ST13基因5＇端启动功能区序列及应用制造技术

本发明专利技术涉及一种ＤＮＡ序列，该序列位于ＳＴ１３基因５’端启动功能区。本发明专利技术提供的ＤＮＡ序列内含有二个增强转录功能区，一个抑制转录功能区和一个基本转录功能区，具有调控与其相接的基因的转录的功能。可构件表达载体，用于基因功能研究与基因工程开发。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种DNA序列，更具体地，本专利技术涉及的序列包含有调控与其相接的基因的转录的功能。可构件表达载体，用于基因功能研究与开发。
技术介绍
ST13(又名SNC6、HSU17714)是专利技术人对正常人肠粘膜组织和肠癌组织进行减式杂交时克隆到的一个人类基因。ST13的全长cDNA已得到并进行了序列分析，且登录于GenBank(登录号U17714)。该3145bp长的cDNA编码一个由369个氨基酸残基组成的孕激素受体相关分子伴侣，可以与Hsp70相互作用。专利技术人已将此基因定位于人染色体22q13。GenBank收录的一个编号为Z98048的PAC克隆序列覆盖了整个ST13基因。据此，专利技术人分析了ST13的基因组结构，发现ST13共有12个外显子，编码区跨度为32017bp(在Z98048序列中nt71529至nt39512)，作了进一步的研究，推进了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种DNA序列，具有调控与其相接的基因的转录的功能，可构件各种哺乳动物的表达载体，用于基因功能的研究与基因工程的开发。本专利技术提供的DNA序列，位于ST13基因5’端启动功能区，该功能区位于1-1814片段，具有SEQ ID NO1所示的核苷酸序列。本专利技术提供的DNA序列内含有二个增强转录功能区，分别位于1-471片段、1262-1478片段，含有一个抑制转录功能区，位于471-1262片段，还含有一个基本转录功能区，位于1478-1814片段。本专利技术提供的DNA序列的部分或全部，或基于该DNA序列的部分或全部而改造的序列可构建表达载体。本专利技术提供的DNA序列内含的二个增强转录功能区的部分或全部序列，或者基于其改造的部分或全部序列可构建表达载体。本专利技术提供的DNA序列内含的一个抑制转录功能区的部分或全部序列，或者基于其改造的部分或全部序列可构建表达载体。本专利技术提供的DNA序列该DNA序列内含的一个基本转录功能区的部分或全部序列，或者基于其改造的部分或全部序列可构建表达载体。由本专利技术所提供的DNA序列及内含的各功能区的DNA序列，以及基于这些序列而改造的部分或全部序列所构建的表达载体，在基因治疗和基因工程生产的药物中的应用。附图说明图1为ST13的基因组结构顺序。图2为启动功能区DNA序列内增强转录功能区、抑制转录功能区及基本转录功能区。图3为用ST135’端区域片段构建的荧光素酶报告载体。图4为ST13基因5’端不同片段转染后荧光素酶活性分析。具体实施例方式通过以下实施例对本专利技术的技术特征作详细描述。实施例一大肠癌相关基因ST13(SNC6)的基因组结构分析及其5′端区域的克隆一、材料大肠杆菌XL1-Blue，美国Stratagene公司产品。常规保存于含四环素LB平板。所有培养基，限制酶和其它工具酶均购自美国Life Technologies公司。二、ST13(SNC6)的基因组结构分析及其5′端区域的克隆应用美国国立卫生图书馆基因库(NCBI)的Blast程序(http//www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST)，在人类染色体22q13(编号Z98048)的PAC克隆上(408N23)找到ST13(SNC6)的全长cDNA的同源序列。通过对ST13(SNC6)的基因组结构顺序的分析，根据ST13(SNC6)的全长cDNA的序列设计其5′端区域PCR引物如下5’-GGT ACC TTT AGT CAG GCT GGGGAG-3’(上游)，5’-CCT CGA GGT AGG GAG GTG GTG GGC GA-3’(下游)。提取正常人外周血淋巴细胞的基因组DNA作为PCR反应模板，进行扩增。将PCR产物(1894 bp)克隆到pGEM-T-Easy载体(Promega，USA)上，经限制性内切酶KpnI，XhoI，EcoRI，MluI和SacI酶切产生不同大小的片段(见下文)。所有片段均亚克隆至荧光素酶报告载体pGL2-Basic，pGL2-Promoter andpGL2-Enhancer(Promega，USA)上。见SEQ ID NO 1核酸序列。三、结果依据PAC克隆408N23(GenBank数据库编号Z98048)对ST13(SNC6)的全长cDNA进行序列分析，发现ST13(SNC6)共有12个外显子，在Z98048序列中覆盖了32017bp(nt71529至nt39512)。参见表1和图1。表1.ST13基因中外显子和内含子的分布长度(bp) 在Z98048中的位置exon184 71529-71345intron 555071344-65795exon58 65794-65737intron 245365736-63284exon76 63283-63208intron 338463207-59824exon71 59823-59753intron 414659752-55607exon67 55606-55540intron 473855539-50802exon85 50801-50717intron 131 50716-50585exon111 50584-50474intron 288850473-47586exon103 47585-47483intron 161147482-45871exon117 45870-45754intron 116445753-44589exon49 44588-44540intron 239644539-42144exon134 42143-42010intron429 42009-41581exon 207241580-39513用PCR法扩增5′端1894bp长度的DNA片段(1至1894)，经KpnI，XhoI，EcoRI，MluI和SacI酶切产生一系列片段。这些不同大小的片段亚克隆到pGL2荧光素酶报告载体上，并可在进一步分析中用于转染。参见图2、图3(其中1，7，13φX174/HaeIII分子量标记；2pGL2-Basic载体；3pGL2-Basic-1894/KpnI+XhoI酶切；4pGL2-Basic-1423/KpnI+XhoI酶切；5pGL2-Basic-632/MluI+XhoI酶切；6pGL2-Basic-416/SacI+XhoI酶切；8pGL2-Enhancer载体；9pGL2-Enhancer-1894/KpnI+XhoI酶切；10pGL2-Enhancer-1423/KpnI+XhoI酶切；11pGL2-Enhancer-632/MluI+XhoI酶切；12pGL2-Enhancer-416/SacI+XhoI酶切；14pGL2-Promoter载体；15pGL2-Promoter-1894/KpnI+XhoI酶切；16pGL2-Promoter-1423/KpnI+XhoI酶切；17pGL2-Promoter-632/MluI+XhoI酶切；18pGL2-Promoter-416/SacI+XhoI酶切)。实施例二ST13基因5’端启动功能区序列及应用研究一.材料ST13基因5’区域片段亚克隆至荧光素酶报告载体pGL2-Basic，pGL2-Promote本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ＤＮＡ序列，位于ＳＴ１３基因５’端启动功能区，其特征是该功能区位于１－１８１４片段，具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１的核苷酸序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：曹江，郑树，陈功星，叶景佳，耿礼义，方永明，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属第二医院，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]