【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种表达传染性法氏囊病毒ＶＰ２基因编码蛋白永生化细胞制备方法，其特征在于它的步骤如下： １）自传染性法氏囊病毒抽提病毒ＲＮＡ，长距离一步法ＲＴ－ＰＣＲ扩增病毒全长ｃＤＮＡ，并以此为模板ＰＣＲ扩增ＶＰ２基因片段与哺乳动物细胞真核表达ｐＣＩ－ｎｅｏ构建表达质粒ｐＣＩ－ｎｅｏ－ＶＰ２，经４２℃热击转化ＣａＣｌ↓［２］法制备的大肠杆菌Ｔｏｐ１０感受态细胞； ２）用Ｌｕｒｉａ－Ｂｅｒｔａｎｉ Ｍｅｄｉｕｍ作为基础培养基，各培养１－３ｍｌ浓度为１－１．５ＯＤ↓［６００］值的含目的基因重组质粒的菌液，通过超纯质粒纯化试剂盒制备无内毒素的超纯质粒； ３）用含１０－１５％小牛血清的Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ作为基础培养基，各重组质粒经Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ稀释后在Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００介导下转染９０－９５％融合的生长活力旺盛的单层Ｖｅｒｏ细胞； ４）在含５００μｇ／ｍｌ浓度Ｇ４１８的Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ培养基中，通过极限稀释法获得单克隆化细胞； ５）单克隆化细胞经ＰＣＲ、ＲＴ－ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周继勇，叶菊秀，陈庆新，郑肖娟，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[]
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