应用微器官诱导血管生成的方法技术

技术编号:1725046 阅读:197 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术提供了在哺乳动物组织中诱导血管生成的方法。所述方法包括在哺乳动物组织中植入至少一个微器官的步骤,其中,至少有一个微器官可以产生多种血管生成因子,进而诱导血管生成。(*该技术在2020年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】

和背景本专利技术涉及应用微器官、微器官提取物和含有所述提取物的药用组合物刺激宿主组织血管生成的方法。本专利技术还进一步涉及转化了外源性核苷酸序列的微器官和应用这些微器官为宿主组织提供血管生成因子的方法。在过去的几年中,很多研究为深入探讨诱导调控血管生成的分子机理提供了新的见解。血管生成生长因子的发现使研究人员意识到,可以在缺血组织区应用这些因子作为血管再生剂。所述血管生成生长因子如血管内皮生长因子(VEGF),碱性成纤维生长因子(bFGF),血管生成素和其他一些因子。业已尝试了应用基因治疗和重组蛋白技术的几种不同方法。尽管在动物实验中,初步结果喜人,但直到目前为止进行的临床试验,结果却令人失望(Ferrara and Alitalo,1999 Nature Medicine 5(12)1359-1364)。临床水平的不成功至少可以部分归结于在这些试验中应用的基因治疗或重组蛋白技术。业已显示,体内血管生成受到一整套复杂、互动因子的影响和调控,所述因子包括刺激因子和抑制因子(见Irula-Arispe and Dvorak,1997Thrombosis and Haemostasis 78(1),672-677;Gale and Yancopolous,1999Genes and Development 13,1055-1066)。此外,目前认为,诱导血管生成需要长期持续的刺激。因此,目前不能解决这些问题的基因治疗和重组生长因子技术,不能为促进体内血管生成提供必要的条件。最近,本专利技术的专利技术者描述了一种生成微器官的方法,所述微器官可以在体外以自治功能状态维持相当长一段时间。这些微器官的制备、保存及其某些应用在下述文献中有述,这些文献在此引入,作为参考,如美国专利号5,888,720、美国专利申请号09/425,233、PCT/US98/00594以及下述部分的优选实施方案。在将本专利技术付诸实践的过程中,也就是下面实施例部分的详细描述,我们发现,当将这些微器官植入活体组织时,它们为组织提供了持续的一整套复杂调控血管生成因子,诱导了显著的新生血管。我们还发现,无论正常动物还是老龄动物,植入的微器官都可以使外科手术诱导的缺血区恢复。因此,本专利技术提供了诱导血管生成的新的有效方法,该方法可以用来治疗缺血组织,突破了先前方法的局限性。专利技术简述根据本专利技术的一个方面,提供了在第一个哺乳动物组织中诱导血管生成的方法,所述方法包括在第一个哺乳动物组织中植入至少一个微器官的步骤,其中,至少有一个微器官可以产生多种血管生成因子,进而诱导血管生成。根据本专利技术的另一个方面,提供了在第一个哺乳动物组织中诱导血管生成的方法,所述方法包括步骤(a)从至少一个微器官中提取可溶性分子;和(b)给第一个哺乳动物的组织应用至少一剂预定剂量的从步骤(a)提取的可溶性分子。根据本专利技术的另一个方面,提供了含有多种细胞的微器官,其中,多种细胞中至少有一部分包括至少一个外源性多核苷酸序列,所述至少一个外源性多核苷酸序列可以调控细胞中至少一种血管生成因子的表达。根据本专利技术的另一个方面,提供了药用组合物,所述药用组合物包括从至少一种微器官中提取的可溶性分子和药用载体。根据本专利技术的另一个方面,提供了在第一个哺乳动物组织中诱导血管生成的方法,所述方法包括以下步骤(a)在生长培养基中培养至少一个微器官,从而产生条件培养基;(b)在培养至少一个预定时期后,收获条件培养基;(c)给第一个哺乳动物的组织应用至少一剂预定剂量的从步骤(b)收获的条件培养基,进而诱导组织血管生成。根据下述本专利技术优选实施方案的另一个特点,生长培养基是基本必需培养基。根据所述优选实施方案的另一个特点,至少一个微器官取自第二个哺乳动物的器官组织。根据所述优选实施方案的另一个特点,第一个哺乳动物和第二个哺乳动物是单个哺乳动物(single individual mammal)。根据所述优选实施方案的另一个特点,器官选自肺脏、肝脏、肾脏、肌肉、脾脏、皮肤或其他任何内脏。根据所述优选实施方案的另一个特点,至少一个微器官包括两种或两种以上类型的细胞。根据所述优选实施方案的另一个特点,第一个哺乳动物是人类。根据所述优选实施方案的另一个特点,在将至少一个微器官植入第一个哺乳动物组织内之前,体外培养至少4小时。根据所述优选实施方案的另一个特点,至少一个微器官制备成在植入哺乳动物组织中时,依然具有活性。根据所述优选实施方案的另一个特点,至少一个微器官具有维度,这样位于至少一个微器官最深处的细胞,距离至少一个微器官最近表面至少约100微米,但不超过约225-350微米。根据所述优选实施方案的另一个特点,多种血管生成因子中的每一种在至少一个微器官中都具有独特的表达模式。根据所述优选实施方案的另一个特点,至少一个微器官的至少一部分细胞包括至少一个外源性多核苷酸序列,选择的该序列可以调控血管生成。根据所述优选实施方案的另一个特点,至少一个外源性多核苷酸序列整合到至少一个微器官的至少一部分细胞的基因组中。根据所述优选实施方案的另一个特点,设计的至少一个外源性多核苷酸序列可以调控多种血管生成因子中至少一种血管生成因子的表达。根据所述优选实施方案的另一个特点,至少一个外源性多核苷酸序列包括增强子或抑制子序列。根据所述优选实施方案的另一个特点,至少一个外源性多核苷酸序列的表达产物可以调控多种血管生成因子中至少一种血管生成因子的表达。根据所述优选实施方案的另一个特点,至少一个外源性多核苷酸序列编码至少一种重组血管生成因子。本专利技术通过提供在哺乳动物组织中诱导血管生成的方法、提取物和药用组合物,成功克服了目前已知配制的缺陷。附图简述本专利技术仅通过实施例的方式阐释,附图作为参考。应用详细描述的特定附图作为参考,并强调特定附图仅以示例的形式呈现,目的仅仅是举例说明本专利技术的优选实施方案,并提供业已被认为是本专利技术最有用、并已被深入理解的原则和概念描述。在此方面,并未试图显示本专利技术的结构细节,只提供了为理解本专利技术的基本原则所必需的细节,采用的附图描述使本领域技术人员明确,在实践中,如何实现本专利技术的几种形式。附图附图说明图1是一张照片,显示了在植入微器官周围的新生血管(以箭头标记)。图2显示了移植微器官中表达的多种血管生成因子的相对水平。Ang1-血管生成素1,Ang2-血管生成素2,MEF2C-肌细胞增强因子2C,VEGF-血管内皮生长因子。图3显示了微器官制备后体外培养多个时间点后,从中提取的RNA的血管生成因子特异性RT-PCR结果。Actin-β肌动蛋白(对照)。图4代表了应用密度计量学测定图3所示RT-PCR产物的半定量结果,用β肌动蛋白RT-PCR产物密度(对照)进行标准化。图5是一个柱状图,代表髂总动脉结扎大鼠植入微器官或安慰品(对照)后的选通控制图。(n)=13。三个时间组(从左到右)的P值为0.16,1和0.841。评分0-功能完全,9-完全不能移动肢体,10-肢体丧失。图6是一个柱状图,代表与图5相同的实验组,只是在选通控制行为评分前给动物施加压力。三个时间组(从左到右)的P值为0.0001,0.0069和0.06。图7是一个柱状图,代表代表髂总动脉结扎小鼠植入微器官或安慰品后的选通控制图。评分0-功能完全,9-完全不本文档来自技高网...

【技术保护点】
在第一个哺乳动物组织中诱导血管生成的方法,该方法包括在第一个哺乳动物组织中植入至少一个微器官的步骤,所述至少一个微器官可以产生多种血管生成因子,进而诱导血管生成。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员:EN米特拉尼
申请(专利权)人:耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展公司
类型:发明
国别省市:IL[以色列]

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