双歧杆菌在制备预防腹泻药物中的用途制造技术

本发明专利技术涉及属于双歧杆菌的微生物的应用于制备一种载体，这种载体可用于治疗或预防腹泻。本发明专利技术也涉及含有这样的微生物的食物或药品的组合物。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及将非病原性微生物双歧杆菌类用于制备一种载体和加入食品或药物来治疗或预防轮状病毒引起的腹泻，以及涉及含有此微生物的食品或药物组合物。很早以来人们就知道产生主要代谢组合物乳酸的生物体。在牛奶或牛奶处理工厂中，活着或腐烂的植物中，也可在人和动物的肠子中发现这些细菌。这些被概括为术语“乳酸细菌”的微生物，代表了一组相当不同类的细菌包括例如乳球菌属(Lactococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)，链球菌(Streptococcus)、双歧菌属(Bifidobacterium)、片球菌属(Pediococcus)。乳酸细菌作为低pH值条件下保存食物的发酵剂使用，发酵产物的作用抑制有害细菌的生长。另外，乳酸细菌也用于制作不同的乳制品例如奶酪、酸奶酪和其他发酵的奶制品。近期，乳酸细菌的一些菌株显示出对人和动物的吸收颇有价值的特性，引起了人们的密切关注。特别是，特殊的乳酸菌或双歧菌的菌株被发现能够在肠内膜上定居并且有助于维持人和动物的健康。在这方面，欧洲专利EP0768375公开了双歧菌的特异性菌株，这种菌株能够灌输进入肠内并且粘附在肠细胞上。报道说这些双歧细菌有助于免疫功能，能够竞争性抑制病原性细菌对肠内细胞的粘附，有助于维持生物个体的健康。最近几年的科研集中在乳酸细菌作为益生菌试剂的潜在应用。益生菌被认为是能通过保持肠内自然微生物区系促进生物个体健康的可生长的微生物制剂。微生物制剂通常被认为是益生菌也就是这种有效的微生物并且人们已经知道了它们作用的模式。益生菌贴附在肠粘膜上，在肠道内建群并且防止有害微生物在其上粘附。对于它们在肠内发挥作用的至关重要的先决条件是它们必须以一种适当的能存活的方式粘附到内脏的粘膜上而且在胃肠上部不被消灭，特别是不受胃内低pH区域的影响。在这方面，作为这样的一种益生菌，WO97/00078公开了一种特异性菌株，称为乳酸菌GG(ATCC53103)。在防止或治疗食物诱发的过敏反应的方法中特定的使用这种微生物，也就是将其和已经经过用胃蛋白酶和/或胰岛素以及进行水解处理的食品给药于受体。所选择的乳酸菌菌株显示了粘附和生长性能及蛋白酶体系，以至于含在将被给药的食物的蛋白质通过被这种特殊的乳酸菌分泌的蛋白酶进一步水解。这份文件所讨论的方法最终导致蛋白质被内脏消化，没有显示出存在任何引起过敏的物质。更进一步，在EP 0 577 903参考资料中采用了这种乳酸菌，它具有取代幽门螺杆菌的能力，幽门螺杆菌公认是引起溃疡的原因，上述制备可以治疗和预防幽门螺杆菌引起的溃疡。乳酸菌特殊菌株显示出有价值的特性，现有技术目的在于希望发现细菌菌株能够有益于人类和/或动物的健康的其它的特性。因此，本专利技术要解决的问题是提供另外的乳酸菌，它对生物体的摄食机能产生有益的作用。在导致本专利技术的研究过程中，双歧杆菌类微生物没有被确定的性质现在被令人惊奇的发现了。本专利技术提供了属于双歧菌且能够基本上防止轮状病毒感染肠内细胞的微生物在用于腹泻的治疗或护理的载体中的应用。所用的双歧杆菌优选从青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)的或长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)中选择组成，优选青春双歧杆菌，更优选双歧杆菌CNCM I-2168。微生物可以用于一种可吸收的载体制备，例如牛奶、酸奶酪、凝乳、发酵奶、奶基发酵产品、发酵谷类产品、奶粉(milk based powders)、婴儿食品或宠物食品，且以大约105cfu/g到1011cfu/g的量包含在载体中。本专利技术采用的缩写cfu的意思是“菌落形成单位”，定义为琼脂板上的微生物计数所表示的细菌细胞的数目。本专利技术也提供一种食品或药物组合物，含有至少一种双歧杆菌菌株，能够基本上防止肠细胞被轮状病毒感染。本专利技术制备的食物组合物至少使用一种双歧杆菌菌株并以大约105cfu/g到1011cfu/g的含量，和合适的载体混合在一起，优选含量为大约106cfu/g到1010cfu/g，更优选大约为107cfu/g到109cfu/g.。药品可以以片剂、液体细菌悬浮液、口服补充剂(oral supplement)、湿口服补充剂、干管饲或湿管饲等形式制备，所用的双歧杆菌菌株的含量高达1012cfu/g，优选大约107cfu/g到1011cfu/g，更优选107cfu/g到1010cfu/g。微生物可以进一步被配制于载体内，以获得所希望的释放模式如胶囊剂等等。依据本领域技术人员的目的，可以选择适当的赋形剂和/或添加剂。微生物在生物体肠内的活性当然取决于剂量。也就是分别通过上述食品或药物组合物摄入的微生物越多，保护和/或治疗的作用越高。由于所用的微生物对于人类或动物无害，实际上是从自然环境中分离出来的，也就是从婴儿的粪中分离出来的，加入的量高，生物体肠内微生物建群的比例也就高。在这些图中附图说明图1显示用于评价细菌菌株对轮状病毒的保护特性的细胞培养物的图例说明。在本专利技术的广泛研究时，专利技术人调查了从婴儿粪便中分离的不同细菌菌株或从美国组织及细胞保藏中心获得不同的细菌菌株(ATCC15704)。检验这些不同的菌株防止肠细胞被轮状病毒引起腹泻的能力。由于具有抑制轮状病毒的性能，几种细菌包括双歧杆菌属、乳球菌属、链球菌属类被筛选。用三种轮状病毒的血清型进行抑制性能试验，这三种轮状病毒血清类型代表了人类病毒腹泻的主要病原因子(血清型G1、G3和G4)。各种乳酸细菌在适当的培养基中生长，例如在它们适合的培养基MRS、Hugo-Jago或M17培养基中，最佳的生长温度30到40℃。在这些细菌稳定生长后采用离心分离和在生理食盐溶液中重新悬浮收集这些细菌。这些不同试验之间中的细菌细胞被冷冻储存(-20℃)。通过融合细胞单层的感染制备各种轮状病毒原种。在感染之前培养这些轮状病毒。这些细胞用20个组织培养感染剂量感染。为了评估抗轮状病毒的特性采用了两种不同的方案。一个方案直接检验和轮状病毒直接作用的这些不同细菌菌株，而同时另一个方案使这些菌株和细胞轮状病毒的受体交互作用并筛选这些细菌。第一个方案涉及采用不同的轮状病毒菌株与各自的细菌悬浮液相接触并在在合适的培养基中培养。然后将这种病毒-细菌混合物施加在人类未分化的结肠腺瘤细胞HT-29的单层细胞上(肠内上皮细胞系)并连续培养。然后检验病毒复制。第二个方案涉及首先将各自的细菌悬浮液和人类未分化的结肠腺瘤细胞HT-29一起培养然后再加入这种病毒。在连续培养后检验病毒复制。轮状病毒的复制很容易采用感染细胞中的轮状病毒蛋白质的组织免疫着色法来检测。当和轮状病毒加上指定的细菌一起培养的细胞培养基中的感染细胞与仅与轮状病毒一起培养的细胞相比时感染细胞的数目减少到90％时，显然轮状细胞的抑制作用被施加于给定的细菌。总数超出260种的不同的细菌菌株中只有4种具有抑制轮状病毒复制的作用。这些不同细菌属于双歧杆菌属的亚种青春双歧杆菌或长双歧杆菌。属于青春双歧杆菌的已命名为Bad4，根据布达佩斯条约被保存并获得保存号CNCM I-2168。这种菌株证明能够极其有效的防止人类细胞被轮状病毒感染。本专利技术将采用举例的方法描述。培养基和溶液MRS(Difco)，Hugo-Jago(蛋白胨Difco 30g/l，酵母提本文档来自技高网...

【技术保护点】
属于双歧杆菌属的能够防止轮状病毒感染肠细胞的乳酸细菌在制备一种可以治疗和预防腹泻的载体中的应用。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：H布吕索，R雷尼洛，J斯多蒂，
申请(专利权)人：雀巢制品公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]