一种评估肝素类药物疗效及残留情况的检测方法技术

技术编号:17004466 阅读:33 留言:0更新日期:2018-01-11 01:53
本发明专利技术涉及血液检测领域,尤其涉及一种评估肝素类药物疗效及残留情况的检测方法。肝素类药物主要包括肝素、低分子肝素及一些类肝素药物。该检测方法主要包括将肝素酶和冻干保护剂及粘附剂混合后通过缓冲液将其配制成适当比例的混合试剂,将混合试剂包被于试剂杯中经冷冻、抽真空处理形成肝素酶杯。具备操作简便、保质期长、稳定性好等诸多优点。将肝素酶杯和普通杯(空白样品杯)置于血栓弹力图中,向杯中分别加入抗凝剂螯合剂,然后将内源激活的全血样本加入试剂杯中启动血栓弹力图仪开始检测。将检测的肝素酶杯与普通杯中血凝块开始的时间R值进行比较,便可判断血液中是否有肝素存在。若有肝素存在,则肝素酶杯中血凝块开始的时间R值将小于普通杯中血凝块开始的时间R值。该方法操作简便、检测结果重复性好、准确性高。

【技术实现步骤摘要】
一种评估肝素类药物疗效及残留情况的检测方法
本专利技术涉及血液检测
,尤其涉及一种用于血栓弹力图评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法。
技术介绍
肝素酶是指一类能够特异性裂解肝素和类肝素主链糖苷键的多糖裂解酶,最初是从肝素黄杆菌中发现并分离出来的,其后,又陆续在一些微生物和动物组织中发现存在肝素酶。目前已分离纯化出的肝素酶有三种,分别为肝素酶I、II、III,这三种酶的酶学特性各不相同。其中肝素酶I的应用十分广泛,如:清除血液中残存肝素、防止凝血、生产低分子肝素、研究肝素的结构等。1948年德国人Harter专利技术了血栓弹力图,80年代开始广泛用于临床指导术中输血,现已成为当今监测凝血功能的最重要指标。血栓弹力图仪能够输出血凝时间R、血凝速率Angel及血块强度MA等凝血参数以及纤溶整个过程。将肝素酶与血栓弹力图联合应用便可以检测患者术前及术中血液中肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况。肝素酶I可以降解血液中的肝素,排除肝素干扰检测患者本身的凝血状态。通过与空白对照对比凝血状态便可以评估其肝素效果。但是肝素酶I本身是一种特别容易失活的酶,在没有保护剂的情况下,肝素酶溶液在4℃短期保存即损失大部分活性,而经过一次冷冻融化或一次冻干,则更加大大降低其活性。目前国内的肝素酶制品存在质量参差不齐,有效期短,稳定性差等问题。在临床检测中会出现因肝素酶失活或不稳定从而误判患者血液中肝素的抗凝效果,导致患者临床手术风险增加。因此,针对以上不足,本专利技术提供了一种检测评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法。专利技术内容(一)要解决的技术问题本专利技术的目的是提供一种检测评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法以解决现有的检测中存在的稳定性差、有效期短、检测准确性差的问题。(二)技术方案为了解决上述技术问题,本专利技术提供了一种评估肝素类药物疗效及残留情况的检测方法,其包括以下步骤:1.一种评估肝素类药物疗效及残留情况的检测方法,其特征在于:其包括以下步骤:S1、制备肝素酶溶液;S2、制备保护剂溶液;S3、将步骤2中得到的保护剂溶液和步骤1中得到的肝素酶I溶液混合;S4、将混合试剂冻干和粘附在样品杯的杯底并放置杯盖形成肝素酶杯。S5、全血样本激活S6、将肝素酶杯和普通杯(空白样品杯)置于血栓弹力图仪中,向杯中分别加入抗凝剂螯合剂,然后将激活全血样本加入试剂杯中启动血栓弹力图仪开始检测,以获得两个样品杯中血凝块开始的时间。2.根据权利要求1所述的评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法,其特征在于:步骤S1中所述的酶溶液,以三羟甲基氨基甲烷、磷酸缓冲液、乙酸缓冲液的一种或多种作为溶剂,所述混合试剂的pH值为7.0~9.0,更有选pH=7.0。3.根据权利要求1所述的评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法,其特征在于:步骤S2中,所述保护剂溶液主要包括海藻糖、甘露醇、蔗糖、乳糖、聚乙二醇、醋酸钠、硫酸铵、氯化钠、氯化钙、牛血清白蛋白、人血清白蛋白中的一种或几种,混合溶剂中保护剂质量比为1~15%。更优选海藻糖2%~10%、甘露醇2%~6%、蔗糖1%3%、乳糖1%-3%、聚乙二醇1%-3%、醋酸钠0.1-2%、硫酸铵0.1-2%、氯化钠0.2-1%、氯化钙0.05-1.5%、牛血清白蛋白0.1-5%、人血清白蛋白0.1-5%。以叠氮钠、硫酸庆大霉素、硫柳汞中的之一或其混合作为防腐剂,比例为0.003%~0.1%。4.根据权利要求3所述的评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法,其特征在于:以三羟甲基氨基甲烷-盐酸、磷酸缓冲液、乙酸缓冲液的一种或多种作为保护剂的溶剂。5.根据权利要求3所述的评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法,其特征在于:所述保护剂溶液与酶溶液体积比为300~100:1,更优选150~100:1。6.根据权利要求1所述的评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法,其特征在于:步骤S4中样品杯内衬表面为纹理结构,其中所述平均表面粗糙度Ra为之间(大约)5至(约)100纳米,更优选之间(大约)5至(约)80纳米。7.根据权利要求1所述的评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法,其特征在于:步骤S4中将混合试剂用加样枪分装至样品杯中,并于冻干机中进行抽真空,冷冻干燥;设定冻干机条件为真空度为1-15Pa,温度为-40℃至30℃,结束后加盖试剂杯盖。8.根据权利要求1所述的评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法,其特征在于:步骤S5中全血样本为枸橼酸抗凝全血;枸橼酸钠抗凝全血样本激活方式为取1ml到试剂1瓶中,上下颠倒试剂瓶5次使之充分混匀,静置4分钟激活血液,其中试剂1主要包含高岭土、硅藻土、鞣花酸的一种或几种,比例为0.01%~0.1%。9.根据权利要求1所述的评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法,其特征在于:步骤S6杯中加入的抗凝剂螯合剂为钙离子,主要包括氯化钙或醋酸钙,摩尔浓度为100mM~500Mm,更优选200mM。10.根据权利要求9所述的评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法,其特征在于,向样品杯中加入步骤S5的全血样本340ul,通过血栓弹力图仪做凝血状态检测。(三)有益效果本专利技术的上述技术方案具有如下优点:本专利技术提供的评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法中,将肝素酶溶液和保护剂溶液混合配制形成混合试剂,然后将制得的试剂放入样品杯中,对样品杯进行冷冻干燥处理,样品杯在2-8度存储;临床检测过程中,直接拿出底部固定化肝素酶的样品杯,即可通过血栓弹力图仪对全血样本进行测试,可方便地获取液肝素化后凝血状态,该方法操作简便,不需要称量、计算、多次加样等繁琐操作步骤,检测结果不受外界操作干扰,保护剂既能有效保护肝素酶活性,2-8度存储有效期达25个月,又提供肝素酶粘附于样品杯底部,提高样品杯内试剂的稳定性,进而可提高检测结果的稳定性与准确性。附图说明图1是本专利技术实施例评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法中样品杯结构剖视图及正面直观图。图中,1:样品杯;2:杯盖3:肝素酶。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本专利技术,但不用来限制本专利技术的范围。如图所示,一种评估肝素类药物疗效及残留情况的检测方法,包括如下步骤:S1、配制肝素酶溶液和保护剂溶液,并按体积比为1:100~300,更有选1:100~150。其中,在步骤S1中的肝素酶溶液的酶活性为12,000U/ml,保护剂溶液中主要包含海藻糖、甘露醇、蔗糖、乳糖、聚乙二醇、醋酸钠、硫酸铵、氯化钠、氯化钙中的一种或几种,混合溶剂中保护剂质量比为1~15%。以叠氮钠、硫酸庆大霉素、硫柳汞中的之一或其混合作为防腐剂,比例为0.003%~0.1%。实施过程:首先配制10-100mM缓冲液,用HCL、醋酸或NaOH调整PH7.0~9.0;按照制定比例配制肝素酶溶液(12,000U/ml);配制保护剂溶液,依次加入盐类物质、固相试剂、蛋白保护本文档来自技高网...
一种评估肝素类药物疗效及残留情况的检测方法

【技术保护点】
一种评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法,其特征在于:其包括以下步骤:S1、制备肝素酶I溶液;S2、制备保护剂溶液;S3、将步骤S2中得到的保护剂溶液和步骤S1中得到的肝素酶I溶液混合;S4、将混合试剂冻干和粘附在样品杯的杯底并放置杯盖形成肝素酶杯。S5、全血样本激活S6、将肝素酶杯和普通杯(空白样品杯)置于血栓弹力图仪中,向杯中分别加入抗凝剂螯合剂,然后将激活全血样本分别加入样品杯中启动血栓弹力图仪开始检测,以获得两个样品杯中血凝块开始的时间。

【技术特征摘要】
1.一种评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法,其特征在于:其包括以下步骤:S1、制备肝素酶I溶液;S2、制备保护剂溶液;S3、将步骤S2中得到的保护剂溶液和步骤S1中得到的肝素酶I溶液混合;S4、将混合试剂冻干和粘附在样品杯的杯底并放置杯盖形成肝素酶杯。S5、全血样本激活S6、将肝素酶杯和普通杯(空白样品杯)置于血栓弹力图仪中,向杯中分别加入抗凝剂螯合剂,然后将激活全血样本分别加入样品杯中启动血栓弹力图仪开始检测,以获得两个样品杯中血凝块开始的时间。2.根据权利要求1所述的评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法,其特征在于:步骤S1中所述的酶溶液,以三羟甲基氨基甲烷、磷酸缓冲液、乙酸缓冲液的一种或多种作为溶剂,所述混合试剂的pH值为7.0~9.0。3.根据权利要求1所述的评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法,其特征在于:步骤S2中,所述保护剂溶液主要包括海藻糖、甘露醇、蔗糖、乳糖、聚乙二醇、醋酸钠、硫酸铵、氯化钠、氯化钙、牛血清白蛋白、人血清白蛋白中的一种或几种,混合溶剂中保护剂质量比为1~15%。4.根据权利要求3所述的评估肝素、低分子肝素以及类肝素药物疗效及残留情况的检测方法,其特征在于:以三羟甲基氨基甲烷、磷酸缓冲液、乙酸缓冲液的一种或多种作为保护剂的溶剂;以叠氮钠、硫酸庆...

【专利技术属性】
技术研发人员:李阳魏明明邱笑违董飒英
申请(专利权)人:北京乐普医疗科技有限责任公司
类型:发明
国别省市:北京,11

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