一种P2Y12受体血小板凝集检测试剂卡及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种P2Y12受体血小板凝集检测试剂卡及其制备方法。所述P2Y12受体血小板凝集检测试剂卡由四个检测通道组成，一通道中含有由BSA和纤维蛋白原包被的冻干试剂，无激活剂，二通道中含有由BSA和纤维蛋白原包被的冻干试剂，含血小板最大激活剂iso‑TRAP(凝血酶受体激活肽)，三通道中不含冻干试剂，四通道中含有由BSA和纤维蛋白原包被的冻干试剂，含血小板P2Y12受体激活剂ADP(二磷酸腺苷)和P2Y1受体拮抗剂PGE1(前列腺素E1)。通过本发明专利技术的检测试剂卡可利用光学比浊法这一方法学快速有效地检测患者的与P2Y12受体途径相关的血小板凝集功能，此卡灵敏度高、特异性强、操作简便、适用于床旁快速检测，可更好地预测接受P2Y12受体拮抗剂治疗的患者未来发生血栓或出血的风险。

【技术实现步骤摘要】
一种P2Y12受体血小板凝集检测试剂卡及其制备方法
本专利技术属于医用材料
，涉及一种P2Y12受体血小板凝集检测试剂卡制备方法及其应用。
技术介绍
血小板在维持正常止血中起着关键的作用。当暴露于受损的血管时，血小板将粘附在暴露的内皮下基质上，随后，在损伤的部位释放或产生的各种因子(如凝血酶、ADP、或胶原等)激活血小板。血小板激活后，血小板上的糖蛋白GPIIb/IIIa受体发生构象改变，使得其与多价纤维蛋白原结合，导致邻近的血小板补充到损伤部位并聚集形成止血塞或血栓。体外血小板聚集依赖于血小板受到聚集诱导剂(凝血酶、二磷酸腺苷(ADP))作用而激活，使其与包被在微球上的纤维蛋白原结合而产生聚集。其中，ADP作为诱导剂可与血小板上受体之一即P2Y12受体结合，从而通过P2Y12受体途径激活血小板活性，使得血小板上的糖蛋白IIb/IIIa受体与纤维蛋白原结合而产生聚集。血小板的聚集程度与活化的血小板上的GPIIb/IIIa受体数量成正比。当全血样本中的血小板被诱发聚集后，全血样本的透光率增加，通过检测血小板聚集前后光学信号的变化来完成此项检测。但由于个体血小板功能活性存在差异性，这可能导致患者术前或术后出现不同程度的血栓、出血等风险。因此，临床上检测患者的与P2Y12受体途径相关的血小板凝集功能是非常必要的，同时采用光学比浊法的方法学也成为此项研究的关键技术。目前，国内临床上与P2Y12受体途径相关的血小板凝集功能的检测主要采用以下几种方法：LTA法，血栓弹力图法，闭合时间法，电阻抗法等，但这些方法测定耗时过长、操作复杂繁琐、无法实现快速便捷的检测。国外，Accumetrics,Inc.公司上市一种P2Y12受体相关血小板凝集功能检测试剂盒(比浊法)产品，此产品是临床上普遍认为质量较好的产品，具有特异性强、操作简便、快速检测等特点，且国内并无类似产品。本专利技术者们致力于探寻一种能够快速有效地检测患者与P2Y12受体途径相关的血小板凝集功能的检测试剂卡及其检测方法，其检测原理及方法学与Accumetrics,Inc.公司生产的P2Y12受体相关血小板凝集功能检测试剂盒(比浊法)产品相同。本公司研发的P2Y12受体血小板凝集检测试剂卡(比浊法)需与本公司生产的全自动血小板聚集仪配合使用检测与P2Y12受体途径相关的血小板凝集功能，不仅样本用量少，简便快速，而且适合于即时检测，不受时间、地点限制，24h全方位为患者服务，是今后床旁快速检测发展的方向。目前，国内并未出现关于采用光学比浊法快速检测患者的血小板凝集功能的报道，因此，在本领域期望开发一种能够快速有效地检测患者血小板凝集功能的检测试剂卡，从而为临床医生和患者提供预测接受P2Y12受体拮抗剂治疗的患者未来发生血栓或出血的风险的有效辅助资料。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种P2Y12受体血小板凝集检测试剂卡制备方法及其应用。为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：一方面，本专利技术提供一种P2Y12受体血小板凝集检测试剂卡，所述检测试剂卡包括如图1所示由四个检测通道组成，一通道中含有由BSA和纤维蛋白原包被的冻干试剂，无激活剂，二通道中含有由BSA和纤维蛋白原包被的冻干试剂，含血小板最大激活剂iso-TRAP(凝血酶受体激活肽)，三通道中不含冻干试剂，四通道中含有由BSA和纤维蛋白原包被的冻干试剂，含血小板P2Y12受体激活剂ADP(二磷酸腺苷)和P2Y1受体拮抗剂PGE1(前列腺素E1)。本专利技术所述的检测试剂卡利用光学比浊法快速有效地检测患者与P2Y12受体途径相关的血小板凝集功能，实现对全血样品中血小板凝集功能进行有效评估，比传统的比浊法和一般的血小板聚集功能检测方法更快速有效。优选地，所述冻干试剂包含聚苯乙烯或聚苯二乙烯微球。优选地，所述微球粒径为4-6μm，例如4μm、4.3μm、4.6μm、4.9μm、5.2μm、5.5μm、5.7μm或6μm。优选地，所述微球功能官能基团为羧基基团，GPIIb/IIIa受体配体的氨基基团与微球羧基基团通过酰胺键牢固结合，均匀分布在微球表面。优选地，所述冻干试剂中包含近红外染料，当含有血小板的血液样品和所述冻干试剂接触时形成测定混合物，用近红外光谱中的光照射所述测定混合物，并评估近红外线在所述测定混合物中的透光率来评估由血小板介导的凝集。在本专利技术中，微球在反应过程中起载体作用，通常过量添加，而GPIIb/IIIa受体配体用量则是根据微球的粒径和用量来进行适当选择。优选地，所述GPIIb/IIIa受体配体可选自兔纤维蛋白原、牛纤维蛋白原或人纤维蛋白原任意一种或组合使用。在本专利技术中，所述试剂卡二通道含血小板最大激活剂iso-TRAP的最终浓度为2-25μM，例如2μM、4μM、6μM、8μM、10μM、12μM、14μM、16μM、18μM、20μM、22μM、24μM或25μM；优选地，当待测血液样品加入到试剂卡中，所述血小板最大激活剂iso-TRAP的最终浓度为6-16μM。在本专利技术中，所述试剂卡四通道含P2Y12受体激活剂ADP的最终浓度为5-40μM，例如5μM、8μM、10μM、13μM、15μM、18μM、20μM、23μM、25μM、28μM、30μM、33μM、35μM、38μM或40μM，以及所述P2Y1受体拮抗剂PGE1的最终浓度为5-40nM，例如5nM、8nM、10nM、13nM、15nM、18nM、20nM、23nM、25nM、28nM、30nM、33nM、35nM、38nM或40nM；优选地，当待测血液样品加入到试剂卡中后，所述P2Y12受体激活剂ADP的最终浓度为15-25μM；优选地，当待测血液样品加入到试剂卡中后，所述P2Y1受体拮抗剂PGE1的最终浓度为15-25nM。优选地，所述试剂卡的检测血液样品为全血样品。本专利技术提供一种冻干试剂的冻干保护剂溶液，所述冻干保护剂溶液的成分如下：在本专利技术中，所述冻干保护剂溶液中海藻糖的含量为50-160g/L，例如50g/L、60g/L、70g/L、80g/L、90g/L、100g/L、110g/L、120g/L、130g/L、140g/L、150g/L或160g/L。在本专利技术中，所述冻干保护剂溶液中乳糖的含量为50-120g/L，例如50g/L、55g/L、60g/L、65g/L、70g/L、75g/L、80g/L、90g/L、100g/L、110g/L或120g/L。在本专利技术中，所述冻干保护剂溶液中吐温20的含量为0.45-0.8mL/L，例如0.45mL/L、0.5mL/L、0.55mL/L、0.6mL/L、0.65mL/L、0.7mL/L、0.75mL/L或0.8mL/L。在本专利技术中，所述冻干保护剂溶液中牛血清白蛋白的含量为30-70g/L，例如30g/L、35g/L、40g/L、45g/L、50g/L、55g/L、60g/L、65g/L或70g/L。在本专利技术中，所述冻干保护剂溶液中叠氮钠的含量为12-35mL/L，例如12mL/L、15mL/L、17mL/L、20mL/L、22mL/L、25mL/L、27mL/L、30mL/L、32mL/L或35mL/L。在本专利技术中将如上所述成分溶解在纯化水中得到所述冻干保护剂溶液。优选本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种P2Y12受体血小板凝集检测试剂卡，其特征在于：该检测试剂卡由四个检测通道组成，一通道中含有由BSA和纤维蛋白原包被的冻干试剂，无激活剂，二通道中含有由BSA和纤维蛋白原包被的冻干试剂，含血小板最大激活剂iso‑TRAP(凝血酶受体激活肽)，三通道中不含冻干试剂，四通道中含有由BSA和纤维蛋白原包被的冻干试剂，含血小板P2Y12受体激活剂ADP(二磷酸腺苷)和P2Y1受体拮抗剂PGE1(前列腺素E1)。

【技术特征摘要】
1.一种P2Y12受体血小板凝集检测试剂卡，其特征在于：该检测试剂卡由四个检测通道组成，一通道中含有由BSA和纤维蛋白原包被的冻干试剂，无激活剂，二通道中含有由BSA和纤维蛋白原包被的冻干试剂，含血小板最大激活剂iso-TRAP(凝血酶受体激活肽)，三通道中不含冻干试剂，四通道中含有由BSA和纤维蛋白原包被的冻干试剂，含血小板P2Y12受体激活剂ADP(二磷酸腺苷)和P2Y1受体拮抗剂PGE1(前列腺素E1)。2.根据权利要求1所述的P2Y12受体血小板凝集检测试剂卡的制备方法，其特征在于：所述冻干试剂包含聚苯乙烯或聚苯二乙微球。3.根据权利要求2所述的微球，其特征在于，所述微球粒径为4-6μm。4.根据权利要求2或3所述的微球，其特征在于，所述微球功能基团为羧基基团，GPIIb/IIIa受体配体的氨基基团与微球羧基基团通过酰胺键牢固结合，均匀分布在微球表面。5.根据权利要求1或2所述的冻干试剂，其特征在于，所述冻干试剂中包含近红外染料，当含有血小板的血液样品和所述冻干试剂接触时形成测定混合物，用近红外光谱中的光照射所述测定混合物，并评估近红外线在所述测定混合物中的透光率来评估由血小板介导的凝集。6.根据权利要求4所述的GPIIb/IIIa受体配体，其特征在于：所述GPIIb/IIIa受体配体可选自兔纤维蛋白原、牛纤维蛋白原或人纤维蛋白原任意一种或组合使用。7.根据权利要求1所述试剂卡，其特征在于：所述试剂卡二通道含血小板最大激活剂iso-TRAP的最终浓度为2-25μM；优选地...

【专利技术属性】
技术研发人员：郎天丹，李阳，魏明明，邱笑违，董飒英，
申请(专利权)人：北京乐普医疗科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：北京,11