一株丝枝霉菌株及其生产β-葡萄糖苷酶的方法技术

一株丝枝霉菌株及其生产β-葡萄糖苷酶的方法，属于食品生物【技术领域】。本发明专利技术提供一株新的可产β-葡萄糖苷酶的丝枝霉菌株，该丝枝霉菌株命名为丝枝霉（Aphanocladiumsp.）SK34.001，保藏号为CCTCCNO：M2014090。本发明专利技术对β-葡萄糖苷酶产生菌丝枝霉进行斜面、种子、发酵三级培养；从发酵液中分离纯化得到β-葡萄糖苷酶酶粉。本发明专利技术提供的利用丝枝霉（Aphanocladiumsp.）SK34.001生产β-葡萄糖苷酶的方法，其发酵工艺简单；酶易于提取；酶活高，酶性质稳定；可直接利用麸皮等废弃资源作为该菌株的培养基碳源，节省能源消耗，降低生产成本，具有广阔的市场应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一株丝枝霉菌株及其生产β-葡萄糖苷酶的方法
本专利技术涉及一株丝枝霉菌株及其生产β-葡萄糖苷酶的方法，属于食品生物
。
技术介绍
β -葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.21)，也称β -D-葡萄糖苷酶，它能够水解结合于底物末端非还原性的β-D-葡萄糖苷键，同时释放出葡萄糖和相应的配基。β-葡萄糖苷酶存在于自然界许多植物、昆虫、酵母、霉菌及细菌体内，它参与生物体的糖代谢，对维持生物体正常生理功能起着重要作用。β -葡萄糖苷酶在自然界广泛分布，几乎在所有的生物体中都有存在，但来源不同，其性质各异。该酶对糖苷非糖部分的专一性不强，能水解许多β型的糖苷键。β_葡萄糖苷酶除主要用于降解纤维素以外，还可应用于乳品工业来分解乳糖；催化葡萄糖发生转移反应和缩合反应合成功能性低聚糖，如低聚龙胆糖；作为风味酶应用于(果)酒、茶叶、果汁中起到增香或脱苦作用；另外，β_葡萄糖苷酶还可用来水解大豆异黄酮，制备高活性的大豆异黄酮苷元产品。目前，国内外用于研究和制备葡萄糖苷酶的微生物主要有木霉属{Trichoderma)和曲霉属{Aspergillus)。研究表明,许多曲霉属是生产高活力β _葡萄糖苷酶的优良菌株，且 被认为是不会产生毒素的纤维素酶产生菌，因而研究比较深入。迄今为止，还没有丝枝霉iAphanocladium)作为β -葡萄糖苷酶产生菌的相关研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种丝枝霉菌株及其生产葡萄糖苷酶的方法。本专利技术的技术方案，一株丝枝霉菌株，是本专利技术人等先前从腐殖土壤样品中分离筛选得到的一株可以高产β_葡萄糖苷酶的丝枝霉菌株，分类命名为丝枝霉Uphanocladium sp.)SK34.001，其保藏号为CCTCC NO:M 2014090，保藏单位为中国典型培养物保藏中心。所述菌株的核糖体DNA ITS序列如SEQ ID NO:1所示。所述丝枝霉菌株CCTCC NO:M 2014090生产β -葡萄糖苷酶的方法，步骤如下: (1)斜面培养:取丝枝霉菌株CCTCCNO:Μ 2014090进行斜面培养，采用PDA培养基，各组分以g/L计:马铃薯200，葡萄糖20，琼脂15~20 ;自然pH，115°C下灭菌30min ;培养温度为25~35°C，培养时间3~8天； (2)种子培养:采用牛肉膏蛋白胨培养基，各组分以g/L计:牛肉膏2~5，胰蛋白胨5~8，氯化钠2~5，自然pH，121°C灭菌20min ;在250mL三角瓶装液3(T50mL，将步骤(1)所得的斜面培养液进行种子培养，摇瓶转速15(T200rpm，培养温度25~35°C，培养时间18~24h ； (3)发酵培养:发酵培养基组分以g/L计:麸皮20-40，硫酸铵4飞，磷酸二氢钾2~3，硫酸镁0.3^0.5，氯化钙0.3^0.5，自然pH，121°C灭菌20min ;步骤(2)所得的种子培养液按体积百分数2%~5%接种量接种于发酵培养基中，摇瓶转速15(T200rpm，培养温度25~35°C，培养时间31天； (4)β-葡萄糖苷酶酶粉制备:将步骤(3)制得的发酵液在5000- 10000rpm离心IOlOmin或过滤去除菌体即得发酵上清液，经超滤除去盐和杂蛋白，再经硫酸铵沉淀、透析，最后将透析液进行冷冻干燥即得β-葡萄糖苷酶酶粉。本专利技术中的β-葡萄糖苷酶活性，是通过使酶作用于对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(PNPG)，分解所生成的对硝基苯酚的量而测定。该酶的单位定义为每分钟生成I μ mol对硝基苯酚的酶量。本专利技术的有益效果:本专利技术为首次采用丝枝霉(AphanocIadium)作为β -葡萄糖苷酶的产生菌，该菌株培养方便，发酵工艺简单。其所产酶为胞外酶，易于提取，酶活高，酶性质稳定，可直接利用麸皮等废弃资源作为丝枝霉(Aphanocladiuni)的培养基碳源,节省能源消耗，降低生产成本，具有广阔的市场应用前景。生物材料样品保藏:一株丝枝霉菌株,分类命名为丝枝霉sp.)SK34.001，该菌株已于2014年3月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，地址:中国武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M 2014090。【具体实施方式】实施例1 将丝枝霉菌株(Aphanocladium sp.) SK34.001在下述条件下进行发酵: 斜面培养:采用PDA培养基，各组分以g/L计:马铃薯200，葡萄糖20，琼脂20，自然pH，115°C灭菌30min。培养条件为:培养温度30°C，培养时间5天； 种子培养:采用牛肉膏蛋白胨培养基，各组分以g/L计:牛肉膏2.5，胰蛋白胨5.0，氯化钠2.5，自然pH，121°C灭菌20min。培养条件为:250mL三角瓶装液30mL，摇瓶转速200rpm,培养温度30°C，培养时间24h ； 发酵培养:发酵培养基组分以g/L计:麸皮35，硫酸铵4.0,磷酸二氢钾2.0,硫酸镁0.3，氯化钙0.3，自然pH，121°C灭菌20min。培养条件为:种子培养液按体积百分数2%接种量接种于发酵培养基中，摇瓶转速150rpm，培养温度30°C，培养时间7天，得到发酵液的酶活为5U/mL。实施例2 β-葡萄糖苷酶酶粉制备: 将实施例1制得的发酵液在8000rpm的转速下离心30min去除菌体即得发酵上清液，经超滤除去盐和杂蛋白，再经硫酸铵沉淀、透析，最后将透析液进行冷冻干燥即得葡萄糖苷酶酶粉。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株丝枝霉菌株,其分类命名为丝枝霉sp.)SK34.001,其保藏号为CCTCC NO:M 2014090，保藏单位为中国典型培养物保藏中心。2.根据权利要求1所述丝枝霉菌株,其特征在于:所述菌株的核糖体DNAITS序列如SEQ ID NO:1 所示。3.权利要求1所述丝枝霉菌株CCTCCNO:M 2014090生产β -葡萄糖苷酶的方法，其特征在于步骤如下: (1)斜面培养:取丝枝霉菌株CCTCCNO:Μ 2014090进行斜面培养，采用PDA培养基，各组分以g/L计:马铃薯200，葡萄糖20，琼脂15~20 ；自然pH，115°C下灭菌30min ;培养温度为25~35°C，培养时间3~8天； (2)种子培养:采用牛肉膏蛋白胨培养基，各组分以g/L计:牛肉膏2~5，胰蛋白胨5~8，氯化钠2~5，自然pH，12...

【专利技术属性】
技术研发人员：江波，张涛，周林芳，沐万孟，缪铭，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：