本发明专利技术提供了一种重组Ｆｌｔ３配体基因，其中的密码子适合ＣＨＯ细胞表达。本发明专利技术还提供一种包含该重组基因的融合基因。当本发明专利技术的基因或融合基因表达时，其在ＣＨＯ等哺乳动物细胞中的表达量及其对Ｆｌｔ３的亲和力均显著提高。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及Flt3配体(c-fms样酪蛋白激酶3配体)的重组基因，以及含该重组基因的融合基因及其产物。
技术介绍
Flt3配体有非常独特的生物学用途，它是早期造血生长因子，作用于表达Flt3受体的原始造血干/祖细胞，使之增殖和分化，并抑制它们的凋亡，是造血干细胞的激动剂和保护剂。其天然基因序列已被测定，并获得了GenBank登录号T03858。近来研究表明，Flt3配体还能显著地增加树突状细胞(Dendritic cells，DC)和自然杀伤细胞(natural killer cells，NK)的数量和功能，由于DC和NK在机体的免疫监督和免疫调控中起到重要的作用，因此Flt3配体在抗肿瘤免疫方面有很好的应用前景。鉴于DC和NK在机体免疫反应中的关键作用，因此Flt3配体有望应用于肿瘤的治疗中，其有效性已经在白血病、纤维肉瘤、黑色素瘤、淋巴瘤、前列腺癌、乳癌、肺癌等多个动物实验中得到了证明。全身应用重组的Flt3配体蛋白，均能在这些不同的肿瘤实验模型中，引起部分肿瘤消退或者生长速度明显减慢，并且可能激发肿瘤特异性免疫反应。目前，Flt3配体的重组蛋白主要与其他细胞因子联合应用或进行基因治疗，提高了疗效。但是，由于恶性肿瘤通过各种机制逃脱机体的免疫监控，在抑制机体的免疫力的同时，自身的异常抗原不被机体识别和有效提呈加速了肿瘤的形成和发展，这可能是Flt3配体对一些免疫原性差的肿瘤不能导致其完全消退和控制远处转移的原因之一。将其与肿瘤局部放疗联合，能导致肿瘤细胞凋亡，使照射后的细胞成为理想的癌抗原缓释库，DC能获得凋亡细胞的抗原并有效提呈，刺激特异性CD8+CTL的增生，在局部肿瘤消退的同时能减少肺脏远处转移，从而延长高度转移性的低免疫原性Lewis肺癌模型小鼠的生存率，首次证明了Flt3配体与放疗等肿瘤传统疗法联合应用的可能性。因此，作为早期造血生长因子的Flt3配体，具备了独特而又强大的增强免疫功能，其重组蛋白单独或与其它细胞因子联合全身应用，或基因治疗均被证明能产生显著的抗肿瘤效果，在肿瘤的预防和治疗方面显示出很好的临床应用前景。然而，现在的技术仍然存在表达量低，Flt3配体与Flt3亲和力小的问题，不能满足本领域对抗肿瘤免疫日益增长的需要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种重组的Flt3配体基因，它能够提高该基因在哺乳动物细胞内的表达。本专利技术的目的还在于提供一种含有该重组基因的融合基因，以及由此得到的融合蛋白，该融合蛋白具有更强的免疫活性。本专利技术的目的还在于提供含有本专利技术重组基因的重组载体，可转染哺乳动物细胞而实现高表达。在本专利技术的一个实施例中，提供了一种重组Flt3配体基因序列，该重组Flt3配体基因具有SEQ ID NO3的核苷酸序列。在本专利技术的另一个实施例中，提供了一种融合基因，该融合基因含有重组Flt3配体基因序列和与之融合的人IgG1抗体可结晶片段(Fc，crystallizablefragment)基因。在本专利技术的一个优选例中，该融合基因还包含一段位于重组Flt3配体基因与人IgG1抗体Fc片段之间的接头序列，其DNA序列编码SEQ IDNO5的氨基酸序列。在另一个优选例中，该接头的DNA序列是SEQ ID NO4。在本专利技术的还有一个实施例中，提供了一种重组载体，该重组载体含有上文实施例中所述的融合基因。在本专利技术的另一个实施例中，提供了一种宿主细胞，该宿主细胞被上述载体转染。在本专利技术的一个实施例中，提供了一种蛋白质，该蛋白质含有Flt3配体和人IgG1抗体Fc片段。在本专利技术的一个优选例中，所述蛋白质还含有接头肽的氨基酸序列SEQ ID NO5。本文所用的术语“宿主细胞”意味着含有一表达载体并支持该表达载体复制或表达的细胞。宿主细胞可以是大肠杆菌等原核细胞，或酵母、昆虫、两栖类或CHO、HeLa等哺乳动物细胞等真核细胞，如培养的细胞、外植体和体内细胞。在本专利技术的一个优选例中，该宿主细胞是CHO。本文所用的术语“载体”是重组或合成产生的核酸构建体，具有一系列允许特定核酸在宿主细胞中转录的特定核酸元件。载体可以是质粒、病毒、或核酸片段的一部分。通常，载体包含与启动子可操纵性连接的待转录的核酸。当对细胞或DNA、蛋白质或载体使用术语“重组”时，指该细胞、DNA、蛋白质或载体已通过引入异源DNA或蛋白质，或改变天然DNA或蛋白质而被修饰，或该细胞衍生自如此修饰的细胞。因此例如，重组细胞表达了在细胞的天然(非重组)形式中未发现的基因，或表达低下或根本不表达天然基因。附图简述附图说明图1是pMG18的结构示意图。其中“hCMV pro”表示人巨细胞病毒启动子。具体实施例方式根据GenBank的资料(登录号T03858)，Flt3配体基因的天然编码序列为(SEQ ID NO1)acccaggact gctccttcca acacagcccc atctcctccg acttcgctgt caaaatccgt 60gagctgtctg actacctgct tcaagattac ccagtcaccg tggcctccaa cctgcaggac 120gaggagctct gcgggggcct ctggcggctg gtcctggcac agcgctggat ggagcggctc 180aagactgtcg ctgggtccaa gatgcaaggc ttgctggagc gcgtgaacac ggagatacac 240tttgtcacca aatgtgcctt tcagcccccc cccagctgtc ttcgcttcgt ccagaccaac 300atctcccgcc tcctgcagga gacctccgag cagctggtgg cgctgaagcc ctggatcact 360cgccagaact tctcccggtg cctggagctg cagtgtcagc ccgactcctc aaccctgcca 420cccccatgga gtccccggcc cctggaggcc acagccccga cagccccc 468其氨基酸序列为(SEQ ID NO2)Thr Gln Asp Cys Ser Phe Gln His Ser Pro Ile Ser Ser Asp Phe Ala1 5 10 15Val Lys Ile Arg Glu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro Val20 25 30Thr Val Ala Ser Asn Leu Gln Asp Glu Glu Leu Cys Gly Gly Leu Trp35 40 45Arg Leu Val Leu Ala Gln Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala50 55 60Gly Ser Lys Met Gln Gly Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu Ile His65 70 75 80Phe Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe85 90 95Val Gln Thr Asn I本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种重组Ｆｌｔ３配体基因序列，其特征在于，该Ｆｌｔ３配体基因具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王皓，高虹，
申请(专利权)人：上海中信国健药业有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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