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超氧化物歧化酶大规模生产新工艺制造技术

技术编号:1724849 阅读:172 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术提供了一种大规模生产超氧化物歧化酶的新工艺。采用冻结的动物血液凝块,磨浆融冻使红血球破裂溶血,在铜盐保护下加热除去变性血红蛋白,粗提液经膜分离除盐和小分子杂蛋白。二次加热除去大部分杂蛋白,冻干,得SOD。比活≥4,000u/mgpro.。(*该技术在2021年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】
超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)是一种能够催化超氧阴离子自由基歧化反应的金属酶SOD作为生物体内重要的自由基清除剂,在清除体内多余的超氧阴离子、解除超氧阴离子对生物体的毒害过程中起着关键性的作用。国外已有多种药用SOD应用于临床,主要集中在抗炎、抗辐射、抗肿瘤、抗衰老及自身免疫性疾病等由超氧阴离子自由基引发的疾病。目前国内SOD的应用主要集中在食品和化妆品等方面。现行的生产方法是以动物血为原料提取SOD,主要工艺为新鲜血液加入抗凝剂,离心弃去血浆收集红血球,并将其洗净,然后加蒸馏水溶血,再用氯仿和乙醇使血红蛋白变性并将其除去。清液用丙酮沉淀,沉淀物上色谱柱(Sephadex G-100或DE-32或金属螯和层析等方法)纯化。其缺点在于①血液抗凝处理需要增加抗凝剂的成本,而且给血液收集带来诸多不便;②需要大型离心机分离洗净红血球,费时费力,而且设备费用较高;③用氯仿和乙醇除去血红蛋白有机溶剂的成本过高,而且氯仿对人体有害;④由于柱体积的限制,色谱纯化处理量很小,不适合大规模生产。本专利技术的新颖性在于血液无须做抗凝处理,也不用离心洗涤红血球,而是直接使用经冻结的凝血块,用磨浆机粉碎中产生的热使冻血块解冻,在此冻-融过程中,红血球破裂,发生溶血,放出血红蛋白;不用氯仿和乙醇除去血红蛋白,而是在铜盐保护下用加热方法使血红蛋白变性除掉;使用膜分离技术除盐和杂蛋白,从而可以大批量生产超氧化物歧化酶。实施例取猪或牛新鲜血液凝块500kg,在冷库里存放8h以上,使其冻结。然后打碎成小块,用分离式磨浆机于2800转/分粉碎成血红蛋白混合液。泵入1.5吨反应釜,加自来水500L,170~200转/分搅拌30min。然后夹层水浴加热,使物料温度达到65℃。恒温5min后,在继续搅拌下加入1.0mol/L氯化铜溶液15~25L,此时须连续取样,注意观察物料颜色的变化,直到物料颜色变成灰色,暗红色已完全消失,即停止加氯化铜溶液。继续搅拌10min,静置20min,放料。物料转入三足式离心机,用200目滤布离心过滤,弃滤渣收集淡兰色滤液即粗提液,约500L。粗提液再经孔径为20μm的滤器过滤,滤液上蛋白质分子浓缩纯化器,做膜分离处理,使滤液体积浓缩至100L左右。浓缩的滤液转入锥形的沉淀分离器,加入等量预冷(-18℃)丙酮,搅拌均匀后,静置4h。打开截止阀,放出沉淀,沉淀用少量丙酮洗涤1~2次。将沉淀转入200L夹层锅,加入2.5mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.8)50~100L,搅拌均匀后加热至65℃,维持10min,底部出现沉淀。3000转/分离心10min,收集上清液,向上清液内加入等体积预冷丙酮,静置过夜。离心或抽滤收集沉淀,在离心下,沉淀用少量丙酮洗涤3次脱水,再用乙醚洗涤3次脱脂,挥发除去有机溶剂,得微带蓝色的SOD干粉。SOD干粉用蒸馏水溶解(0.1~0.3g/ml),加冻干保护剂和赋形剂进行冷冻干燥,得SOD冻干粉。比活为≥4,000u/mg pro.(微量邻苯三酚法)。权利要求1.一种大规模生产超氧化物歧化酶(SOD)的新方法。SOD是一种能够催化超氧阴离子自由基歧化反应的金属酶,用于医药和保健品。其特征是使用冻结的动物血液的凝血块,经冻-融和磨浆溶血,在铜盐保护下加热除去变性血红蛋白,粗提液经膜分离除盐和杂蛋白,得目的物。2.按照权利要求1所述的方法,铜盐为氯化铜或硫酸铜。3.按照权利要求1所述的方法,除去血红蛋白的第一次加热和除去杂蛋白的第二次加热,温度在60℃~75℃之间,最好是60℃~65℃。时间不超过15min。4.按照权利要求1的方法,膜分离的截留分子量为10,000d。5.按照权利要求1的方法,SOD的脱水使用丙酮或无水乙醇,脱脂使用乙醚或氯仿。全文摘要本专利技术提供了一种大规模生产超氧化物歧化酶的新工艺。采用冻结的动物血液凝块,磨浆融冻使红血球破裂溶血,在铜盐保护下加热除去变性血红蛋白,粗提液经膜分离除盐和小分子杂蛋白。二次加热除去大部分杂蛋白,冻干,得SOD。比活≥4,000u/mg pro.。文档编号C07K1/14GK1428422SQ0114492公开日2003年7月9日 申请日期2001年12月24日 优先权日2001年12月24日专利技术者徐文中, 阎家麒 申请人:徐文中, 阎家麒本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大规模生产超氧化物歧化酶(SOD)的新方法。SOD是一种能够催化超氧阴离子自由基歧化反应的金属酶,用于医药和保健品。其特征是使用冻结的动物血液的凝血块,经冻-融和磨浆溶血,在铜盐保护下加热除去变性血红蛋白,粗提液经膜分离除盐和杂蛋白,得目的物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:徐文中阎家麒
申请(专利权)人:徐文中阎家麒
类型:发明
国别省市:44[中国|广东]

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