一种硬脂酸修饰的细胞穿膜肽及其制备与应用制造技术

本发明专利技术属于生物药物研发领域，具体涉及一种硬脂酸修饰的细胞穿膜肽及其制备与应用。本发明专利技术通过广泛而深入的研究发现，一种全新的硬脂酸修饰的细胞穿膜肽，将所述硬脂酸修饰的细胞穿膜肽与多肽融合形成的融合肽，能够有效帮助多肽进入细胞内。将所述融合肽采用表面活性剂法进一步制备成脂质体制剂后，粒径均一、包封率好，稳定性高，能够进一步提高融合肽进入细胞的能力，克服了许多包括功能肽在内的多肽不能进入细胞的缺陷。

【技术实现步骤摘要】
一种硬脂酸修饰的细胞穿膜肽及其制备与应用
本专利技术属于生物药物研发领域，具体涉及一种硬脂酸修饰的细胞穿膜肽及其制备与应用。
技术介绍
大部分的多肽药物的治疗靶点都在细胞内，比如细胞质，细胞核或者其他特殊的细胞器如线粒体等，因此，把具有生物活性的多肽输送到细胞内是多肽类药物发挥药效的关键所在。在多肽药物的输送过程中，存在很多的局限性。首先多肽本身的大分子量使得多肽对于受体生物来说是外来物，除了一些小分子多肽通过主动转运进入细胞外，亲脂性的生物膜也阻碍着多肽分子自发进入细胞。虽然有些多肽可以通过受体介导的细胞内吞作用进入细胞，但是进入细胞的多肽最终被溶酶体吞噬，多肽的生物活性被溶酶体内的酶破坏，这样就导致仅有很少一部分的多肽可以进入细胞质发挥作用，所以有很多的多肽虽然在体外有很好的作用，却由于生物利用度问题无法应用于体内。另外多肽药物在体内也不稳定，各种各样的体内因素均会导致多肽的失活：温度，PH，高盐浓度，或者表面活性影响其活性，非共价离子化合物、低分子或者高分子化合物也影响多肽的结构等等。由于多肽的半衰期短，不断的注射给药使病人的顺应性差，多肽本身的物化性质和低的渗透性也限制了其通过非侵袭性的鼻腔、皮肤、肺和口服的给药途径[3]的应用。多肽药物的细胞内输送过程中存在着一系列的难点，因此在多肽药物的研发过程中，寻找合适的输送载体来提高多肽的生物利用度至关重要。
技术实现思路
为了克服现有技术中所存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种硬脂酸修饰的细胞穿膜肽及其制备与应用。为了实现上述目的以及其他相关目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一方面，提供了一种硬脂酸修饰的细胞穿膜肽，包括硬脂酸和细胞穿膜肽，所述硬脂酸修饰于细胞穿膜肽上。优选地，所述硬脂酸与细胞穿膜肽之间通过酰胺键连接。优选地，所述硬脂酸修饰的细胞穿膜肽为CPP-SA，所述CPP的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，硬脂酸SA修饰于所述CPP的C端。进一步优选地，硬脂酸SA的羧基与所述CPP的C端的赖氨酸的侧链氨基连接。进一步优选地，硬脂酸修饰的细胞穿膜肽CPP-SA的结构式如式(1)所示，具体为：优选地，所述硬脂酸修饰的细胞穿膜肽为CPP-MMP-SA，所述CPP-MMP的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，硬脂酸SA修饰于所述CPP-MMP的C端。进一步优选地，硬脂酸SA的羧基与所述CPP-MMP的C端的赖氨酸的侧链氨基连接。进一步优选地，硬脂酸修饰的细胞穿膜肽CPP-MMP-SA的结构式如式(2)所示，具体为：优选地，所述硬脂酸修饰的细胞穿膜肽为GGGSK-SA，硬脂酸SA修饰于所述GGGSK的C端。进一步优选地，硬脂酸SA的羧基与所述GGGSK的C端的赖氨酸的侧链氨基连接。进一步优选地，硬脂酸修饰的细胞穿膜肽GGGSK-SA的结构式如式(3)所示，具体为：本专利技术的第二方面，提供了前述硬脂酸修饰的细胞穿膜肽在输送多肽进入细胞中的用途。本专利技术的第三方面，提供了前述硬脂酸修饰的细胞穿膜肽在制备融合肽中的用途。本专利技术的第四方面，提供一种融合肽，包括多肽和前述硬脂酸修饰的细胞穿膜肽，所述多肽的C端与所述硬脂酸修饰的细胞穿膜肽的N端连接。优选地，所述多肽的C端与硬脂酸修饰的细胞穿膜肽的N端通过酰胺键连接。本专利技术对于多肽没有特别的限制。优选地，所述多肽含有1～50个氨基酸。本专利技术的第五方面，提供一种脂质体制剂，含有前述融合肽和脂质体载体。优选地，融合肽与脂质体之间的摩尔比例范围是1:(1～10)。本专利技术对于脂质体的组成成分没有特别的限制，只要能够实现对融合肽的有效包封和运载即可。优选地，所述脂质体的组成成分选自蛋磷脂、氢化大豆磷脂酰胆碱、氢化蛋磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰-2-硬脂酰磷脂酰胆碱、1-硬脂酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰-2-油酰磷脂酰胆碱、1-硬脂酰-2-亚油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、氢化二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸、二硬脂酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、脑磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、蛋磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、脑鞘磷脂、二棕榈酰鞘磷脂或二硬脂酰鞘磷脂、胆固醇、二油氧基丙基三甲基氯化铵(DOTAP)、二油酰氯丙基氯化三甲铵(DOTMA)、双十八烷基二甲基溴化铵(DDAB)、二甲基胺乙基胺基丙酰基-胆固醇(DC-Chol)、精胺-5-羧基氨基乙酸二十八烷基酰胺(DOGS)、二油酰琥珀酰甘油胆碱酯(DOSC)、二油酰氯精胺羧基酰胺乙基二甲基丙基三氟乙酸铵(DOSPA)、MVL5中的任一种或它们的两种或两种以上的组合。优选地，所述脂质体的组成成分选自大豆卵磷脂、氢化大豆磷脂、胆固醇。本专利技术的第六方面，提供了一种制备前述脂质体制剂的方法，为表面活性剂透析法。优选地，所述方法包括如下步骤：(4)制备脂质体混悬液：按配比取各脂质体成分，混匀，得脂质膜，加入水合液，水合，得脂质体混悬液；(5)制备多肽表面活性剂溶液：按配比取融合肽以及表面活性剂，混匀，得多肽表面活性剂溶液；(6)制备脂质体制剂：将步骤(2)所得多肽表面活性剂溶液加入到步骤(1)所得脂质体混悬液中，混匀，孵育，透析去除表面活性剂及游离融合肽，得脂质体制剂。优选地，所述融合肽与脂质体总成分之间的摩尔比例范围是1:(1～10)。优选地，所述融合肽与表面活性剂之间的摩尔比例范围是1：(5～50)。优选地，步骤(1)中，所述水合液选自质量体积浓度为5％的葡萄糖水溶液。优选地，步骤(2)中，所述表面活性剂选自非离子表面活性剂。优选地，步骤(2)中，所述表面活性剂选自n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷、n-壬基-β-D-吡喃葡萄糖苷、n-癸基-β-D-麦芽糖苷。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术通过广泛而深入的研究发现，一种全新的硬脂酸修饰的细胞穿膜肽，将所述硬脂酸修饰的细胞穿膜肽与多肽融合形成的融合肽，能够有效帮助多肽进入细胞内。将所述融合肽采用表面活性剂法进一步制备成脂质体制剂后，粒径均一、包封率好，稳定性高，能够进一步提高融合肽进入细胞的能力，克服了许多包括功能肽在内的多肽不能进入细胞的缺陷。附图说明图1：实施例2中罗丹明B标记的1号样品脂质体和融合肽原料给药2h时的胞内运输情况，制剂组2h(左)；原料组2h(右)。图2：实施例3罗丹明B标记的1号样品脂质体和原料给药2h时的胞内运输情况，制剂组2h(左)；原料组2h(右)。图3：实施例4罗丹明B标记的1号样品和原料给药2h时的胞内运输情况，制剂组2h(左)；原料组2h(右)。图4：实施例7罗丹明B标记的1号样品和原料给药2h时的胞内运输情况，制剂组2h(左)；原料组2h(右)。具体实施方式在进一步描述本专利技术具体实施方式之前，应理解，本专利技术的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本专利技术实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本专利技术的保护范围。下列实施例中未本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种硬脂酸修饰的细胞穿膜肽，包括硬脂酸和细胞穿膜肽，所述硬脂酸修饰于细胞穿膜肽上。

【技术特征摘要】
1.一种硬脂酸修饰的细胞穿膜肽，包括硬脂酸和细胞穿膜肽，所述硬脂酸修饰于细胞穿膜肽上。2.根据权利要求1所述的硬脂酸修饰的细胞穿膜肽，其特征在于，所述硬脂酸与细胞穿膜肽之间通过酰胺键连接。3.根据权利要求1所述的硬脂酸修饰的细胞穿膜肽，其特征在于，所述硬脂酸修饰的细胞穿膜肽为CPP-SA，所述CPP的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，硬脂酸SA修饰于所述CPP的C端。4.根据权利要求3所述的硬脂酸修饰的细胞穿膜肽，其特征在于，硬脂酸SA的羧基与所述CPP的C端的赖氨酸的侧链氨基连接。5.根据权利要求3所述的硬脂酸修饰的细胞穿膜肽，其特征在于，硬脂酸修饰的细胞穿膜肽CPP-SA的结构式如式(1)所示。6.根据权利要求1所述的硬脂酸修饰的细胞穿膜肽，其特征在于，所述硬脂酸修饰的细胞穿膜肽为CPP-MMP-SA，所述CPP-MMP的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，硬脂酸SA修饰于所述CPP-MMP的C端。7.根据权利要求6述的硬脂酸修饰的细胞穿膜肽，其特征在于，硬脂酸SA的羧基与所述CPP-MMP的C端的赖氨酸的侧链氨基连接。8.根据权利要求6述的硬脂酸修饰的细胞穿膜肽，其特征在于，硬脂酸修饰的细胞穿膜肽CPP-MMP-SA的结构式如式(2)所示。9.根据权利要求1所述的硬脂酸修饰的细胞穿膜肽，其特征在于，所述硬脂酸修饰的细胞穿膜肽为GGGSK-SA，硬脂酸SA修饰于所述GGGSK的C端。10.根据权利要求9所述的硬脂酸修饰的细胞穿膜肽，其特征在于，硬脂酸SA的羧基与所述GGGSK的C端的赖氨酸的侧链氨基连接。11.根据权利要求9所述的硬脂酸修饰的细胞穿膜肽，其特征在于，硬脂酸修饰的细胞穿膜肽GGGSK-SA的结构式如式(3)所示。12.如权利要求1～11任一权利要求所述硬脂酸修饰的细胞穿膜肽在输送多肽进入细胞中的用途。13.如权利要求1～11任一权利要求所述硬脂酸修饰的细胞穿膜肽在制备融合肽中的用途。14.一种融合肽，包括多肽和如权利要求1～11任一权利要求所述硬脂酸修饰的细胞穿膜肽，所述多肽的C端与所述硬脂酸修饰的细胞穿膜肽的N端连接。15.根据权利要求14所述的融合肽，其特征在于，所述多肽含有1～50个氨基酸。16.一种脂质体制剂，含有如权利要求14或15所述的融合肽和脂质体载体。17.如权利要求16所述的脂质体制剂，其特征在于，融合肽与脂质体之间的摩尔比例范围是1:(1～10)。18.如权利要求16所述的脂质体制剂，其特征在于，所述脂质体的组成成分选自蛋磷脂、氢化大豆磷脂酰胆碱、氢化蛋磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐宇虹，李秩举，彭金良，魏晓慧，陈晓龙，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海,31