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新颖的HCV非结构多肽制造技术

技术编号:1724957 阅读:149 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了含有突变型非结构C型肝炎病毒的多肽,它可在诊断和/或免疫原性组合物中使用,其中,该突变是破坏了NS3的催化结构域的功能的N-末端突变。本发明专利技术还公开了编码这些多肽的多核苷酸、经这些多核苷酸转化的宿主细胞和使用这些多肽和多核苷酸的方法。(*该技术在2020年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及在抗HCV的免疫原性化合物中使用的突变型非结构C型肝炎病毒(“HCV”)多肽、制备和使用这些多肽的方法、以及含有这些多肽的免疫原性组合物。本专利技术还涉及含有(a)突变型非结构HCV多肽和(b)不是非结构HCV多肽的病毒多肽的组合物和使用这些组合物的方法。
技术介绍
现已认识到,HCV是遍及全世界的慢性肝炎和肝疾病的主要病因。据估计,世界上大约有4亿人感染了HCV,占世界人口的3%以上。C型肝炎病毒是一种小型有包膜的RNA黄病毒,它含有约10kb的正链RNA基因组。该基因组具有编码3010-3011个氨基酸的蛋白质的单一的未被中断的ORF。HCV的结构蛋白质包括一个高度免疫原性的核心蛋白质(C)和两个有可能在活体内形成杂二聚体的包膜蛋白质(E1和E2),以及非结构蛋白质NS2-NS5。已知该病毒的NS3区域对多蛋白在转译后被加工成单独的蛋白质是重要的,NS5区域则可编码一种RNA依赖性的RNA聚合酶。病毒特异性T淋巴细胞与中和抗体都是已建立的病毒感染中的抗病毒免疫防御的主要支柱。而CD8+细胞毒性T细胞则是消除病毒感染的细胞,CD4+T辅助细胞更是有效调节抗病毒免疫应答所必需的。CD4+T辅助细胞将特异性抗原识别为与自身HLA II类分子相结合的肽(病毒抗原或颗粒被专职的抗原呈递细胞所摄取,被加工成肽,并结合于溶酶体区室中的HLA II类分子上,然后被转移回到细胞的表面上)。几个观察结果支持了CD4+T细胞在消除HCV感染方面的重要作用。Tsai等人,1997 Hepatology,25449-458;Diepolder等人,1995 Lancet,3461-6-1009;Missale等人,1996 JCI,98706-714;Botarelli等人,1993;Gastro,104580-587;Diepolder等人,1997,J.Virol,716011。免疫原性肽的最小长度通常为8-11个氨基酸。但是,由于HLA II类分子的肽结合沟似乎在两端都是开放的,所以更长的肽也可承受。因而,从HLA II类分子上洗脱下来的肽一般长15-25个氨基酸。HLA II类分子具有高度多态性,各等位基因似乎有它自己单独的肽结合要求。因而,特定个体的HLA II类分子的所有组成部分都可确定哪些病毒肽可被呈递给T细胞。T细胞受体对该特异性HLA-肽复合物的识别伴随着适当的共刺激信号可引起T细胞激活、细胞因子分泌和T细胞增殖。大量的研究证明,HLA II类分子限制性CD4+的一系列应答,可通过使用重组病毒抗原或肽刺激外周血单核细胞而被测定。Botarelli等人,(1993)Gastroenterology,104580-587;Farrari等人,(1994)Hepatology,19286-295;Minutello等人,(1993)C.J.Exp.Med.,17817-25;Hoffmann等人,(1995)Hepatology,21632-638;Iwata等人,(1995)Hepatology,221057-1064;和Tsai等人,(1995)Hepatology,21908-912。已在慢性C型肝炎患者中检测到多克隆多特异性CD8+T细胞的应答。此外,CD8+CTL已显示出在解决黑猩猩急性HCV感染方面的重要作用(Cooper等人,Immunity 1999)。约50%的慢性C型肝炎患者表现出可检测的病毒特异性CD4+T细胞应答,这种应答最常见于针对HCV核心和/或NS4的情况中,并且它在进行α-干扰素治疗期间获得的持久性病毒清除力的患者中较为常见。根据淋巴因子的模式,CD4+T辅助细胞已被分成TH1、TH0或TH2。TH1型的细胞因子一般是IFN-γ、淋巴毒素和白介素-2(IL-2),据认为这些细胞因子可支持病毒特异性CD8+T细胞和自然杀伤细胞的激活过程。TH2型细胞因子IL-4、IL-5、IL-10和IL-13对B细胞的激活和分化具有重要性,从而诱导了体液免疫应答。在急性C型肝炎感染的过程中,对NS3以及可能对其它非结构蛋白质的强烈而持续的TH1/Th0应答与该疾病的自限进程相关。Diapolder等人,(1995)Lancet,3461006-1007的研究显示,所有的CD4+T细胞克隆都具有TH1或TH0细胞因子的特征,这表明这些克隆支持体内的细胞毒性免疫机制。大多数的CD4+T细胞克隆都对NS3的一条相对短的片段(即第1207-1278个氨基酸)应答,这表明NS3的这个区域对CD4+T细胞是免疫显性。超过70%的感染了HCV的患者发展了慢性感染和肝炎,它们当中有大部分发展成肝硬化,并最终发展成肝细胞癌。目前唯一认可的治疗是6到12个月的α-干扰素治疗,这种治疗仅可使20%的患者达到持续性改善。迄今为止还没有商业供应共疫苗。因而,仍需要能促进抗HCV应答的组合物和方法。专利技术概要本专利技术一方面涉及含有突变型C型肝炎(HCV)多肽的分离的多肽,该C型肝炎多肽至少含有NS3、NS4和NS5的一些部分。较佳的是,NS3由删除了N末端以除去催化结构域的核酸序列编码。该NS突变型多肽可包括NS3、NS4s、NS4b、NS5a、NS5b或它们的一些部分。例如,在各种实施例中,该突变型NS多肽含有NS3、NS4(NS4a和NS4b)和NS5(NS5a和NS5b)。在另外一些实施例中,该NS多肽由NS3和NS4(例如,NS4a和/或NS4b)或NS3和NS5(例如,NS5a和/或NS5b)组成。还可考虑使用非结构组分的全长或其片段的其它组合。在另一较佳方面,该类多肽还含有不属于非结构HCV多肽的病毒多肽。这种多肽较佳是C,或者是C中的抗原片段,更佳是HCV的截短的C。其它多肽较佳是E,或其抗原片段,更佳是HCV的E1或E2。这些多肽不需被天然的HCV基因组编码,它们包括如截短的或突变型HCV多肽或从其它基因组得到的多肽,如HBV的一些多肽。因而,本专利技术包括含有在NS3的催化结构域中发生突变的多肽的分离的突变型非结构(“NS”)HCV多肽,该突变从功能上破坏了该催化结构域。该突变可以是如删除或取代突变。在某些实施例中,该突变型NS多肽含有NS3、NS4和NS5。在另外一些实施例中,在此所述的各种突变型NS多肽还含有不属于HCV的NS3、NS4或NS5的次级病毒多肽,例如,HCV核心多肽(“C”)或其片段,或者HCV包膜蛋白质(“E”),例如E1和/或E2。在某些实施例中,C还被截短(如在第121个氨基酸)。本专利技术另一方面涉及含有本文所述的任何突变型肝炎C(“HCV”)多肽的组合物,该多肽如至少含有NS3、NS4和NS5的一部分的多肽。较佳的是,NS3由N末端被删除以破坏该催化结构域的功能(例如,将此结构域除去)的核酸序列编码。在另一较佳实施例中,该类多肽还含有不是非结构HCV多肽的病毒多肽。这些多肽较佳是C或其抗原片段,更佳是HCV的截短的C。其它多肽较佳是E或其抗原片段,更佳是HCV的E1或E2。这些多肽不需被天然的HCV基因组编码,它们包括如截短的或突变型HCV多肽或从其它基因组得到的多肽,如HBV的多肽。另一方面,本专利技术包括含有(a)本文所述的任何一种多肽和(b)药学可接受的赋形剂(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的突变型非结构(“NS”)HCV多肽,它含有在NS3的催化结构域发生突变的多肽,其特征在于,所述突变破坏了该催化结构域的功能。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员:D科伊特A梅迪纳塞尔比M塞尔比M霍顿
申请(专利权)人:希龙公司
类型:发明
国别省市:US[美国]

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