The invention discloses a method for the detection of RhD mRNA spliceosome real-time fluorescence quantitative PCR primers, kit and detection method, which belongs to the technical field of biological detection. The invention is based on RhD mRNA splicing sequence design of real time fluorescent quantitative PCR primer combinations, the primer specificity is not affected by other non target gene interference, rapid, efficient and accurate quantitation of RhD mRNA splicing. The application of real-time fluorescent quantitative PCR method for quantitative detection of RhD mRNA splicing, method is simple and accurate, no pollution in the pipeline, without gel electrophoresis, this method can accurately and quantitatively different copy number of individual RhD mRNA splicing. The results show good reproducibility, high sensitivity and strong specificity, and can be used for high-throughput sample detection.
【技术实现步骤摘要】
用于检测RhDmRNA剪接体的PCR引物组合、试剂盒及实时荧光定量检测方法
本专利技术涉及一种用于检测RhDmRNA剪接体的PCR引物组合,同时还涉及包含该引物组合的试剂盒及RhDmRNA剪接体实时荧光定量检测方法,属于生物检测
技术介绍
RH基因的复杂性直接体现在RhD抗原表达的多态性,这被认为是不仅与RhDmRNA水平上的异质性有关还与相关基因外显子的缺失、数量表达等相关。同时LeVanKim等还发现:RHCE基因存在选择性剪接而形成不同形式的基因转录产物[1],同样的有研究者发现在正常的D抗原阳性的个体中存在第7外显子至第9外显子的多种复杂的选择性剪接[2],该剪接体的多态性决定RHD基因表达D抗原的特性。血型基因的遗传背景有明显的种族间差异,是因为不同人种的RhDmRNA基因出现选择性多样剪接出现RhD亚型所造成[3]。mRNA即messengerRNA信使RNA是由DNA经由转录而来,带着相应的遗传讯息,为下一步转译成蛋白质提供所需的讯息。基于RHD基因的多态性,本文建立实时荧光定量的方法对不同个体的RhDmRNA剪接体检测,通过监测RhDmRNA表达的多态性了解不同个体RHD基因的差异。实时荧光定量PCR(real-timequantitativePCR)/QRT-PCR,是指在PCR反应体系中加入荧光标记物,利用荧光信号的积累实时监测整个PCR过程,通过扩增曲线对未知模板进行定量分析的方法。[1]LEVANKC,MOUROI,CHERIF-ZAHARB,etal.Molecularcloningandprimarystructure ...
【技术保护点】
一种用于检测RhD mRNA剪接体的PCR 引物组合物,其特征在于,包括以下三对引物的至少一对:(1)用于扩增全长RhD mRNA剪接体的1 对共2条引物,2条引物的序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:1所示,(2)用于扩增缺失exon‑7的RhD mRNA剪接体的1 对共2条引物,2条引物的序列分别如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示;;(3)用于扩增缺失exon‑7,8,9的RhD mRNA剪接体的1 对共2条引物,2条引物的序列分别如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示。
【技术特征摘要】
1.一种用于检测RhDmRNA剪接体的PCR引物组合物,其特征在于,包括以下三对引物的至少一对:(1)用于扩增全长RhDmRNA剪接体的1对共2条引物,2条引物的序列分别如SEQIDNO:1和SEQIDNO:1所示,(2)用于扩增缺失exon-7的RhDmRNA剪接体的1对共2条引物,2条引物的序列分别如SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示;;(3)用于扩增缺失exon-7,8,9的RhDmRNA剪接体的1对共2条引物,2条引物的序列分别如SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示。2.根据权利要求1所述的用于检测RhDmRNA剪接体的PCR引物组合物,其特征在于,所述引物浓度分别为5pmol/L。3.一种用于检测RhDmRNA剪接体的试剂盒,其特征在于,包括所述的PCR引物组合物。4.根据权利要求3所述的用于检测RhDmRNA剪接体的试剂盒,其特征在于,还包括PCR级H2O,MasterMix。5.一种用于检测RhDmRNA剪接体的实时荧光定量PCR检测方法,其特征在于,包括如下步骤:配制若干个不同浓度标准品;配制PCR反应液,包括上述PCR引物组合物;(3)PCR扩增:将上述PCR反应液与不同浓度的标准品或待测样品分别混合进行PCR扩增;(4)利用不同...
【专利技术属性】
技术研发人员:梁延连,唐雄驰,张印则,吴凡,徐庆萍,
申请(专利权)人:深圳市血液中心,
类型:发明
国别省市:广东,44
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