王不留行黄酮苷在制备抗血管钙化药物中的应用制造技术

本发明专利技术为制备抗血管钙化的王不留行黄酮苷的应用，属中药药物制剂领域。将王不留行黄酮苷应用到抗血管钙化的药物开发中，以制备更好的治疗血管钙化的方法。本发明专利技术细胞实验结果显示王不留行黄酮苷(VAC)能显著降低钙化诱导培养基引起的血管平滑肌细胞(VSMCs)钙离子沉积和碱性磷酸酶(ALP)活性的升高，同时VAC抑制钙化诱导培养基诱导的钙化相关蛋白Runt相关转录因子2(runt‑related transcription factor 2，Runx2)和骨形成蛋白2(Bone morphogenetic protein 2，BMP‑2)的表达；在体动物实验进一步证实VAC有效治疗维生素D3和尼古丁诱导的钙化模型，证实王不留行黄酮苷能有效改善血管钙化，是治疗血管钙化的一种中药，可以作为新的治疗血管钙化相关疾病的药物、保健品和营养品进行开发，为治疗血管钙化相关疾病提供了一种新的途径和手段。

The application of flavone glycosides in preparing anti vascular calcification in drugs

The invention relates to application of Vaccaria flavonoid glycosides in preparing anti vascular calcification, which belongs to the field of Chinese medicine preparation. Will be applied to drug development vaccarin glycoside anti vascular calcification, preparation method of treating vascular calcification is better for. The experimental results show that the cells of flavonoid glycosides (VAC) can significantly reduce the calcification induced medium induced vascular smooth muscle cells (VSMCs) of calcium deposition and alkaline phosphatase (ALP) activity increased, while VAC protein inhibits calcification of Runt related transcription factor inducing medium induced calcification is 2 (runt related transcription factor 2, Runx2) and bone morphogenetic protein 2 (Bone morphogenetic protein 2, BMP 2) expression; in vivo animal experiments further confirmed that VAC was effective in the treatment of calcification of vitamin D3 and nicotine induced, vaccarin glycosides can effectively improve the confirmed vascular calcification, is a traditional Chinese medicine for treating vascular calcification that can be developed as drugs, treatment of vascular calcification related diseases of the new health care and nutrition related diseases, vascular calcification treatment provides a new way and Means.

【技术实现步骤摘要】
王不留行黄酮苷在制备抗血管钙化药物中的应用
本专利技术涉及抗血管钙化中药开发，具体设计王不留行黄酮苷在制备抗血管钙化药物中的应用，属中药药物开发领域。
技术介绍
血管钙化是一种常见的血管病变，与骨发育过程相似，其病理表现主要为血管壁的钙磷过度沉积，导致血管壁僵硬性增加和血管顺应性下降，进而引起心肌缺血缺氧，左心室肥大和心力衰竭，引发血栓形成和板块破裂，血管钙化是心脑血管疾病高死亡率的主要因素。血管钙化受到包括代谢、炎症、氧化应激、凋亡等多种因素的调控，血管钙化是动脉粥样硬化、糖尿病血管病变、慢性肾病、衰老和血管损伤等心血管疾病的共同病理表现。临床研究发现80％的血管损伤和90％的冠脉疾病中均存在血管钙化，血管钙化是心血管事件和脑卒中的预警指标，但血管钙化的发病机制目前尚未完全阐明，有效预防和治疗血管钙化是将成为21世纪医疗卫生事业的主要挑战。中药是我国的宝贵资源之一，研究发现传统一些中药在防护血管钙化中发挥一定的作用，但深入探索和筛选具有抗血管钙化的中药仍然是任重道远的巨大任务，阐明中药开血管钙化其作用机制并研究和开发这些中药具有重要的临床意义。我们多年来一直从事王不留行的研究，王不留行为石竹科植物麦蓝菜VaccariaSegetalis(Neck.)Garcke的干燥成熟种子，是一种常见的中药，具有活血通经、下乳消肿等功效。王不留行主要含有刺桐碱、三萜皂苷、黄酮苷、类脂、环肽、脂肪酸和单糖等成分，王不留行黄酮苷(Vaccarin,VAC)是王不留行的主要有效成分，本实验室研究发现不留行黄酮苷具有促进血管新生，对抗高糖和氧化应激的引起的内皮细胞损伤，降低血压和保护高血压肾病，改善糖尿病脂质代谢紊乱，加快开放性创伤的愈合速度，提示王不留行黄酮苷可能具有心血管保护作用，但目前尚未有报道王不留行黄酮苷在制备抗血管钙化药物中的作用。
技术实现思路
本专利技术要解决的是为现有的抗血管钙化药物制备
提供一种新的途径，提供王不留行黄酮苷在抗血管钙化药物中的作用，因此本研究提供的技术方法是将王不留行黄酮苷应用于制备治疗血管钙化的药物。本专利技术的有益效果是：王不留行黄酮苷改善血管钙化，将王不留行黄酮苷应用到血管钙化相关药物的开发中，以制备更好的抗血管钙化的新思路，不仅拓展了抗血管钙化药物的选择，也为我国抗血管钙化中药的筛选提供的新的策略和思路。附图说明图1：王不留行黄酮苷(VAC)对血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响。图2：王不留行黄酮苷(VAC)对血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化相关蛋白Runx-2和BMP-2的影响。图3：王不留行黄酮苷(VAC)对血管钙化大鼠模型血管钙离子沉积和ALP活性的影响。图4：王不留行黄酮苷(VAC)对血管钙化大鼠模型的血管钙化相关关蛋白Runx-2和BMP-2的影响。具体实施方式实施例1血管钙化模型的复制血管钙化模型大鼠制作方法：参考国内外权威期刊，我们采用8周龄雄性SD大鼠肌肉注射维生素D330万单位/kg，同时灌胃尼古丁25mg/kg，9h后再重复给予尼古丁1次，2周后再次给予肌肉注射维生素DB30万单位/kg，4周后大鼠出现广泛的血管钙化。实施例2实验分组及王不留行黄酮苷(VAC)干预将8周龄的SD大鼠随机分三组：(1)正常对照-生理盐水组：为正常对照组，始终给予正常饮食和饮水，2周后给予生理盐水皮下灌注2周作为王不留行黄酮苷(VAC)的对照；(2)血管钙化组-生理盐水组采用维生素D3联合尼古丁方法引起血管钙化，2周后给予生理盐水(saline)腹腔注射2周作为王不留行黄酮苷(VAC)的对照；(3)血管钙化-黄酮苷组(10mg/kg)：采用维生素D3联合尼古丁方法引起血管钙化，2周后给予王不留行黄酮苷(VAC，10mg/kg)腹腔注射2周。实施例3vonKossa染色和AlizarinredS染色参考国内外权威文献，戊巴比妥钠麻醉大鼠，打开胸腔、暴露心脏，经左心室插管至升主动脉，夹壁腹主动脉，左心耳剪开一小出口，快速灌注0.01MPBS(37℃)冲洗至流出液清亮后再灌注预冷(4℃)的4％多聚甲醛固定(先快后慢，在大鼠肢体伸展后减慢速度)。取出胸主动脉，置于4℃的4％多聚甲醛后固定24h，脱水，石蜡包埋，切片，进行常规vonKossa染色和AlizarinredS染色。实施例4原代血管平滑肌细胞培养及钙化培养基诱导采用酶消化法培养原代血管平滑肌细胞(VSMCs)，所有实验只用3-6代的原代VSMCs，VSMCs每隔3-4天传代一次，处于对数生长期的VSMCs给予β-glycerophosphate(5mM)和CaCl214天(2.5mM)，每两天换一次液，并在造模期间，分别给予对照PBS和VAC(5μM)处理。实施例5钙离子浓度测定和碱性磷酸酶(ALP)活性测定采用钙离子含量测定试剂盒(南京建成)检测钙离子含量，根据碱性磷酸酶分解磷酸苯二钠，产生游离酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4-氨基安替吡啉作用经铁氰化钾氧化生成红色醌衍生物，根据红色深浅可以测定酶活力的高低，采用ALP测定试剂盒(南京建成)检测ALP活性。实施例6蛋白表达检测(WesternBlot)采用WesternBlot检测钙化相关蛋白Runt相关转录因子2(runt-relatedtranscriptionfactor2，Runx2)和骨形成蛋白2(Bonemorphogeneticprotein2，BMP-2)的表达。实验结果如附图1至4中所示：(1)王不留行黄酮苷(VAC)对血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响：与对照组(Control)相比，钙化培养基(Calcification)显著导致钙离子沉积，钙离子浓度增加和ALP活性升高，而王不留行黄酮苷(VAC)显著降低钙化培养基诱导的VSMC钙化，详见图1。数据均以均值±标准误(mean±SE)表示，每组样本为6，P<0.05为有统计学差异，*与Control组相比，P<0.05；与Calcification组相比，P<0.05。Control，对照组；Calcification，血管钙化组；Calcification+VAC，血管钙化诱导同时给予王不留行黄酮苷的剂量为5μM。(2)王不留行黄酮苷(VAC)对血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化相关蛋白Runx-2和BMP-2的影响：与对照组(Control)相比，钙化培养基(Calcification)显著升高VSMCs的钙化相关蛋白Runt相关转录因子2(runt-relatedtranscriptionfactor2，Runx2)和骨形成蛋白2(Bonemorphogeneticprotein2，BMP-2)的表达，而王不留行黄酮苷(VAC)显著抑制该效应，详见图2。数据均以均值±标准误(mean±SE)表示，每组样本为6，P<0.05为有统计学差异，*与Control组相比，P<0.05；与Calcification组相比，P<0.05。Control，对照组；Calcification，血管钙化组；Calcification+VAC，血管钙化诱导同时给予王不留行黄酮苷的剂量为5μM。(3)王不留行黄酮苷(VAC)对血管钙化大鼠模型血管钙离子沉积和ALP活性的影响：与对照本文档来自技高网...

【技术保护点】
王不留行黄酮苷在制备抗血管钙化药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.王不留行黄酮苷在制备抗血管钙化药物中的应用。2.根据权利要求1所述，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱丽颖，孙海建，朱雪雪，龚蕾蕾，蔡维维，周跃涛，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32