人重组血管生成素的制备及皮肤增白产品制造技术

本发明专利技术提供了一种皮肤增白产品，它含有有效浓度的人血管生成素以抑制皮肤黑色素的产生。该有效浓度为总重量的０．０００００１％至０．１％。本发明专利技术的皮肤增白产品可用于抑制皮肤黑色素的产生，从而消除雀斑、黑斑、蝴蝶斑、老年斑、黑晕及其它由于黑色素沉着引起的皮肤异变；和／或用于消除皮肤皱纹，增加皮肤弹性，防止皮肤老化。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及化妆品领域。更具体地，本专利技术涉及一种含有人血管生成素以抑制皮肤黑色素的产生的皮肤增白产品。本专利技术还涉及人血管生成素的新的编码序列和重组表达。
技术介绍
人血管生成素(Angiogenin)是一个由123个氨基酸组成的蛋白质。血管生成素存在于正常人的血液中，其含量一般为250-360ng/ml。血管生成素的主要生理功能是在特定的条件下刺激血管的生成，维持体内血管的正常功能。由于体内的各种器官和组织的新陈代谢都需要血液循环来输送氧气和养料，排除废气和废料，所以血管生成素对维持体内各种组织和器官的正常生理功能有着重要的作用。除了刺激血管生成的主要作用外，血管生成素能抑制皮肤表面的促黑细胞(Melanocyte)分泌黑色素从而有皮肤增白的作用。同时，血管生成素能促使促黑细胞，成纤维细胞(Fibroblasts)，角化细胞(Keratinocytes)及表皮细胞(Epithelial Cells)分泌胶原蛋白(Collagen)和弹性蛋白(Elastin)从而有防止皮肤老化和增加皮肤弹性的作用。皮肤黑斑(Blotches and Freckles)，包括雀斑、蝴蝶斑、老年斑和黑晕的形成，普遍认为是由于黑色素的产生和沉着所致。而黑色素的产生是由于酪氨酸(Tyrosine)的氧化所致。酪氨酸的氧化由酪氨酸酶(Tyrosinase)的催化作用所引发。以前的实验已经证明抑制酪氨酸酶能达到抑制黑色素的产生而起到皮肤增白的作用。到目前为止，酪氨酸酶的抑制剂如Albutin，曲酸以及氢化酪蛋白(Hydrogenated Casein)都已证明有抑制酪氨酸酶的作用从而抑制黑色素的生成，它们已广泛应用于皮肤增白护肤品中。血管生成素除了存在于正常人的血液中，还存在于牛奶中。从牛奶中提取的牛血管生成素也有促使血管生成的活力，并且也有皮肤增白的作用(Snow Brand Milk Products Co.，Ltd美国专利号5698185)。有人认为，牛奶对皮肤的保护作用其有效成分主要是血管生成素。人血管生成素可以从人血浆中分离，也可以从人肿瘤细胞培养上清液中分离。牛血管生成素可以从牛奶中分离。人血管生成素还可以由基因工程的方法制备。基因工程方法制备的人血管生成素和人体内自然产生的血管生成素相比，理化性质和生物活力完全相同。血管生成素刺激血管新生的活力可以在受精鸡蛋的绒毛膜(chorioallantoic membrane)上进行。还有，血管生成素对血管内皮细胞和平滑肌细胞的作用包括刺激细胞的生长以及促使管状结构的形成都可以用来测定血管生成素的活力。日本雪花奶制品公司(Snow Brand Milk Products Co.，Ltd.)在1994年申请了专利技术名称为“增白化妆品的制备和使用方法(Whitening CosmeticPreparation and Method of Using Same)”美国专利(美国专利号5698185)。该专利报道了使用从牛奶中提取的牛血管生成素粗制品达到皮肤增白的作用。虽然，使用牛血管生成素从成本上考虑是经济的。但他们仅仅得到了牛血管生成素的粗制品，作了用此粗制品抑制人皮肤黑色素瘤(Melanoma)细胞分泌黑色素的实验并没有使用牛血管生成素的纯制品，也没有使用更具实际意义的人皮肤正常促黑细胞(Melanocytes)进行实验，更没有使用人血管生成素。在该专利中，牛血管生成素的粗制品的用量为总重量的0.001-20％。总之，到目前为止，出于种种技术和成本等诸方面的因素，尚没有含有人血管生成素的化妆品。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种含有人血管生成素的化妆品。本专利技术的另一目的是提供一种重组产生人血管生成素的方法以及相关的编码序列、载体和宿主细胞。在本专利技术的第一方面，提供了一种皮肤增白产品，它含有有效浓度的人血管生成素以抑制皮肤黑色素的产生。通常，人血管生成素的有效浓度为总重量的0.000001％至0.1％或更高；较佳地，人血管生成素的有效浓度为总重量的0.000001％至0.001％更佳地，人血管生成素的有效浓度为总重量的0.000001％至0.00001％。在另一优选例中，所述的皮肤增白产品还含有选自下组的物质紫外色吸收剂、紫外色散射剂、调色剂、调味剂、或其混合物。在一优选例中，所述的皮肤增白产品中的重组人血管生成素是重组产生的，且其N-末端是甲硫氨酸，序列如SEQ ID NO2所示。在本专利技术的第二方面，提供了一种编码人血管生成素的DNA分子，它含有SEQ ID NO1所示的核苷酸序列。在本专利技术的第三方面，提供了一种产生人血管生成素的方法，它包括步骤(a)在适合表达人血管生成素的条件下培养宿主细胞，从而表达出人血管生成素，其中所述的宿主细胞含有表达人血管生成素的载体，所述的载体含有SEQID NO1所示的编码人血管生成素的DNA序列，(b)分离纯化出步骤(a)中所表达的人血管生成素。附图说明图1显示了本专利技术所使用的编码血管生成素的核苷酸序列。其中，第一行为人工合成的编码人血管生成素的核苷酸序列(SEQ ID NO1)。此序列不是天然的，而是经过氨基酸序列反编码至细菌所喜爱的核苷酸序列，从而实现了高表达。第二行为人血管生成素的氨基酸序列(SEQ ID NO2)。第三行为天然的人血管生成素基因的核苷酸序列(SEQ ID NO3)。人工合成的和自然存在的人血管生成素的核苷酸序列(SEQ ID NO4)是不同的，但是它们所编码的氨基酸序列除了N-末端的第一个残基外全部相同。重组人血管生成素的N-末端多一个甲硫氨酸，功能和自然存在的人血管生成素完全一样。图2是本专利技术重组人血管生成素的凝胶电泳图。其中，人重组血管生成素粗制品和经过生化方法提纯的纯品(2微克)经SDS-聚丙烯酰氨凝胶分离，考马斯亮兰染色。本专利技术的人重组血管生成素由箭头表示，分子量为14KD，纯度达99.9％以上。图3显示本专利技术人血管生成素对抑制黑色素的生成的作用。具体实施例方式本专利技术人通过广泛而深入的研究，通过对人血管生成素编码序列的改造，实现了人血管生成素的高效表达以及高纯度、高活力人血管生成素的分离纯化，从而大幅降低了人血管生成素的生产成本。此外，本专利技术还意外地发现，人血管生成素对人皮肤黑色素的抑制效果远远优于牛血管生成素，至少为后者的100倍。在此基础上，完成了本专利技术。本专利技术的化妆品，即皮肤增白产品中的有效成分是人血管生成素，以抑制皮肤黑色素的产生。通常，在本专利技术的皮肤增白产品中，人血管生成素的有效浓度为总重量的0.000001％至0.1％或更高。当然，人血管生成素的浓度也可高于0.1％，因为这仍可达到抑制皮肤黑色素产生的效果。从生产成本考虑，优选的人血管生成素的有效浓度为总重量的0.000001％至0.001％，更佳地0.000001％至0.0001％，最佳地为0.000001％至0.00001％。用于本专利技术的人血管生成素可以是天然或重组形式的，优选重组形式的。如本文所用，“人血管生成素”不仅包括氨基酸序列与天然人血管生成素相同的血管生成素，也包括其具有相同活性的变异形式和衍生物。在本专利技术的一个实施例中，提供的重组人血管生成素是重组产生的，且其N-末端是甲硫氨酸。用于本专利技术的人血管生成素宜是纯化的，例如纯本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种皮肤增白产品，其特征在于，它含有有效浓度的人血管生成素以抑制皮肤黑色素的产生。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：胡国富，
申请(专利权)人：上海福缘生化药学研发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]