一种制备受精卵染色体的方法技术

技术编号:1724856 阅读:179 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
一种制备受精卵染色体的方法,其特征是给小鼠腹腔注射孕马血清、绒毛膜促性腺激素,处死小鼠,分离出输卵管,用培养液冲出受精卵,培养到雌雄原核消失为止,用胰酶消化,用枸橼酸钠溶液低渗,用固定液固定,用吉姆萨染色。本发明专利技术制备的受精卵染色体可用于分析有毒的化学物质对子代的伤害,用法简便,价格低,制备时可在一个受精卵细胞内清晰地展示出形态上完全不同、便于分析的精子和卵子的染色体,中期分裂相高达80%。(*该技术在2022年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种染色体,特别是涉及。有害的化学物质例如铅、汞、二氧化硫等对子代的影响越来越受到大家的重视。目前,有一种制备外周血淋巴细胞染色体的方法,用此方法制备的染色体,可用于分析化学物质对人体的伤害,却不能分析出化学物质对子代的影响。本专利技术的目的是提供,用它制备出的受精卵染色体能弥补现有技术的上述不足。,其特征是给性周期为动情期的雌性或雄性小鼠腹腔注射孕马血清,再腹腔注射绒毛膜促性腺激素,然后处死小鼠,分离出输卵管,用含有小牛血清的F10培养液冲出受精卵,立即放入培养箱内,培养到雌雄原核消失为止,用胰酶消化,放入枸橼酸钠溶液中低渗,用固定液I固定,将卵挑到载玻片上,并滴加1滴固定液II,再将载玻片放在固定液II中继续固定,然后再将载玻片移到固定液III固定,取出载玻片用温湿空气吹干,载玻片直接用吉姆萨染色。本专利技术制备的受精卵染色体可用于分析有毒的化学物质对子代的伤害,用法简便,价格低,制备时可在一个受精卵细胞内清晰地展示出形态上完全不同、便于分析的精子和卵子的染色体,中期分裂相高达80%。下面通过实施例说明本专利技术。制备受精卵染色体时,先给性周期为动情期的雌性小鼠腹腔注射5国际单位的孕马血清以诱发超数排卵,48小时后腹腔注射5国际单位绒毛膜促性腺激素(HCG),在注射HCG后27-28小时处死小鼠,分离出输卵管,用含有30%小牛血清的F10培养液(其中含有秋水仙胺,浓度为0.05μg/ml)冲出受精卵,立即放入空气内含5%CO2的培养箱内,37℃下培养到雌雄原核消失为止(通常约2-3小时),用1%胰酶0.5毫升在37℃消化5-8分钟,放入含40%小牛血清的1%枸橼酸钠溶液中低渗45分钟,用固定液I(甲醇∶冰醋酸∶水(体积比)=5∶1∶4)固定5分钟,将卵(8个)挑到载玻片上,随即在其上滴加1滴固定液II(甲醇∶冰醋酸(体积比)=3∶1)再将载玻片放在固定液II中继续固定5分钟,然后再将载玻片移到固定液III中(甲醇∶冰醋酸∶水(体积比)=3∶3∶1)中固定1分钟,取出载玻片用温湿空气吹干,载玻片直接用10%吉姆萨(Giemsa)染色18分钟,即得本专利技术的受精卵染色体。用制得的受精卵染色体通过研究化学物质对小鼠生殖细胞的危害,用以观察对后代的影响,其方法简便、经济,在毒理、药理、电离辐射、遗传、优生等方面均具有广泛的实际应用价值。本专利技术中给雄性或雌性小鼠腹腔注射孕马血清和绒毛膜促性腺激素的用量均为4.5-5.5国际单位,所述的培养液中含有秋水仙胺,其浓度为0.045-0.055μg/ml,所述的培养温度为36.5-37℃;消化的温度为30-37℃。权利要求1.,其特征是给性周期为动情期的雌性或雄性小鼠腹腔注射孕马血清,腹腔注射绒毛膜促性腺激素,处死小鼠,分离出输卵管,用含有小牛血清的F10培养液冲出受精卵,立即放入培养箱内,培养到雌雄原核消失为止,用胰酶消化,放入枸橼酸钠溶液中低渗,用固定液I固定,将卵挑到载玻片上,随即在其上滴加1滴固定液II,再将载玻片放在固定液II中继续固定,然后再将载玻片移到固定液III固定,取出载玻片用温湿空气吹干,载玻片直接用吉姆萨染色。2.如权利要求1所述的方法,其特征是所述的给雄性或雌性小鼠腹腔注射孕马血清和绒毛膜促性腺激素的用量均为4.5-5.5国际单位。3.如权利要求1所述的方法,其特征是所述的培养液中含有秋水仙胺,浓度为0.045-0.055μg/ml。4.如权利要求1所述的方法,其特征是所述的培养温度为36.5-37℃;消化的温度为30-37℃。全文摘要,其特征是给小鼠腹腔注射孕马血清、绒毛膜促性腺激素,处死小鼠,分离出输卵管,用培养液冲出受精卵,培养到雌雄原核消失为止,用胰酶消化,用枸橼酸钠溶液低渗,用固定液固定,用吉姆萨染色。本专利技术制备的受精卵染色体可用于分析有毒的化学物质对子代的伤害,用法简便,价格低,制备时可在一个受精卵细胞内清晰地展示出形态上完全不同、便于分析的精子和卵子的染色体,中期分裂相高达80%。文档编号C12N5/071GK1428419SQ0211004公开日2003年7月9日 申请日期2002年3月1日 优先权日2002年3月1日专利技术者高敏, 邵华, 李新鸾 申请人:中国石油化工股份有限公司, 中国石油化工股份有限公司青岛安全工程研究院本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备受精卵染色体的方法,其特征是给性周期为动情期的雌性或雄性小鼠腹腔注射孕马血清,腹腔注射绒毛膜促性腺激素,处死小鼠,分离出输卵管,用含有小牛血清的F10培养液冲出受精卵,立即放入培养箱内,培养到雌雄原核消失为止,用胰酶消化,放入枸橼酸钠溶液中低渗,用固定液Ⅰ固定,将卵挑到载玻片上,随即在其上滴加1滴固定液Ⅱ,再将载玻片放在固定液Ⅱ中继续固定,然后再将载玻片移到固定液Ⅲ固定,取出载玻片用温湿空气吹干,载玻片直接用吉姆萨染色。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:高敏邵华李新鸾
申请(专利权)人:中国石油化工股份有限公司中国石油化工股份有限公司青岛安全工程研究院
类型:发明
国别省市:11[中国|北京]

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