土木香内酯作为抗血管生成药物的应用制造技术

技术编号:16404168 阅读:73 留言:0更新日期:2017-10-20 19:39
本发明专利技术涉及土木香内酯的一种新用途,即土木香内酯作为抗血管生成药物的应用。其优点表现在:本发明专利技术首次通过CCK‑8法检测HUVEC细胞活力、细胞运动性抑制实验、细胞迁移抑制实验、小管形成抑制实验、体内抗血管生成活性实验等发现,土木香内酯可有效抗血管生成。本发明专利技术首次发现,土木香内酯对MDA‑MB‑231乳腺肿瘤具有抑制作用,具备治疗乳腺癌的前景。本发明专利技术首次通过对VEGFR2及下游信号通路作用的研究发现,土木香内酯可以显著抑制VEGFR2的磷酸化,显著抑制VEGFR2下游信号分子包括PLCγ1,FAK,Src,AKT的磷酸化。

【技术实现步骤摘要】
土木香内酯作为抗血管生成药物的应用
本专利技术涉及医药
,具体地说,是土木香内酯作为抗血管生成药物的应用。
技术介绍
土木香为菊科旋覆花属植物,为多年生草本,其根供药用。在欧洲和中国西藏均有栽培。土木香在欧洲主要用于利尿、祛痰和健胃,在中国则主要用于治疗胃肠炎、支气管炎及结核性腹泻等。研究表明土木香中含有大量倍半萜内酯,其主要成分土木香内酯具有较强的抗菌和消炎作用。而近年来国内外对土木香药理活性的研究发现,土木香内酯类成分有抗肿瘤细胞增殖的作用,并对其抑制肿瘤生长的作用机制进行了研究。土木香内酯(alantolactone)是一种萜类化合物,化学名:3a,5,6,7,8,8a,9,9a-八氢-5,8a-二甲基-3-亚甲基萘并[2,3-b]呋喃-2(3H)-酮,化学式:C15H20O2,分子量:232.32,CAS号:546-43-0。中国专利文献CN102973554A公开了土木香内酯在制备防治肠炎的药物或食品中的应用。中国专利文献CN103505454A公开了土木香内酯作为α-微管蛋白抑制剂的用途。中国专利文献CN104666295A公开了土木香内酯在制备抗微小隐孢子虫药物中的应用。中国专利文献CN103251667A公开了土木香总倍半萜内酯(含有土木香内酯和异土木香内酯,两酯的含量之和为60-90%)在制备防治类风湿关节炎的药物中的应用。中国专利文献CN104771430A公开了土木香总内酯(土木香内酯、异土木香内酯含量占总内酯的90%)在制备治疗肠易激综合症的药物中的应用。中国专利文献CN106496169A、CN106491592A、CN106491594A、CN106491593A等公开了土木香内酯衍生物及其医药领域的用途。但却至今尚未有关于土木香内酯抗血管生成作用的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足,提供土木香内酯的一种新用途。为实现上述目的,本专利技术采取的技术方案是:土木香内酯在制备抑制血管生成药物中的应用。进一步地,所述的血管生成为肿瘤血管新生。进一步地,所述的肿瘤血管新生为肿瘤病变组织的血管新生或肿瘤导致的血管新生。进一步地,所述的肿瘤血管新生为白血病、淋巴瘤或骨髓瘤血液癌症的血管新生。进一步地,所述的血管生成为银屑病病变组织血管新生、Paget’s疾病血管新生、良性血管增生疾病的血管新生、关节炎病变组织的血管新生、动脉粥样硬化病变处的血管新生或新生血管性眼病的血管生成,所述的新生血管性眼病为原发性或继发性新生血管性眼病。土木香内酯作为单一成分或与其它药学上可接受的成分构成组合物在制备抑制血管生成的药物中的应用,所述的其它药学上可接受的成分是与土木香内酯没有拮抗作用的药物,或药学上允许的一种或多种辅料。土木香内酯在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。土木香内酯作为VEGFR2磷酸化的抑制剂的应用。进一步地,所述的药物剂型为胶囊剂、片剂、微囊制剂、注射剂、栓剂、喷雾剂或软膏剂。进一步地,所述的药物的给药方式为注射、口服、吸入式喷雾或透皮给药。本专利技术优点在于:1、本专利技术首次发现了土木香主要成分土木香内酯具有抗血管生成作用,并对其抗肿瘤作用,抗血管生成的作用机制进行了较为系统的详细研究。2、本专利技术首次通过CCK-8法检测HUVEC细胞活力、细胞运动性抑制实验、细胞迁移抑制实验、小管形成抑制实验、体内抗血管生成活性实验等发现,土木香内酯可有效抗血管生成。3、本专利技术首次发现,土木香内酯对雌性BALB/c裸鼠中MDA-MB-231乳腺肿瘤具有抑制作用,具备治疗乳腺肿瘤的前景。4、本专利技术首次通过对VEGFR2及下游信号通路作用的研究发现,土木香内酯可以显著抑制VEGFR2的磷酸化,显著抑制VEGFR2下游信号分子包括PLCγ1,FAK,Src,AKT的磷酸化。附图说明附图1:土木香内酯对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)及MDA-MB-231人乳腺癌细胞细胞活力的影响(增殖的抑制作用)。A,土木香内酯分子结构。B,不同浓度的土木香内酯(1,3,10,30,100μM)分别孵育HUVEC和MDA-MB-231细胞48h后,用CCK8法测定HUVEC及MDA-MB-231的细胞活力。C和D,不同浓度的土木香内酯(1,3,10,30,100μM)作用HUVEC细胞24h后,用Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染法测定HUVEC细胞的活性,拍照并统计结果。附图2:一定浓度的土木香内酯可以抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的运动、迁移和小管生成。A,不同浓度的土木香内酯作用20h后,根据说明用HCSReagentCellMotilityAssayKit试剂盒结合高内涵仪器测定HUVEC的运动性(黑色运动轨迹的面积),柱状图表示相应的统计结果。B,用Transwell小室法考察加药作用8h后,土木香内酯对HUVEC迁移的抑制作用。实验结束拍照后,采用IPP图片处理软件统计照片中的细胞数并用柱状图表示。C,不同浓度的土木香内酯作用10h后,观察Matrigel包被的96孔板中HUVEC形成小管的情况,拍照并统计结果。图2的A~C所附照片中的土木香内酯处理组,土木香内酯的浓度均为30μM。实验结果用mean±SD表示。**p<0.01,***p<0.001与不加药处理的空白对照组相比。附图3:土木香内酯抑制鸡胚绒毛尿囊膜上的血管生成。将浸有不同浓度土木香内酯的无菌滤纸片放置于鸡胚绒毛尿囊膜上,作用48h后,观察鸡胚绒毛尿囊膜上血管形成情况,并用mage-ProPlus6.0软件统计血管长度。实验结果用mean±SD表示。***p<0.001与不加药处理的空白对照组相比。附图4:土木香内酯对雌性BALB/c裸鼠中MDA-MB-231乳腺肿瘤的抑制作用。土木香内酯在对荷瘤裸鼠体重无明显影响,即无明显毒副作用的情况下可以显著抑制BALB/c裸鼠中乳腺肿瘤的生长。实验结果用mean±SD表示,n=5,**p<0.01与不加药处理的空白对照组相比。MDA-MB-231乳腺肿瘤免疫组织化学染色分析。以土木香内酯5mg/kg的剂量对荷瘤裸鼠腹腔隔天给药,连续给药15天,给药结束后处死荷瘤裸鼠,并取出肿瘤组织固定以进行免疫组化染色分析。肿瘤组织微血管密度,TUNEL的代表图片及统计分析,H&E染色,及肿瘤坏死面积的统计分析。分析结果mean±SD表示,n=5,***p<0.001与不加药处理的空白对照组相比。一定浓度的土木香内酯可以降低肿瘤组织中的微血管密度,促进肿瘤组织中肿瘤细胞的凋亡、坏死。附图5:一定浓度(30μM~100μM)的土木香内酯可以显著抑制VEGFR2的磷酸化。不同浓度的土木香内酯作用0.5h后,用100ng/mL的VEGF刺激4min,一定浓度的土木香内酯可以降低VEGFR2的磷酸化程度。一定浓度的土木香内酯可以显著抑制VEGFR2下游信号分子包括PLCγ1,FAK,Src,AKT的磷酸化。不同浓度的土木香内酯作用HUVEC细胞0.5h后,用100ng/mL的VEGF刺激4min,用Westernblot考察土木香内酯对VEGFR2下游信号通路包括PLCγ1,FAK,Src,AKT磷酸化的影响。n=3,*p<0.05,**p<0.本文档来自技高网
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土木香内酯作为抗血管生成药物的应用

【技术保护点】
土木香内酯在制备抑制血管生成药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.土木香内酯在制备抑制血管生成药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的血管生成为肿瘤血管新生。3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述的肿瘤血管新生为肿瘤病变组织的血管新生或肿瘤导致的血管新生。4.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述的肿瘤血管新生为白血病、淋巴瘤或骨髓瘤血液癌症的血管新生。5.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的血管生成为银屑病病变组织血管新生、Paget’s疾病血管新生、良性血管增生疾病的血管新生、关节炎病变组织的血管新生、动脉粥样硬化病变处的血管新生或新生血管性眼病的血管生成,所述的新...

【专利技术属性】
技术研发人员:方超刘亚蓉赵梅陆琴
申请(专利权)人:上海交通大学医学院
类型:发明
国别省市:上海,31

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