多特异性抗体、抗体类似物、组合物和方法技术

本发明专利技术提供了特异性结合至少两个不同表位的多特异性抗体。还提供了天然抗体的结构性变体(抗体类似物)。另外，提供了具有一系列生物学活性的多特异性抗体和抗体类似物。提供了激动剂及拮抗剂多特异性抗体和激动剂及拮抗剂抗体类似物。还提供了与治疗剂和/或诊断剂缀合的多特异性抗体和抗体类似物，还提供了与下述试剂缀合的多特异性抗体和抗体类似物，与缺少这类试剂的多特异性抗体和抗体类似物相比，所述试剂用来增加体内半寿期。此外，提供了制造多特异性抗体及抗体类似物和包含多特异性抗体及抗体类似物的组合物的方法。也提供了多特异性抗体和抗体类似物的治疗用途、研究用途和诊断用途。

Multispecific antibodies, compositions, methods and analogs

The invention provides a specific combination of at least two different epitopes of multispecific antibodies. Structural variants of the natural antibodies (antibody analogues) are also provided. In addition, provides multispecific antibodies and antibody analogues have a series of biological activity. Provides agonists and antagonists of multispecific antibodies and agonists and antagonists of antibody analogues. Also provided with therapeutic and / or diagnostic agents conjugated multispecific antibodies and antibody analogues, also provides multispecific antibodies and antibody conjugated analogs with the reagent, compared with multispecific antibodies and antibody analogues lacking the reagent, the reagent used to increase the half-life. In addition, for making multispecific antibodies and analogs and methods of composition containing multispecific antibody and the like. It also offers therapeutic uses, multispecific antibodies and antibody analogues for research purposes and diagnostic purposes.

【技术实现步骤摘要】
多特异性抗体、抗体类似物、组合物和方法本申请是申请日为2010年12月3日、专利技术名称为“多特异性抗体、抗体类似物、组合物和方法”的中国专利申请201080055004.X(国际申请号PCT/US2010/058958)的分案申请。相关申请的交叉引用本申请要求2009年12月4日提交的临时美国申请号61/267,006和2010年5月20日提交的临时美国申请号61/346,566的优先权益，这两篇文献的内容因而通过引用的方式完整并入。序列表本申请含有已经以ASCII格式经EFS-Web提交并且因而通过引用方式完整并入的序列表。在2010年11月30日创建的所述ASCII副本命名为P4377R1WO.txt并且大小是53,549比特。专利
本专利技术提供了特异性结合至少两个不同表位的多特异性抗体。还提供了天然抗体的结构性变体(抗体类似物)。另外，提供了具有一系列生物学活性的多特异性抗体和抗体类似物。提供了激动剂及拮抗剂多特异性抗体和激动剂及拮抗剂抗体类似物。还提供了与治疗剂和/或诊断剂缀合的多特异性抗体和抗体类似物，还提供了与意在增加体内半寿期的试剂缀合的多特异性抗体和抗体类似物，与缺少这种试剂的多特异性抗体和抗体类似物相比，所述试剂意在增加体内半寿期。此外，提供了制造多特异性抗体及抗体类似物和包含多特异性抗体及抗体类似物的组合物的方法。也提供了多特异性抗体和抗体类似物的治疗用途、研究用途和诊断用途。背景单克隆抗体已经为治疗多种疾病提供了新疗法，所述疾病包括癌症、免疫学疾病和神经学疾病并且还包括传染病。Newsome,B.W.等人,BrJClinPharmacol66(1):6-19(2008)；Chames,P.等人,BrJPharmacol157(2):220-33(2009)；Dimitrov,D.S.等人,MethodsMolBiol525:1-27，xiii(2009)。这些疗法已经获得成功，至少部分因为单克隆抗体提供与靶蛋白的稳健和强烈相互作用及单一特异性。单克隆抗体相对长的体内半寿期和稳定性允许合乎需要的给药方案，并且细胞介导的毒性可以由抗体的Fc区引起(Tabrizi,M.A.等人,DrugDiscovToday11(1-2):81-8[2006])。在某些情况下，治疗性抗体已经用来通过结合于并中和分泌蛋白和细胞表面蛋白的重要功能区域而阻断细胞信号。目前正在利用单克隆抗体的此类基本特性来设计与传统抗体相比作用机制不同的分子疗法(Dimitrov,D.S.等人,MethodsMolBiol525:1-27，xiii[2009])。某些的此类技术目前正处于临床开发中并且显示有前景的迹象(Chames,P.等人,BrJPharmacol157(2):220-33[2009])。例如，一种方法涉及使用抗体以递送细胞毒性剂至肿瘤的细胞特异靶向法。Carter,P.J.等人,CancerJ14(3):154-69(2008)；Junutula,J.R.等人,NatBiotechnol26(8):925-32(2008)；Senter,P.D.,CurrOpinChemBiol13(3):235-44(2009)。在这种情况下，单克隆抗体特异性引导细胞毒分子至靶细胞，从而在需要高毒性的情况下集结细胞毒部分的高毒性，同时对非靶细胞的影响最小化。此类抗体-药物缀合物允许增加杀死肿瘤细胞的效力，同时维持了使脱靶毒性最小化的给药窗口。另一个实例是递送如含有物质如siRNA的纳米粒子和在粒子表面上包括单克隆抗体用于打靶的功能性复合物。Schiffelers,R.M.等人,NucleicAcidsRes32(19):e149(2004)；Vornlocher,H.P.,TrendsMolMed12(1):1-3(2006)；Davis,M.E.,MolPharm6(3):659-68(2009)。又一个方法使用抗体的双价结构来构建与两个靶同时结合的双特异性分子(Fischer,N.等人,Pathobiology74(1):3-14[2007])。双特异性抗体为增加特异性、拓宽效力和利用不能以传统单克隆抗体实现的新作用机制提供了机会。Drakeman,D.L.,ExpertOpinInvestigDrugs6(9):1169-78(1997)；Kontermann,R.E.,ActaPharmacolSin26(1):1-9(2005)；Marvin,J.S.等人,ActaPharmacolSin26(6):649-58(2005)；Marvin,J.S.等人,CurrOpinDrugDiscovDevel9(2):184-93(2006)；Shen,J.等人,JBiolChem281(16):10706-14(2006)；Chames,P.等人,CurrOpinDrugDiscovDevel12(2):276-83(2009)。用双特异性抗体交联两个不同的受体以抑制信号传导途径已经在众多应用中显示了应用。在一个实例中，将细胞表面酪氨酸磷酸酶招募至IgE受体复合物中以减少磷酸化IgE受体的活性(Jackman等人,J.Biol.Chem.285:20850-20859(2010))。这种方法比阻断配体结合位点更有效，原因是甚至在高浓度配体存在下，也出现双特异性抗体抑制信号传导。见上文。在通过双特异性抗体同时结合两个不同细胞类型上的受体在肿瘤细胞附近实现T细胞活化的情况下，双特异性抗体招募细胞毒T细胞的用途也已经显示出临床可能性。Bargou,R.,E.等人,Science321(5891):974-7(2008)；Shekhar,C.,ChemBiol15(9):877-8(2008)；Baeuerle,P.A.等人,CancerRes69(12):4941-4(2009)。在一种方法中，开发了具有结合FcγRIII的一条臂和与HER2受体结合的另一条臂的双特异性抗体用于治疗过量表达HER2抗原的卵巢肿瘤和乳腺肿瘤。(Hseih-Ma等人CancerResearch52:6832-6839[1992]和Weiner等人CancerResearch53:94-100[1993])。双特异性抗体也可以介导T细胞杀伤。一般，双特异性抗体将T细胞上的CD3复合物与肿瘤相关抗原连接。由连接至抗p185HER2的抗CD3组成的完全人源化的F(ab')2双特异性抗体用来引导T细胞靶向以杀死过量表达HER2受体的肿瘤细胞。Shalaby等人,J.Exp.Med.175(1):217(1992)。双特异性抗体已经在几种早期阶段临床试验中进行测试，取得令人鼓舞的结果。在一个试验中，12位肺癌、卵巢癌或乳腺癌患者用输注活化的T淋巴细胞来治疗，其中所述T淋巴细胞用抗CD3/抗肿瘤(MOC31)双特异性抗体引导靶向。deLeij等人BispecificAntibodiesandTargetedCellularCytotoxicity(双特异性抗体和定向细胞性细胞毒),Romet-Lemonne,Fanger和Segal编著,Lienhart(1991)第249页。被引导靶向的细胞引起肿瘤细胞的明显局部裂解、轻微炎症反应，但是没有本文档来自技高网...

【技术保护点】
合成一组抗体类似物的方法，其包括步骤(i)具有单个游离硫氢基的第一抗体片段与巯基反应性交联剂反应以产生抗体片段‑交联剂部分，(ii)所述抗体片段‑交联剂部分与两个或更多个额外抗体片段的每一者配对，所述每个额外抗体片段具有单个游离硫氢基，以产生所述的抗体类似物组，其中所述抗体片段的每一者从单一亲本抗体获得，和(iii)筛选所述抗体类似物组以获得具有所需活性抗体类似物，其中所述第一抗体片段的游离硫氢基定位在选自以下的位置：轻链的110位置、轻链的205位置、重链的118位置和铰链区中半胱氨酸的位置，并且其中所述两个或更多个额外抗体片段的游离硫氢基各自定位在选自以下的位置：轻链的110位置、轻链的205位置、重链的118位置和铰链区中的半胱氨酸位置，其中两个或更多个额外抗体片段的游离硫氢基位于这些位置的至少两个不同位置，其中残基的编号根据EU编号系统。

【技术特征摘要】
2009.12.04 US 61/267,006;2010.05.20 US 61/346,5661.合成一组抗体类似物的方法，其包括步骤(i)具有单个游离硫氢基的第一抗体片段与巯基反应性交联剂反应以产生抗体片段-交联剂部分，(ii)所述抗体片段-交联剂部分与两个或更多个额外抗体片段的每一者配对，所述每个额外抗体片段具有单个游离硫氢基，以产生所述的抗体类似物组，其中所述抗体片段的每一者从单一亲本抗体获得，和(iii)筛选所述抗体类似物组以获得具有所需活性抗体类似物，其中所述第一抗体片段的游离硫氢基定位在选自以下的位置：轻链的110位置、轻链的205位置、重链的118位置和铰链区中半胱氨酸的位置，并且其中所述两个或更多个额外抗体片段的游离硫氢基各自定位在选自以下的位置：轻链的110位置、轻链的205位置、重链的118位置和铰链区中的半胱氨酸位置，其中两个或更多个额外抗体片段的游离硫氢基位于这些位置的至少两个不同位置，其中残基的编号根据EU编号系统。2.根据权利要求1所述的方法，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·舍尔，R·L·范德伦，
申请(专利权)人：弗·哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH