源头阻断包虫病病原细粒棘球绦虫传播的疫苗制造技术

技术编号:16880839 阅读:162 留言:0更新日期:2017-12-26 22:38
本发明专利技术公开了一种源头阻断包虫病病原细粒棘球绦虫传播的疫苗。本发明专利技术所提供的疫苗为CTB‑EgM123疫苗或由其与EgM123蛋白重组耻垢分枝杆菌疫苗亚单位疫苗组成的成套疫苗。所述CTB‑EgM123疫苗的活性成分为由霍乱毒素B亚单位和细粒棘球绦虫EgM123蛋白融合而成的融合蛋白;所述EgM123蛋白重组耻垢分枝杆菌疫苗的活性成分为能够表达细粒棘球绦虫EgM123蛋白的重组耻垢分枝杆菌。本发明专利技术所提供的疫苗能够刺激宿主体内免疫应答,提高宿主的免疫水平,增强肠道黏膜免疫反应,在抗包虫病感染中起到重要的保护作用。

A vaccine that blocks the transmission of Echinococcus granulosus from the source of echinococcosis

The present invention discloses a vaccine for blocking the transmission of Echinococcus granulosus from the source of echinococcosis. The invention provides a vaccine for CTB or composed of its EgM123 vaccine and recombinant EgM123 protein of Mycobacterium smegmatis vaccine subunit vaccine vaccine sets. The active component of the CTB EgM123 vaccine for cholera toxin B subunit and Echinococcus granulosus EgM123 fusion protein and fusion protein; active ingredients of the recombinant EgM123 protein of Mycobacterium smegmatis vaccine for recombinant Mycobacterium smegmatis can express EgM123 protein of Echinococcus granulosus. The vaccine provided by this invention can stimulate the immune response in host organs, improve the immune level of the host, enhance the intestinal mucosal immune response, and play an important protective role in the infection of echinococcosis.

【技术实现步骤摘要】
源头阻断包虫病病原细粒棘球绦虫传播的疫苗
本专利技术属于疫苗领域,涉及用于防控细粒棘球绦虫传播的疫苗,特别涉及一种源头阻断包虫病病原细粒棘球绦虫传播的疫苗。
技术介绍
包虫病(Echinococcosis)是由棘球绦虫幼虫寄生于人及某些动物体内所致的一种严重的人畜共患寄生虫疾病。95%以上的包虫病例为细粒棘球蚴(Echinococcusgranulosus,E.g)感染所致的囊型包虫病(cystisechinococcosis,CE),呈世界性分布。我国西部九省区(新疆、甘肃、宁夏、青海、四川、内蒙,西藏,云南和黑龙江省或自治区)为高流行区,人群患病率可高达1%~10%,严重影响我国西部农牧区的经济发展和群众健康。E.g为双宿主寄生虫,其成虫寄生于犬(终末宿主)的小肠内,幼虫寄生于人或家畜等食草动物(中间宿主)的脏器内,在犬和家畜之间往复循环。犬在包虫病的传播中起最关键作用,只有控制了犬体内的E.g,才能切断病原循环链,控制包虫病的传播。若能对犬实施免疫预防,将极大简化控制方法,加快控制进程。但目前犬免疫研制停滞不前,其中一个重要原因是保护性抗原的筛选及其生产的屏障。由于E.g寄生的中间宿主种类多、数量大、分布广等因素影响,我国包虫病的综合防治仍然面临着诸多困难和巨大挑战。目前对包虫病患者的治疗其唯一治愈的方法是进行包虫囊摘除。但手术对人体带来的损伤比较大,且有可能复发。化疗药物的治疗效果非常有限,且可产生一些严重的不良反应。因此,需要研究更有效的解决方法,免疫预防是防止包虫病流行的最理想的途径,通过分子生物学技术将细粒棘球绦虫的抗原制成基因工程疫苗,为包虫病的免疫预防和免疫诊断提供了新的思路。国内外学者在这方面已经取得了很多的进展,抗E.g疫苗经历了死疫苗、基因工程亚单位蛋白疫苗等,但至今为止,还没有接种犬等终末宿主的疫苗,犬抗细粒棘球绦虫疫苗的研制将大大加快包虫病的控制和消除,是包虫病防控研究的当务之急。EgM家族融合蛋白(EgM123)是细粒棘球绦虫成虫发育的特异表达基因,它们以EgM-HIS融合蛋白的形式高效表达。霍乱肠毒素(CT)是霍乱弧菌致病的主要毒力因子,同时也具有很强的免疫原性。CT具有2个亚单位,1个A亚单位(CTA)和5个B亚单位(CTB)以氢键和盐桥连接在一起,形成紧凑而稳定的AB5型圆桶状六聚体蛋白,并能以高亲和力与表达于所有有核细胞细胞膜上的神经节苷酯(GM1)结合。卡介苗(BCG)是一种弱化了的牛型分支杆菌,是目前预防结合病最有效的方法,自1921年以来全球已经有40亿人接种了BCG疫苗,其安全性已经得到了证实。随着大量的研究表明,BCG不只是一种活疫苗还是一种而且还是外源基因的表达载体,这个发现为BCG的应用开辟了新的领域。重组BCG疫苗是以BCG为载体利用基因工程技术将外源基因导入到BCG中,依靠BCG在宿主体内复制,表达一种或多种外源抗原,诱导对多种疾病的体液免疫和细胞免疫。BCG即是一种活疫苗也是目前所知道的最强的免疫佐剂之一。由此可见,重组BCG疫苗集载体与佐剂于一体,一次接种可获得强而持续的免疫保护。耻垢分枝杆菌(mycobacteriumsmegmatis,MS)是一种生长快转化率高的非典型分支杆菌,是一种非致病的分支杆菌,且成功的用来作为一个外源蛋白的表达宿主。耻垢分枝杆菌和BCG一样可以用来作为疫苗载体。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供两种新的用于防控细粒棘球绦虫传播的疫苗。本专利技术所提供的用于防控细粒棘球绦虫传播的疫苗,具体为如下两种:第一种:用于防控细粒棘球绦虫传播的亚单位疫苗,为(或其活性成分为)由霍乱毒素B亚单位和细粒棘球绦虫EgM123蛋白融合而成的融合蛋白。其中,所述霍乱毒素B亚单位位于所述融合蛋白的N端,所述细粒棘球绦虫EgM123蛋白位于所述融合蛋白的C端。在本专利技术中,所述霍乱毒素B亚单位的氨基酸序列具体如序列表中序列1所示;所述细粒棘球绦虫EgM123蛋白的氨基酸序列具体如序列表中序列2所示。更进一步,所述融合蛋白具体可为如下任一:(a1)氨基酸序列如序列表中序列3的第24-285位所示的蛋白质;(a2)氨基酸序列如序列表中序列3所示的蛋白质;(a3)与(a1)或(a2)所限定的氨基酸序列具有99%以上、95%以上、90%以上、85%以上或者80%以上同源性且具有相同功能的蛋白质。所述亚单位疫苗在使用时可以多次(如三次)重复免疫。第二种:用于防控细粒棘球绦虫传播的成套疫苗,由分别单独包装的疫苗A和疫苗B组成;所述疫苗A为如上任一所述的亚单位疫苗;所述疫苗B(或其活性成分)为能够表达细粒棘球绦虫EgM123蛋白的重组耻垢分枝杆菌。在所述疫苗B中,所述细粒棘球绦虫EgM123蛋白的氨基酸序列具体可如序列表中序列2所示。在本专利技术中,所述能够表达细粒棘球绦虫EgM123蛋白的重组耻垢分枝杆菌具体是按照包括如下步骤的方法制备得到的:将所述细粒棘球绦虫EgM123蛋白的编码基因克隆入pMV261载体的多克隆位点(如EcoRI和SalI)处,得到重组表达载体;将所述重组表达载体导入耻垢分枝杆菌后得到所述能够表达细粒棘球绦虫EgM123蛋白的重组耻垢分枝杆菌。更进一步,所述细粒棘球绦虫EgM123蛋白的编码基因具体为序列表中序列4所示DNA分子。所述成套疫苗和记载有如下内容的可读性载体在制备用于防控细粒棘球绦虫传播的试剂盒中的应用也属于本专利技术的保护范围。所述如下内容具体可为:在用于防控细粒棘球绦虫传播时,所述疫苗A作为基础免疫疫苗使用,所述疫苗B作为加强免疫疫苗使用。其中,在用于防控细粒棘球绦虫传播时,所述疫苗A作为基础免疫疫苗免疫一次,加强免疫使用所述疫苗B,以增强免疫效果,持续维持抗体水平。在本专利技术的一个实施例中,所述疫苗A作为基础免疫疫苗免疫一次,2周后采用所述疫苗B进行加强免疫。所述亚单位疫苗或所述成套疫苗在制备用于预防和/或控制由于细粒棘球绦虫传播所致疾病的产品中的应用也属于本专利技术的保护范围。其中,所述由于细粒棘球绦虫传播所致疾病具体可为包虫病;更加具体为囊型包虫病。所述亚单位疫苗或所述成套疫苗在如下任一中的应用也属于本专利技术的保护范围:(A1)制备能够提高机体抗细粒棘球绦虫EgM123蛋白的抗血清效价的产品;(A2)制备能够增强肠道黏膜免疫反应的产品。本专利技术所提供的所述亚单位疫苗或所述成套疫苗可用于狗。本专利技术以霍乱毒素B亚单位为载体制备细粒棘球绦虫EgM123基因亚单位疫苗,用该疫苗免疫小鼠后从免疫后小鼠血清效价数据上看,可见该疫苗能起到很高的免疫效果。在此基础上,进一步给小鼠使用表达细粒棘球绦虫EgM123蛋白重组耻垢分枝杆菌疫苗进行加强免疫,结果显示小鼠血清效价得到非常明显的提升。可见:本专利技术所提供的疫苗能够刺激宿主体内免疫应答,提高宿主的免疫水平,在抗包虫病感染中起到重要的保护作用。另外,本专利技术所提供的疫苗还具有增强肠道粘膜免疫反应的功效。附图说明图1为不同时间下IPTG诱导融合蛋白CTB-EgM123的表达。M:标准分子质量;1:CTB-EgM123未诱导;2:CTB-EgM123诱导上清2h;3:CTB-EgM123诱导沉淀2h;4:CTB-EgM123诱导上清3h;5:CTB-EgM123诱导沉淀3h;6:CTB-EgM123本文档来自技高网
...
源头阻断包虫病病原细粒棘球绦虫传播的疫苗

【技术保护点】
一种用于防控细粒棘球绦虫传播的亚单位疫苗,其活性成分为由霍乱毒素B亚单位和细粒棘球绦虫EgM123蛋白融合而成的融合蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种用于防控细粒棘球绦虫传播的亚单位疫苗,其活性成分为由霍乱毒素B亚单位和细粒棘球绦虫EgM123蛋白融合而成的融合蛋白。2.根据权利要求1所述的亚单位疫苗,其特征在于:所述霍乱毒素B亚单位位于所述融合蛋白的N端,所述细粒棘球绦虫EgM123蛋白位于所述融合蛋白的C端。3.根据权利要求1或2所述的亚单位疫苗,其特征在于:所述霍乱毒素B亚单位的氨基酸序列如序列表中序列1所示;所述细粒棘球绦虫EgM123蛋白的氨基酸序列如序列表中序列2所示。4.根据权利要求1-3中任一所述的亚单位疫苗,其特征在于:所述融合蛋白为如下任一:(a1)氨基酸序列如序列表中序列3的第24-285位所示的蛋白质;(a2)氨基酸序列如序列表中序列3所示的蛋白质;(a3)与(a1)或(a2)所限定的氨基酸序列具有99%以上、95%以上、90%以上、85%以上或者80%以上同源性且具有相同功能的蛋白质。5.一种用于防控细粒棘球绦虫传播的成套疫苗,由分别单独包装的疫苗A和疫苗B组成;所述疫苗A为权利要求1-4中任一所述的亚单位疫苗;所述疫苗B的活性成分为能够表达细粒棘球绦虫EgM123蛋白的重组耻垢分枝杆菌。6....

【专利技术属性】
技术研发人员:张文宝李军张壮志郑雪婷何黎齐文静郭刚王俊伟郭宝平
申请(专利权)人:新疆医科大学第一附属医院新疆畜牧科学院兽医研究所新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心
类型:发明
国别省市:新疆,65

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1