本发明专利技术属生物技术领域，涉及一种内质网靶向性的多肽表达盒。本发明专利技术含内质网靶向序列ＥＲＩＳＳ真核表达载体，将内质网靶向序列ＥＲＩＳＳ克隆于ｐＥＣ载体中，构建新型基因疫苗，所述载体可将抗原表位靶向定位于细胞内质网、增强免疫效果，本发明专利技术ＥＲＩＳＳ序列的插入不影响ｐＥＣ中抗原表位的有效表达。克隆于本发明专利技术载体中的各类短肽在基因免疫中能诱生相应的特异性免疫应答，可用于以表位为基础的新型基因疫苗的制备。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属生物
，涉及一种内质网靶向性的多肽表达盒。具体涉及一种可将表达产物特异性靶向细胞内质网的真核多肽表达盒及其构建方法和在基因疫苗研制中的应用。本专利技术通过下述方案和步骤实现1.构建及鉴定内质网靶向性的多肽表达盒pEC-ERISS按基因克隆常规方法合成ERISS编码基因的正意(ERISS upper)和反意链(ERISS lower)，序列为，ERISS upperAAT TGA GGT ACA TGATTT TAG GCT TGC TCG CCC TTG CGG CAG TCT GCA GCG CTG，ERISS lowerAAT TCA GCG CTG CAG ACT GCC GCA AGG GCG AGC AAG CCT AAA ATC ATGTAC CTC，用体外退火方法于BgI II酶切位点处ERISS编码基因克隆于pEC骨架中，获得pEC-ERISS，经PCR及DNA序列测定表明克隆正确。本专利技术是一种含内质网靶向序列ERISS真核表达载体，可将目的基因产物靶向入细胞内质网。所述载体除含有常规真核转录元件如HCMV IE1启动子、增强子复合体、内含子A及BGH基因，以及pEC中的特定序列GCCACCATGGAATTCTAATA外，在ATG下游含有AAT TGA GGTACA TGA TTT TAG GCT TGC TCG CCC TTG CGG CAG TCT GCA GCG CTG序列。本专利技术经实验证实，所述ERISS序列的插入不影响pEC中抗原表位的有效表达。本专利技术将HbcAg中一CTL抗原表位克隆于ERISS下游，构建了含抗原表位的pEC-ERISS-C18，转染C2C12肌细胞，DOT-EIA检测转染上清，结果只有pEC-C18与pEC-ERISS-C18质粒转染上清膜斑点呈阳性显色，表明ERISS序列的插入不影响表位C18-27的有效表达。本专利技术质粒可克隆和有效表达如乙肝病毒CTL表位等生物短肽，ERISS序列的插入不影响短肽的有效表达。克隆于上述载体中的各类短肽如CTL表位，在基因免疫中可诱生相应的特异性免疫应答，可用于以表位为基础的新型基因疫苗的制备。实施例2以经pEC-C18和pEC-ERISS-C18转染24小时并灭活的瘤细胞EL4或p815为刺激细胞，以免疫后并经肽特异刺激的脾细胞为反应细胞，进行特异性增殖试验。结果表明pEC-ERISS-C18组增殖指数在C57BL/6和BALB/c小鼠中均高于pEC-C18组，证实pEC-ERISS-C18转染瘤细胞膜表面有更多的C18-27多肽被递呈，表明ERISS增强以C18-27抗原表位为基础的基因免疫诱生CTL应答的机制与其增强了抗原递呈有关。权利要求1.一种内质网靶向性多肽表达盒，其特征是含内质网靶向序列ERISS真核表达载体，2.按权利要求1所述的内质网靶向性多肽表达盒，其特征是所述的表达盒是将内质网靶向序列ERISS克隆于pEC。3.按权利要求1和2所述的内质网靶向性多肽表达盒，其特征是所述的正意链序列为AAT TGA GGT ACA TGA TTT TAG GCT TGC TCG CCCTTG CGG CAG TCT GCA GCG CTG，反意链序列为AAT TCA GCG CTGCAG ACT GCC GCA AGG GCG AGC AAG CCT AAA ATC ATG TAC CTC。4.按权利要求1所述的内质网靶向性多肽表达盒，其特征是所述的质粒除含有常规真核转录元件如HCMV IE1启动子、增强子复合体、内含子A及BGH基因，以及pEC中的特定序列GCCACCATGGAATTCTAATA外，在ATG下游含有AAT TGA GGT ACA TGA TTT TAG GCT TGC TCG CCCTTG CGG CAG TCT GCA GCG CTG序列。5.按权利要求1所述的内质网靶向性多肽表达盒，其特征是所述的表达盒可用于以表位为基础的新型基因疫苗的制备。全文摘要本专利技术属生物
，涉及一种内质网靶向性的多肽表达盒。本专利技术含内质网靶向序列ERISS真核表达载体，将内质网靶向序列ERISS克隆于pEC载体中，构建新型基因疫苗，所述载体可将抗原表位靶向定位于细胞内质网、增强免疫效果，本专利技术ERISS序列的插入不影响pEC中抗原表位的有效表达。克隆于本专利技术载体中的各类短肽在基因免疫中能诱生相应的特异性免疫应答，可用于以表位为基础的新型基因疫苗的制备。文档编号C12N15/11GK1428427SQ0213672公开日2003年7月9日 申请日期2002年8月29日 优先权日2002年8月29日专利技术者熊思东, 徐薇, 储以薇, 王缨 申请人:复旦大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种内质网靶向性多肽表达盒，其特征是含内质网靶向序列ＥＲＩＳＳ真核表达载体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：熊思东，徐薇，储以薇，王缨，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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