表达多角体和几丁质酶融合蛋白的重组棉铃虫单核衣壳核多角体病毒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种表达多角体和几丁质酶融合蛋白的重组棉铃虫单核衣壳核多角体病毒及其制备方法：利用ＰＣＲ技术扩增ＨａＳＮＰＶ多角体基因和几丁质酶基因，克隆至载体ｐＵＣ１９构建融合基因；将融合基因插入真核载体ｐＨａＷＨＬ５，获得真核转移载体ｐＨａＷＤ６。该转移载体与野生型病毒ＤＮＡ共转染昆虫细胞，通过同源重组将融合基因插入病毒基因组，并缺失ｅｇｔ基因。构建出重组病毒ＨａＳＮＰＶ－ＷＤ６。融合表达的几丁质酶被包埋于多角体中。该重组病毒可在昆虫食入病毒多角体后第一时间发挥作用。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及微生物领域，具体涉及一种能够防治棉铃虫和烟青虫的基因重组棉铃虫单核衣壳核多角体病毒；本专利技术还涉及该重组棉铃虫单核衣壳核多角体病毒株的制备方法。本专利技术是按下述方案实现的利用PCR技术扩增病毒的多角体基因和几丁质酶基因(已申请专利，专利号01106469.2)克隆至通用载体pUC19，构建融合基因；将融合基因插入含有egt基因上下游序列标记基因LacZ的真核转移载体pHaWHL5，构建真核转移载体pHaWD6。将pHaWD6与野生型病毒DNA共转染昆虫细胞，通过同源重组用融合的多角体和几丁质酶基因置换基因组中的egt基因，构建出缺失egt基因并表达多角体几丁质酶融合蛋白的新型重组病毒Helicoverpa armigera single nucleocapsid nucleopolyhedrovirus WD6CCTCC-V200115。多角体与几丁质酶融合基因的核苷酸序列如下，核酸序列中起始密码子(ATG)和终止密码子(TAA)以黑体标明。两基因在BamH I位点处融合，并以下划线标明。ATGTATACTCGTTACAGTTACAGCCCTACTTTGGGCAAAACCTATGTGTACGACAACAAATACTTTAAGAATTTAGGTGCTGTTATTAAAATGCCAACGCAAGAGCATTTAGAGGAGCACGAACATGAAGAACGCAACTTGGATTCGCTCGACAAATACTTGGTGGCGGAAGATCCTTTTTTGGGACCTGGCAAAAATCAAAAACTAACTTTGTTTAAAGAGATTCGCAGCGTTAAGCCCGACACAATGAAGCTTGTAGTTAACTGGAGCGGTCGCGAATTTCTTCGCGAAACTTGGACGCGTTTCATGGAAGACAGTTTTCCCATTGTAAACGACCAAGAAATTATGGACGTGTTTCTGTCTGTTAATATGCGACCAACCAAACCGAACCGTTGTTACCGATTCTTAGCGCAACACGCTCTGCGTTGTGATCCCGACTATATTCCTCACGAAGTCATTCGTATTGTAGAACCTTCCTATGTAGGCAGTAACAACGAGTACAGAATTAGTTTAGCCAAAAAATACGGCGGTTGTCCCGTTATGAACTTGCACGCTGAATACACTAATTCCTTTGAAGATTTCATTACCAACGTAATTTGGGAGAACTTTTACAAACCAATTGTTTACGTAGGCACTGATTCTGCCGAAGAAGAGGAAATACTCCTAGAAGTTTCTTTGATATTTAAGATCAAAGAATTTGCACCTGACGCTCCGCTATACACTGGTCCTGCATATGGATCCGCTCCACCCGGCGTTCCCACATTAGACTGGGCCGATCACAGTTACGCTTTAGTGCAAATAAATCATCAAGCCACCGCTTACGAATCATTAGTAAACTCTCAACCGTTTGTAACTATCAAAGTATCATGGAGCGTATGGTCGGGCGAACAAGGCGAAATCGCTCAAGTGTATCTAGAAAATAAACTAGACTGCAAAGTAATCAACGTTTGGACTGGTCCGACGCAAGATCGTTTTGCTACTTTTGATTACAATACGAGCGGTCGTTATTCGATGTATGTAAAACTGTGCAATGCCGACGGCTGTTCGGCTAGTCAAACCGTAGAAGTCGTGATCGCAGACACCGATGGTAAACATTTAAAACCGTTACAATACACGTGGCAAGAAAACAATAAACCGTATACGTACAACACTGATCACACCGTAGCGGCCTATTTTGTCGAATGGGGCGTTTACGGTCGATCTTTTCCCGTGGACAAAGTGCCCACGCCGAACCTTTCGCACATTTTATACGGATTTATACCGATTTGCGGCGGTGACGGTATAAACGACAGTTTAAAATCTATCACGGGGAGTTTTGAAGCGTTGCAAAGATCGTGCGCTGGCAGGGACAATTTTAAAGTTTCCATACACGATCCGTGGGCGGCGCTCCAAAAACCACAAACAGGCGTTAGCGCATGGAACGAACCCTACAAAGGCAATTTTGGTCAATTAATGGCAGCAAAATTGGCCAATCCCAATCTAAAAGTGTTGGCATCAATCGGCGGTTGGACACTGTCCGATCCCTTCTATCATATGCACGATGCGCGAACGCGACAAATTTTTGTCGAATCCGTGCGTGAATTTGTGTTGACATGGAAATTTTTCGACGGCATCGATATTGATTGGGAATTTCCGGGCGGCAAAGGCGCCAATCCAAACGTTGGCGATGTGGAACGCGACAATAACACGTATATCGCTTTATTGGGCGAATTGCGCGCCATGCTCGATCAAGTTCAAATACAAACGAATCGTACTTTAGAACTCACCACAGCGATTAGCGCTGGCATAGACAAGATCGCCGCGGTTAATTACGACCGAGCACAACAGTATTTAGATAAAATTTTCGTGATGAGTTATGATTTCAAAGGAGCTTGGTCTAATACCGATCTCGGTCATCAGACGGCACTGTACGGTTCCGCGTGGAAACCTAACGAACCGTACACCGCCAACGTGGCCGTGGACGCTTTGCTCGCGCAACGAGTGAATCCAAAAAAACTCGTGTTGGGCGTAGCAATGTACGGCCGCGGTTGGACGGGCGTCCACAACTACAACAGTGACAATCCATTCAGTGGCGTAGCCGTCGGACCGATCACGGGTACATGGGAAAACGGCGTGGTCGACTACAGACAGATTGCTAAAAACATTTCGCGTTACGAATACGCATTCGACGACGTGGCCAAGGCTGCGTACGTATTCGACCGCGCCTCTGGCGACTTAATATCGTATGACAGCGAAAGATCGGTACTGGCCAAAGGCGAATACGTGCTTCAGCGTAGACTCGGCGGATTATTCGCATGGGAAATCGATGCGGACAACGGCGATTTGCTCAACGCTATGCATATTGGCTTGATGAAAACAGGTACAAACAGTAGATTGATTCATAACGAATTGTAA该融合基因编码的氨基酸序列如下，氨基酸序列中G和S为两基因融合处BamH I位点编码的氨基酸。几丁质酶催化活性区(FDGIDIDWE)以下划线标明。MYTRYSYSPTLGKTYVYDNKYFKNLGAVIKMPTQEHLEEHEHEERNLDSLDKYLVAEDPFLGPGKNQKLTLFK本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种表达多角体和几丁质酶融合蛋白的重组棉铃虫单核衣壳核多角体病毒，Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ ＷＤ６，ＣＣＴＣＣ Ｎｏ．Ｖ２００１１５，在缺失蜕皮激素尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因位点处，插入由病毒多角体蛋白基因启动子启动的多角体和几丁质酶融合基因，以及由热休克蛋白基因启动子控制的标记基因β－半乳糖苷酶基因。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴东，陈新文，胡志红，
申请(专利权)人：中国科学院武汉病毒研究所，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]