一种测定法罗培南钠中高分子聚合物的方法技术

本发明专利技术公开了一种凝胶色谱法测定法罗培南钠原料中高分子聚合物的检测方法，它包括如下步骤：高效液相色谱仪的色谱柱为聚苯乙烯凝胶为填料的色谱柱，流动相为0.1mol/L pH=6.8‑7.2缓冲溶液‑甲醇，检测器为紫外检测器，检测波长220‑224nm，流速为0.4‑0.6ml/min。吸取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液各20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图。计算对照品溶液浓度的值为X与相应峰面积值为Y，进行线性拟合，得出线性回归方程，本发明专利技术应用聚苯乙烯凝胶色谱法测定法罗培南钠原料药中法罗培南钠高分子聚合物的含量，分离效率高、抗干扰能力强，分析速度快、检测灵敏度高，能够更好控制法罗培南钠原料药的质量。

【技术实现步骤摘要】
一种测定法罗培南钠中高分子聚合物的方法
本专利技术涉及分析
，具体涉及一种测定法罗培南钠中高分子聚合物的检测方法。
技术介绍
法罗培南钠是由日本Suntory公司开发，于1997年上市的一种青霉烯类抗生素，具有抗菌谱广、抗菌活性强。对β-内酰胺酶稳定，对超广谱β-内酰胺酶产生菌、枸橼酸杆菌、肠球菌有良好作用的特点，由于在合成反应以及样品储存过程当中法罗培南钠容易产生高分子的聚合物，根据研究表明此类聚合物是青霉素过敏症状的主要原因，因此国内外对β-内酰胺类抗生素的高分子杂质的控制非常重视，为此通过合理的手段检测并控制此类高分子聚合物具有重要的现实意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是建立一种测定法罗培南钠中高分子聚合物的检测方法，可以更好的控制法罗培南钠原料药中罗培南钠中高分子聚合物的含量，能够更好控制法罗培南钠原料药的质量。本专利技术的技术方案是，采用凝胶色谱法测定法罗培南原料药中法罗培南钠高分子聚合物，它包括如下步骤：对照品溶液的制备取法罗培南钠对照品适量，精密称定，用0.1mol/LpH=7.0缓冲液制成每1ml含法罗培南钠0.01mg的溶液；供试品溶液的制备取样约品10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加0.1mol/LpH=7.0缓冲液稀释至刻度摇匀；空白溶液的制备：0.1mol/LpH=7.0缓冲液；色谱柱为：聚苯乙烯凝胶TSKgelG2000SWxl色谱柱；色谱条件为：柱温40℃，检测器：紫外检测器检测波长222nm；流速：0.5ml/min。流动相：0.1mol/LpH=7.0；缓冲溶液：甲醇=95:5；进样：取对照溶液、供试品溶液、空白溶液各20μl，分别进样记录色谱图；计算标准品溶液浓度的值与相应峰面积值的线性回归方程，相关系数而应不小于0.99；精密吸取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，供试品溶液色谱图中，法罗培南钠聚合物的含量不得超过0.15%，法罗培南钠聚合物与相邻色谱峰之间分离度应大于1.5。附图说明：图1为不同流动相系统下法罗培南钠与聚合物分离的色谱图。以下通过实施例形式再对本专利技术的内容做进一步详细说明，但不应就此理解为本专利技术上述主题范围内仅限于以下实施例。在不脱离本专利技术上述技术前提下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的相应替换或变更的修改，均包括在本专利技术内。实施例1色谱柱的选择仪器与试剂仪器：Waters2998检测器、Waters2695溶液输送泵试剂：水、磷酸二氢钾、磷酸色谱条件色谱柱：G-1010.0mm×300mm葡聚糖凝胶色谱柱检测波长：222nm，流速：1.2ml/min，柱温：35℃，流动相：pH7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲液，进样量：20μl流动相：0.1mol/LpH=7.0缓冲溶液供试溶液的制备：取法罗培南钠适量，用pH=7.0缓冲溶液稀释成1mg/ml的溶液，在25℃放置48小时进样。结论：使用该填料的分离的色谱峰拖尾严重，法罗培南钠与聚合物无法分离。实施例2色谱柱的选择仪器与试剂仪器：Waters2998检测器、Waters2695溶液输送泵试剂：水、磷酸二氢钾、磷酸色谱条件色谱柱：G-1014.0mm×400mm葡聚糖凝胶色谱柱检测波长：222nm，流速：1.2ml/min，柱温：35℃，流动相：pH7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲液，进样量：20μl流动相：0.1mol/LpH=7.0缓冲溶液；供试溶液的制备：取法罗培南钠适量，用pH=7.0缓冲溶液稀释成1mg/ml的溶液，在25℃放置48小时进样。结论：使用该填料的分离的色谱峰拖尾严重，法罗培南钠与聚合物分离度为1.2，无法满足实验要求。实施例3色谱柱的选择仪器与试剂仪器：Waters2998检测器、Waters2695溶液输送泵试剂：水、磷酸二氢钾、磷酸色谱条件色谱柱：G2000SWxl（300mm）聚苯乙烯凝胶色谱柱检测波长：222nm，流速：1.2ml/min，柱温：35℃，流动相：pH7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲液，进样量：20μl流动相：0.1mol/LpH=7.0缓冲溶液；供试溶液的制备：取法罗培南钠适量，用pH=7.0缓冲溶液稀释成1mg/ml的溶液，在25℃放置48小时进样。结论：使用该填料的色谱柱，法罗培南钠峰形对称。实施例4色谱条件的选择与优化仪器与试剂仪器：Waters2998检测器、Waters2695溶液输送泵试剂：水、磷酸二氢钾、磷酸、乙酸铵色谱条件色谱柱：G2000SWxl（300mm）聚苯乙烯凝胶色谱柱检测波长：222nm，流速：0.5ml/min，柱温：35℃，流动相：pH7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲液，进样量：20μl流动相：0.1mol/LpH=7.0缓冲溶液：甲醇=95:5；供试溶液的制备：取法罗培南钠适量，用pH=7.0缓冲溶液稀释成1mg/ml的溶液，在25℃放置48小时进样。分别用表1中的四种流动相进行分析，色谱图如图1所示，用法罗培南钠主成分与其检出高分子聚合物分离度及总分析时间为考察指标。表1用于优化色谱分离的不同流动相组成编号流动相组成分离度分析时间（min）a0.1mol/LpH=7.0缓冲溶液-甲醇（95：5）1.7430b0.1mol/LpH=7.0缓冲溶液-甲醇（90：10）1.5630c0.1mol/LpH=7.0缓冲溶液-甲醇-乙腈（90：5：5）1.6830d0.1mol/LpH=7.0缓冲溶液-乙腈（95：5）1.6830e0.1mol/LpH=7.0缓冲溶液-乙腈（90：10）1.4430结论：发现上述五种色谱系统中，0.1mol/LpH=7.0缓冲溶液-甲醇（95：5），作为流动相时，各项指标最优。实施例5流速的影响仪器与试剂仪器：Waters2998检测器、Waters2695溶液输送泵试剂：水、磷酸二氢钾、磷酸、乙酸铵色谱条件色谱柱：G2000SWxl（300mm）聚苯乙烯凝胶色谱柱检测波长：220nm，柱温：40℃，流动相：pH7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲液，进样量：20μl流动相：0.1mol/LpH=7.0缓冲溶液：甲醇=95:5；供试溶液的制备：取法罗培南钠适量，用pH=7.0缓冲溶液稀释成1mg/ml的溶液，在25℃放置48小时进样。流速分别为：0.5ml/min、1ml/min结论：结果显示流速为1.0ml/min时，高分子聚合物与主成分法罗培南钠峰不能有效分离，当流速降为0.5ml/min时，各峰的分离度良好。实施例6柱温的影响仪器与试剂仪器：Waters2998检测器、Waters2695溶液输送泵试剂：水、磷酸二氢钾、磷酸、乙酸铵色谱条件色谱柱：G2000SWxl（300mm）聚苯乙烯凝胶色谱柱检测波长：220nm，流速：0.5ml/min，流动相：pH7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲液，进样量：20μl流动相：0.1mol/LpH=7.0缓冲溶液：甲醇=95:5；供试溶液的制备：取法罗培南钠适量，用pH=7.0缓冲溶液稀释成1mg/ml的溶液，在25℃放置48小时进样。柱温分别为：25℃、35℃、50℃结果见表2。表2不同柱温对高分子聚合物分离度的影响柱温聚合物的保留时间主峰保留时间主峰拖尾因子分离度25℃21.9824.821.352.0335℃21.682本文档来自技高网...

【技术保护点】
聚苯乙烯凝胶色谱法测定法罗培南钠原料中法罗培南钠高分子聚合物的检测方法，其特征在于它包括如下步骤：对照品溶液的制备：取法罗培南钠对照品适量，精密称定，用0.1mol/LpH=7.0缓冲液制成每1ml含法罗培南钠0.01mg的溶液；供试品溶液的制备：取样约品10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加0.1mol/LpH=7.0缓冲液稀释至刻度摇匀；空白溶液的制备：0.1mol/LpH=7.0缓冲液；色谱柱为：聚苯乙烯凝胶TSKgel G2000SWxl（7.8×300mm 5um）色谱柱；色谱条件：柱温为35‑45℃，检测器：紫外检测器；检测波长220~224nm；流速：0.4‑0.6ml/min；流动相：0.1mol/L pH=6.8‑7.2；缓冲溶液：甲醇=97‑93:3‑7；在上述色谱条件下，精密吸取对照溶液20μl、供试品溶液20μl、空白溶剂20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，计算标准品溶液浓度的值与相应峰面积值的线性回归方程，相关系数而应不小于0.99;精密吸取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，供试品溶液色谱图中，法罗培南钠聚合物的含量不得超过0.15%，法罗培南钠聚合物与相邻色谱峰之间分离度应大于1.5。...

【技术特征摘要】
1.聚苯乙烯凝胶色谱法测定法罗培南钠原料中法罗培南钠高分子聚合物的检测方法，其特征在于它包括如下步骤：对照品溶液的制备：取法罗培南钠对照品适量，精密称定，用0.1mol/LpH=7.0缓冲液制成每1ml含法罗培南钠0.01mg的溶液；供试品溶液的制备：取样约品10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加0.1mol/LpH=7.0缓冲液稀释至刻度摇匀；空白溶液的制备：0.1mol/LpH=7.0缓冲液；色谱柱为：聚苯乙烯凝胶TSKgelG2000SWxl（7.8×300mm5um）色谱柱；色谱条件：柱温为35-45℃，检测器：紫外检测器；检测波长220~224nm；流速：0.4-0.6ml/min；流动相：0.1mol/LpH=6.8-7.2；缓冲溶液：甲醇=97-93:3-7；在上述色谱条件下，精密吸取对照溶液20μl、供试品溶液20μl、空白溶剂20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，计算标准品溶液浓度的值与相应峰面积值的线性回归方程，相关系数而应不小于0.99;精密吸取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，供试品溶液色谱图中，法罗培南钠聚合物的含量不得超过0.15%，法罗培南钠聚合物与相邻色谱峰之间分离度应大于1.5。2.权利要求1所述的测定法罗培南钠原料中法罗培南钠高分子聚合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：对照品溶液的制备：取法罗培南钠对照品适量，精密称定，用0.1mol/LpH=7.0缓冲液制成每1ml含法罗培南钠0.01mg的溶液；供试品溶液的制备：取样约品10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加0.1mol/LpH=7.0缓冲液稀释至刻度摇匀；空白溶液的制备：0.1mol/LpH=7.0缓冲液；色谱柱为：聚苯乙烯凝胶TSKgelG2000SWxl（7.8×300mm5um）色谱柱；色谱条件：柱温为35℃，检测器：紫外检测器；检测波长220nm；流速：0.4ml/min；流动相：0.1mol/LpH=6.8；缓冲溶液：甲醇=97:3；在上述色谱条件下，精密吸取对照溶液20μl、供试品溶液20μl、空白溶剂20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，计算标准品溶液浓度的值与相应峰面积值的线性回归方程，相关系数而应不小于0.99；精密吸取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，供试品溶液色谱图中，法罗培南钠聚合物的含量不得超过0.15%，法罗培南钠聚合物与相邻色谱峰之间...

【专利技术属性】
技术研发人员：王崇益，王沛沛，邵娟，石欢，席雨棠，
申请(专利权)人：江苏正大清江制药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32