比,其优点是缩短了细胞冻存的操作过程,节约时间8-24小时;省去了三种不同温度的低温设备,降低工作成本,提高工作效率,不影响冻存细胞的复苏率。细胞复苏率1、从液态氮中取出冻存的地鼠肾细胞(BHK-21)、人鼻咽癌组织细胞(Hep-2)、猪肾细胞(PK)、人肝癌细胞(7721)各一小管→37℃水浴中,3分钟速溶→加入8毫升细胞培养液,离心4000转/10分钟→弃上清→加入10%小牛血清MEM培养液10毫升/瓶→静置37℃,培养16小时-24小时; 2、光镜下观察复苏后的细胞状态,可见地鼠肾细胞(BHK-21)、人鼻咽癌组织细胞(Hep-2)、猪肾细胞(PK)、人肝癌细胞(7721)均见细胞大面积贴壁生长,细胞形态好,大小均匀,折光性好;3、复苏率显示BHK-21细胞复苏率约65%,Hep-2细胞复苏率约70%,PK细胞复苏率约63%,7721细胞复苏率约73%;4、培养48小时后,细胞生长成单层,继续传代培养;5、完成了细胞复苏生长繁殖周期。比较例细胞冻存过程取培养生长成单层的地鼠肾细胞(BHK-21)、人鼻咽癌组织细胞(Hep-2)、猪肾细胞(PK)、人肝癌细胞(7721)各一瓶→0.25%胰蛋白酶液,消化3分钟→弃胰酶液→加入MEM培养液10毫升,吹打混匀细胞悬液→离心4000转/10分钟→弃上清→加入细胞冻存液2毫升/管,置入洁净塑料小管→-20℃,2小时→-40℃,4小时→-80℃,8小时→浸入液态氮中保存两年。细胞复苏率1、从液态氮中取出冻存的地鼠肾细胞(BHK-21)、人鼻咽癌组织细胞(Hep-2)、猪肾细胞(PK)、人肝癌细胞(7721)各一小管→37℃水浴中,3分钟速溶→加入8毫升细胞培养液,离心4000转/10分钟→弃上清→加入10%小牛血清MEM培养液10毫升/瓶→静置37℃,培养16小时-24小时;2、光镜下观察复苏后的细胞状态,可见地鼠肾细胞(BHK-21)、人鼻咽癌组织细胞(Hep-2)、猪肾细胞(PK)、人肝癌细胞(7721)均见细胞大面积贴壁生长,细胞形态好,大小均匀,折光性好;3、复苏率显示BHK-21细胞复苏率约64%,Hep-2细胞复苏率约72%,PK细胞复苏率约63%,7721细胞复苏率约70%;4、培养48小时后,细胞生长成单层继续传代培养;5、完成了细胞复苏生长繁殖周期。权利要求1.,其特征在于将活性细胞混入细胞冻存液中,分装于无菌塑料小管内,直接浸入液态氮中,长期保存。全文摘要,其特征在于将活性细胞混入细胞冻存液中,分装于无菌塑料小管内,直接浸入液态氮中,长期保存。本专利技术与现有技术相比,其优点是缩短了细胞冻存的操作过程,节约时间8-24小时;省去了三种不同温度的低温设备,降低工作成本,提高工作效率,不影响冻存细胞的复苏率。文档编号C12N5/00GK1415745SQ0214470公开日2003年5月7日 申请日期2002年12月6日 优先权日2002年12月6日专利技术者李天宪, 范兆军, 陈绳亮, 熊克娟, 张忠 申请人:中国科学院武汉病毒研究所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种简化的细胞冻存降温方法,其特征在于:将活性细胞混入细胞冻存液中,分装于无菌塑料小管内,直接浸入液态氮中,长期保存。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:李天宪范兆军陈绳亮熊克娟张忠
申请(专利权)人:中国科学院武汉病毒研究所
类型:发明
国别省市:83[中国|武汉]

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