乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶或他们的突变体在制备或筛选治疗肿瘤的药物中的用途制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别是涉及乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶或他们的突变体在制备或筛选治疗肿瘤的药物中的用途。本发明专利技术提供乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶或他们的突变体在制备或筛选治疗肿瘤的药物中的用途，所述治疗肿瘤的药物为口服给药药物。本发明专利技术利用乙酰胆碱酯酶质粒、丁酰胆碱酯酶质粒口服的方式，将乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶基因游离在动物体染色体外进行表达，从而提高了安全性、方便性，并有更好的肿瘤预防和治疗的效果。从体外细胞和体内动物实验可以看到乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶表达对非小细胞肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌、脑胶质瘤、头颈癌、血液瘤等肿瘤细胞株都有抑制的效果。

Use of acetylcholinesterase, cholinesterase, or their mutants in the preparation or screening of drugs for the treatment of tumors

The present invention relates to the field of biotechnology, in particular to the use of acetylcholinesterase, cholinesterase, or their mutants in the preparation or screening of drugs for the treatment of tumors. The present invention provides the use of acetylcholinesterase, cholinesterase, or their mutants in the preparation or screening of drugs for the treatment of tumors, which are orally administered drugs. The invention of acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase by plasmid plasmid oral, acetylcholinesterase, AChE gene expression in Ding Xian free animal chromosomes, so as to improve the safety and convenience, and the prevention and treatment of cancer better. In vitro and in vivo animal experiments can see acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase expression has inhibitory effect on non-small cell lung cancer, gastric cancer, liver cancer, breast cancer, colorectal cancer, prostate cancer, glioma, head and neck cancer, blood tumor cell lines.

【技术实现步骤摘要】
乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶或他们的突变体在制备或筛选治疗肿瘤的药物中的用途
本专利技术涉及生物
，特别是涉及乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶或他们的突变体在制备或筛选治疗肿瘤的药物中的用途，所述治疗肿瘤的药物为口服给药药物。
技术介绍
80年代以来，在世界各地癌症研究领域大量研究表明乙酰胆碱酶酶(AChE)和丁酰胆碱酯酶(BChE)在癌症相关组织中表达量降低或活性降低。在各种癌症中如神经系统，呼吸道，消化道，肝，胰腺相关癌症中都伴随乙酰胆碱酯酶表达量下降或活性降低；生殖泌尿系统如肾，膀胱，宫颈，卵巢，乳房，前列腺癌，皮肤，软组织和血液系统相关肿瘤，AChE或BChE酶活性或其基因结构功能是缺损的；血液肿瘤病人组织中AChE，BChE酶活性越低，病人预后越差。近年研究表明乙酰胆碱除了神经递质的功能外还是一种内源性的生长激素，乙酰胆碱受体的过量表达或激动效应会诱导癌症的发生，这一现象在吸烟引发的癌症中尤其显著，这提示我们乙酰胆碱过分积累或乙酰胆碱受体的过分激动效应会引发癌症。乙酰胆碱酯酶在神经递质乙酰胆碱的循环过程中起到了非常重要的作用，可以迅速水解神经突触中积累的乙酰胆碱从而维持正常的神经传递功能；近代的研究表明乙酰胆碱酯酶参与了众多的细胞功能，如细胞黏附、细胞分化和细胞增殖等；乙酰胆碱酯酶是一种细胞凋亡的标志物，提示乙酰胆碱酯酶可能参与了细胞的凋亡；通过基因敲减的方式降低乙酰胆碱酯酶表达可以增强肿瘤细胞的抗凋亡和增殖活性；乙酰胆碱酯酶的抑制剂可以降低细胞凋亡和促进增殖，这些研究结果表明乙酰胆碱酯酶在细胞的凋亡和增殖过程中起到了非常重要的作用。乙酰胆碱酯酶是一个抑癌基因，在很多癌种细胞系中表达乙酰胆碱酯酶可以抑制癌细胞的增殖并诱导凋亡。乙酰胆碱酯酶参与凋亡小体的形成，2004年，Park等人揭示了乙酰胆碱酯酶在凋亡小体的形成过程中的作用。基于以上事实，2008年沈等人提出乙酰胆碱酯酶表达量降低或活性降低导致乙酰胆碱在不同的组织和器官中积累引起微环境的平衡失调可能是造成癌症发生的原因。因此，通过补充外源性的乙酰胆碱酯酶来调整乙酰胆碱的平衡来达到预防和治疗癌症的方法是科学的和可验证的。乙酰胆碱酯酶价格昂贵，并且只能通过静脉注射；本专利技术提出一种利用壳聚糖纳米颗粒作为表达乙酰胆碱酯酶的载体，通过口服的方式来达到预防和治疗癌症的方法，价格便宜，通过口服的方式提高了病人的依从性。现有技术中有利用病毒将乙酰胆碱酯酶在动物体内进行表达，从而对肿瘤有抑制的作用。但是通过病毒引进外源基因表达，需要将基因在动物体内的染色体内进行重组插入，从而存在破坏动物体自身基因，甚至引发动物致癌基因突变的可能性。同时，病毒作为基因载体，有很多不安全的因素，例如免疫原性、病毒传染性，病毒重组性等问题。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶或他们的突变体在制备或筛选治疗肿瘤的药物中的用途，所述治疗肿瘤的药物为口服给药药物，用于解决现有技术中的问题。为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术第一方面提供乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶或他们的突变体在制备或筛选治疗肿瘤的药物中的用途，所述治疗肿瘤的药物为口服给药药物。乙酰胆碱酯酶在临床上显示出和肿瘤恶性程度有很强的相关性，同时现有技术中也有文章表明在体内增加乙酰胆碱酯酶可以起到预防和治疗肿瘤的效果。但是由于乙酰胆碱酯酶蛋白的极度不稳定，所以体内基因表达的方式成为了唯一可以增加蛋白量的途径。现有技术中通过病毒的方式把乙酰胆碱酯酶基因引入小鼠体内并观察到了肿瘤的抑制。但是，病毒因为其感染性，免疫原性，重组性等问题，被认为不是一个好的基因载体。本专利技术将乙酰胆碱酯酶基因克隆到表达载体中，并通过口服的方式在体内进行表达，提供了一种更安全，方便的给药方式。本专利技术所提供的用途中，治疗一词包括可导致欲求的药学和/或生理效果的防止性(即，预防性)、治愈性或缓和性处置。该效果较佳是指医疗上可减少肿瘤的一种或多种症状或者完全消除肿瘤，或阻滞、延迟肿瘤发生(即肿瘤临床表现前的阶段)和/或降低肿瘤发展或恶化的风险。本专利技术所提供的用途中，口服给药是指药物经口服后被胃肠道吸收入血，通过血液循环到达局部或全身组织，达到治疗疾病的目的。对于口服药物，药物吸收可以始于口腔和胃，但大部分由小肠吸收，药物必须通过小肠壁及肝脏方能进入全身血循环。口服给药药物具有使用简便、费用低廉等优点，通常也最安全。具体的，所述乙酰胆碱酯酶的突变体指与乙酰胆碱酯酶具有80％以上同源性，优选具有90％以上同源性，更优选具有95％以上同源性，且具有乙酰胆碱酯酶的功能、或更优于乙酰胆碱酯酶的功能的多肽。具体的，所述丁酰胆碱酯酶的突变体指与丁酰胆碱酯酶具有80％以上同源性，优选具有90％以上同源性，更优选具有95％以上同源性，且具有丁酰胆碱酯酶的功能、或更优于乙酰胆碱酯酶的功能的多肽。由于天然的乙酰胆碱酯酶的活性在部分肿瘤细胞上没法满足肿瘤的完全消退，所以本领域技术人员可以对乙酰胆碱酯酶进行突变体的筛选，选取活性更高的突变体，以获得更好的肿瘤预防和抑制的效果。本专利技术所提供的用途中，所述用途更具体为乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶或他们的突变体的重组表达载体在制备或筛选治疗肿瘤的药物中的用途。乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶或他们的突变体的重组表达载体为包含有对应的乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶或他们的突变体编码序列的表达载体。所述表达载体可选用各种适用于乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶或他们的突变体的基因表达的表达载体。具体可适用的表达载体包括但不限于带有CMV/PGK/EF-1等启动子、SV40/OriP等真核复制起点、原核复制起点(来源于pUC、pBR322Ori等)的非整合型载体(EpisomalPlasmid)，例如pGS、pRcCMV。本领域技术人员可选择合适的载体，或进一步对现有的载体进行修饰改造，以构建所述乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶或他们的突变体的重组表达载体，从而获得适用于口服给药、并能够达到期望的表达水平的乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶或他们的突变体的重组表达载体。所述期望的表达水平可以是更高的蛋白表达水平，以达到更好的肿瘤抑制效果，也可以是一个相对合理的蛋白表达水平，以针对不同个体给予合理的给药量。具体的，所述肿瘤选自非小细胞肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌、脑胶质瘤、头颈癌、血液瘤等肿瘤。本专利技术第二方面提供一种药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的乙酰胆碱酯酶、乙酰胆碱酯酶突变体、丁酰胆碱酯酶或丁酰胆碱酯酶突变体的重组表达载体，所述药物组合物为口服制剂。治疗有效量对应于治疗肿瘤的目的，具体指一用量在经过适当的给药期间后，能够达到治疗肿瘤的欲求效果。在本文中，若能减少一或多个病征或临床指标即代表该治疗是“有效”的。更具体的，所述治疗肿瘤的药物还包括药学上可接受的载体。具体的，药学上可接受的载体指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在Remington'sPharmaceuticalSciences(MackPub.Co.，N.J.1991)中可找到关于药学上可接受的赋形本文档来自技高网...

【技术保护点】
乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶或他们的突变体在制备或筛选治疗肿瘤的药物中的用途，所述治疗肿瘤的药物为口服给药药物。

【技术特征摘要】
1.乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶或他们的突变体在制备或筛选治疗肿瘤的药物中的用途，所述治疗肿瘤的药物为口服给药药物。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述用途具体为乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶或他们的突变体的重组表达载体在制备或筛选治疗肿瘤的药物中的用途。3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述表达载体选自带有启动子、真核复制起点、原核复制起点的非整合型载体。4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述启动子选自CMV、PGK或EF-1，所述真核复制起点选自SV40或OriP，所述原核复制起点来源于pUC或pBR322Ori。5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肿瘤选自非小细胞肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌、脑胶质瘤、头...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁纪军，沈正萱，牟男，曹跃琼，
申请(专利权)人：上海吉凯基因化学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31