The invention discloses a method for simulation of mechanical stimulation of abnormal blood cells valve calcification, relates to the technical field of biological model construction, which comprises the following steps: S1, extraction of valvular interstitial cells into cell culture medium supernatant from aortic tissue by collagenase digestion method; S2, the beads with RGD peptide solution prepared by mixing a bead RGD peptide attached; S3, will join RGD peptide bead attachment step S1 prepared supernatant culture medium supernatant, PBS after washing into the culture medium of the first; the first medium in magnetic twisting apparatus, by adjusting the magnetic distortion meter size, frequency and magnetic force time simulation of abnormal blood flow stimulation on heart valve interstitial cell mechanics, observation of heart valve interstitial cell calcification status. The invention can achieve the role of microscopic simulation of abnormal hemodynamic stimulation in valvular calcification, and shorten the time needed for constructing calcification model based on simple calcium medium.
【技术实现步骤摘要】
模拟异常血流力学刺激对瓣膜细胞钙化作用的方法
本专利技术涉及生物模型构建
,具体涉及一种模拟异常血流力学刺激对瓣膜细胞钙化作用的方法。
技术介绍
目前在对主动脉瓣钙化的力学刺激研究中,以生物反应器为主,诸如拉伸力生物反应器、弯曲力生物反应器、剪切力生物反应器、复合生物反应器,均研究宏观异常力学刺激对瓣膜组织或瓣膜细胞的钙化作用,只能模拟部分宏观力学,如单纯层流剪切力、湍流剪切力,没有办法做到完全模拟外界异常的力学刺激。具体的说,正常钙化过程中,力学刺激只能直接作用于瓣膜内皮细胞,通过瓣膜内皮细胞和细胞外间质将力学刺激传导至瓣膜间质细胞,或通过瓣膜内皮细胞分泌细胞因子影响瓣膜间质细胞的钙化。宏观的力学模型没有办法排除瓣膜内皮细胞分泌细胞因子对瓣膜间质细胞钙化的影响以单纯研究力学刺激对瓣膜间质细胞的影响;同时,宏观的力学模型也没有办法完全模拟细胞外间质或是瓣膜内皮细胞将力学刺激传递给瓣膜间质细胞的过程。同时,研究宏观力学刺激受体对钙化的影响,操作复杂,需要将复杂的装置放入培养箱中持续培养,宏观力学刺激培养钙化周期作用周期较长。
技术实现思路
针对现有技术中存在的缺陷,本专利技术的目的在于提供一种模拟异常血流力学刺激对瓣膜细胞钙化作用的方法,实现微观模拟异常血流力学刺激在瓣膜钙化中的作用。为达到以上目的,本专利技术采取的技术方案是:一种模拟异常血流力学刺激对瓣膜细胞钙化作用的方法:S1,从主动脉瓣组织中采用胶原酶消化法提取瓣膜间质细胞制成细胞上清培养基;S2,将磁珠与RGD肽原液混合制得附着有RGD肽的磁珠;S3,将附着有RGD肽的磁珠加入步骤S1制得的细胞上 ...
【技术保护点】
一种模拟异常血流力学刺激对瓣膜细胞钙化作用的方法,其特征在于:S1,从主动脉瓣组织中采用胶原酶消化法提取瓣膜间质细胞制成细胞上清培养基;S2,将磁珠与RGD肽原液混合制得附着有RGD肽的磁珠;S3,将附着有RGD肽的磁珠加入步骤S1制得的细胞上清培养基中,弃上清,PBS清洗后加入第一培养基中培养;将所述第一培养基放入磁力扭曲仪中,通过调节磁力扭曲仪的磁力大小、频率和磁力作用时间模拟异常血流对瓣膜间质细胞的力学刺激,观察瓣膜间质细胞的钙化状态。
【技术特征摘要】
1.一种模拟异常血流力学刺激对瓣膜细胞钙化作用的方法,其特征在于:S1,从主动脉瓣组织中采用胶原酶消化法提取瓣膜间质细胞制成细胞上清培养基;S2,将磁珠与RGD肽原液混合制得附着有RGD肽的磁珠;S3,将附着有RGD肽的磁珠加入步骤S1制得的细胞上清培养基中,弃上清,PBS清洗后加入第一培养基中培养;将所述第一培养基放入磁力扭曲仪中,通过调节磁力扭曲仪的磁力大小、频率和磁力作用时间模拟异常血流对瓣膜间质细胞的力学刺激,观察瓣膜间质细胞的钙化状态。2.如权利要求1所述的一种模拟异常血流力学刺激对瓣膜细胞钙化作用的方法,其特征在于:所述第一培养基为血清浓度1%的普通培养基或钙化培养基。3.如权利要求1所述的一种模拟异常血流力学刺激对瓣膜细胞钙化作用的方法,其特征在于:步骤S1包括:S101,取猪心,尽量无菌条件下剪下主动脉瓣,泡在高糖溶液中;S102,用添加舒普深和两性霉素的无菌PBS反复冲洗瓣膜后,将瓣膜至于含舒普深和两性霉素的I型胶原酶中消化,无肉眼可观的组织残渣后,离心去除上清,加入血清浓度10%的完全培养基中培养;S103,取瓣膜间质细胞,采用胰酶消化法消化,待大部分细胞漂起后,用血清浓度10%的完全培养基中和,离心去除上清,再加入血清浓度1...
【专利技术属性】
技术研发人员:董念国,汪宁,姜烨凡,陈军见,李庚,刘义华,陈锦杰,
申请(专利权)人:华中科技大学同济医学院附属协和医院,
类型:发明
国别省市:湖北,42
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。