基于离子迁移技术快速检测孔雀石绿残留混合物的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于离子迁移技术快速检测孔雀石绿残留混合物的方法，包括步骤：制备孔雀石绿检测用标准溶液并获得其离子迁移谱谱图、制备待测样品并获得其离子迁移谱图、对比两者定性待测样品是否含有孔雀石绿残留物。本发明专利技术的检测方法简单、方便，快速的定性孔雀石绿残留物，具有快速，高效、检测结果准确等优点，填补了水产品孔雀石绿检测试剂盒的空白。

Rapid determination of malachite green residual mixtures based on ion transfer technique

The invention discloses a mixture comprising the steps of ion transfer method, rapid detection of residues of malachite green: preparation technology based on the detection of malachite green with standard solution and obtain the ion mobility spectrum, preparation of sample and the ion mobility spectrum, comparing the two set of samples to detect malachite green residues. The detection method of the invention is simple, convenient and quick to determine malachite green residue, and has the advantages of fast, high efficiency and accurate detection result, thus filling the blank of the malachite green detection kit of aquatic products.

【技术实现步骤摘要】
基于离子迁移技术快速检测孔雀石绿残留混合物的方法
本专利技术涉及孔雀石绿检测
，尤其涉及一种利用离子迁移谱技术快速检测水产品/水体中的孔雀石绿残留混合物的方法。
技术介绍
离子迁移谱技术（IMS，IonMobilitySpectrometer）是在20世纪70年代初出现的一种新的气相分离和检测技术。离子迁移谱技术借助色谱保留时间的概念，以离子漂移时间的差别来进行离子的分离定性。在早期的研究工作中，IMS装置结构简单和灵敏度高，检出限达ng甚至pg级，引起了人们极大的兴趣。IMS探测极限一般在10-10g左右，探测的时间一般不会超过20s，好的仪器可在10s之内。除此之外，IMS还被用来进行大气污染以及化学工厂中的有毒气体监测，火灾监测，水污染监测等环境监测领域。在食品安全方面，已有文献报道将IMS应用于食品安全方面，如食品储存、检测分析等。但目前尚未应用于孔雀石绿的检测。孔雀石绿（MalachiteGreen）又名碱性绿、严基块绿，是一种带有金属光泽的绿色结晶体，属于三苯甲烷类化合物，易溶于水，溶液呈蓝绿色，溶于甲醇、乙醇和戊醇。过去常被用于制陶业、纺织业、皮革业、食品染色剂和细胞化学染色剂。可用作治理鱼类或鱼卵的寄生虫、真菌或细菌感染，曾在很多国家的水产养殖疾病防治中被广泛使用。在运输过程中和存放池内，为了使磷片受损的鱼延长生命，也常使用孔雀石绿。孔雀石绿具有高毒素、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用，当其进入生物体内，就会加速代谢生产具有更强危害的隐性孔雀石绿。鉴于此，许多国家均将孔雀石绿列为水产养殖禁用药物。我国于2002年5月也将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》（农业部公告193号）中。国家农业部渔业局把孔雀石绿监测列入每年水产品的监控计划，明确严令禁止在所有食用动物中使用。但因其价格低廉，在水霉病防治方面尚无很好的替代品，因此目前仍有单位在继续违规使用。虽国家明令禁止孔雀石绿在水产品中的使用，但对于流通速度较快的生鲜水产品中的孔雀石绿的监管仍缺乏有效的手段，特别是现场快速检测技术的不完善，也是导致孔雀石绿残留情况是目前屡禁不止的原因之一。据文献可知，深圳的水产品有约6%的孔雀石绿的检出率，其中如黄骨鱼、鲈鱼、大头鱼、鲫鱼等鱼类产品是发现孔雀石绿违法添加概率较高的品种。目前孔雀石绿检测方法大致分为精确定量检测和快速定性筛查两大类。定量检测方法主要包括高效液相色谱-紫外可见光检测法（HPLC-UV）、高效液相色谱-（串联）质谱法（HPLC-MS/MS）、高效液相色谱-荧光检测法（HPLC-FLD）等。已有的检测水产品孔雀石绿的国家标准GB/T19857-2005《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》和农业部发布的SC/T3021-2004《水产品中孔雀石绿残留量的测定——液相色谱法》。定量检测方法检测灵敏度高、准确度高，但其繁琐的前处理、冗长的检测周期及高额的检测费用明显不适用于鲜活水产品的日常食品安全监管。目前市售的检测孔雀石绿快速检测方法相对比较成熟，但仍然存在不足之处。孔雀石绿快速定性检测法主要为胶体金试剂盒，因其反应原理极易受基质干扰，这些快检试剂盒仍存在前处理复杂、假阳性率偏高、检测灵敏度低等问题。
技术实现思路
为了克服现有的技术的不足，本专利技术提供一种快速检测水产品/水体中的孔雀石绿残留混合物的方法。本专利技术技术方案如下所述：基于离子迁移技术快速检测孔雀石绿残留混合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、基于孔雀石绿有证标物制备孔雀石绿检测用标准溶液，并将其放入到离子迁移谱中，获得孔雀石绿标准溶液的离子迁移谱谱图；步骤2、制备待测样品，将已匀浆的待测样品至于离心管中，进行快速样品前处理，将其浓缩液放入到离子迁移谱进样器中，获得该待测样品溶液的离子迁移谱图；步骤3、将待测样品溶液的离子迁移谱谱图和标准使用液的离子迁移谱图进行比较，定性待测样品是否含有孔雀石绿残留物。根据上述方案的本专利技术，其特征在于，所述步骤1中制备预置孔雀石绿检测用标准溶液包括：称取预置量的孔雀石绿固体标准用品，用有机溶剂乙腈稀释并储存；使用时将储存的孔雀石绿稀释液用水/乙腈稀释成孔雀石绿检测用标准溶液备用上机检测；以其标准溶液相对离子迁移率作为参照定性待测样品中孔雀石绿残留物。根据上述方案的本专利技术，其特征在于，所述孔雀石绿包括显性孔雀石绿和隐色孔雀石绿。根据上述方案的本专利技术，其特征在于，所述步骤2中制备水产养殖水样待测样品前处理包括：取上清水样置于离心管中进行乙腈和二氯甲烷液液萃取后，浓缩后的浓缩液过0.22μm水相微孔滤膜，收集滤液；取上清水样直接过0.22μm水相微孔滤膜，收集滤液，分别作为待测样品溶液。根据上述方案的本专利技术，其特征在于，所述步骤2中制备水产品样品待测样品前处理包括：利用快速样品前处理技术净化样品提纯，浓缩后浓缩液过0.22μm水相微孔滤膜，收集滤液作为待测样品溶液。更进一步的，所述浓缩法为氮吹法。更进一步的，所述净化法为QuEChERS法。更进一步的，将酸性氧化铝：丙磺酸以2:1比例配比去除芳香族和脂肪族化合物杂质，加入25mL洗脱液，震荡混匀10min，并进行9500r/min离心分离5min。更进一步的，所述洗脱液的制备过程为：在13.5mL的乙酸乙酯中加入1.5mL氨水，再加入10mL的甲醇，震荡混匀。根据上述方案的本专利技术，其有益效果在于，本专利技术采用农产品快速样品前处理技术，相比于同等作用的固相萃取柱技术，更节约成本，节省时间，30min即可完成样品前处理技术，通过使用离子迁移谱技术的检测方法，简单、方便快速的定性孔雀石绿残留物，具有快速，高效、检测结果准确等优点；同时本专利技术前处理过程，引进固液萃取、液液萃取等简单、低成本、易操作、易推广的净化方法，属于高效环保型高通量快速定性筛查方法，极大的提高孔雀石绿的快速检测效率，填补了水产品孔雀石绿检测试剂盒的空白。附图说明图1为本专利技术0.1ug/ml的显性孔雀石绿(MG)离子迁移谱图。图2为本专利技术0.1ug/ml的隐色孔雀石绿(LMG)离子迁移谱图。具体实施方式下面结合附图以及实施方式对本专利技术进行进一步的描述：如图1-2所示，一种利用离子迁移谱技术检测水产品/水体中孔雀石绿残留混合物的方法，该方法包括：1、基于孔雀石绿有证标物制备孔雀石绿检测用标准溶液，并将其放入到离子迁移谱中，获得孔雀石绿标准溶液的离子迁移谱谱图。步骤1、分别准确称取一定量的显性孔雀石绿和隐色孔雀石绿标准品，用乙腈稀释至容量瓶中，配制显性孔雀石绿和隐色孔雀石绿标准储备液，并贮存在密闭的棕色标准品瓶中，在使用时分别用乙腈/水稀释成1.0ug/mL的显性孔雀石绿和隐色孔雀石绿标准使用液，并配置成0.1ug/mL显性孔雀石绿和隐色孔雀石绿混合实验用标准溶液。步骤2、用20μL微量移液器吸取孔雀石绿混合实验用标准溶液5μL，注入离子迁移谱仪中，以相对离子迁移率K0，即图2中的K0定性，绘制显性孔雀石绿、隐色孔雀石绿特征峰。使用的离子迁移谱仪测试参数为：离子源：非放射性电离源工作电压：220V/50HZ气源（独立气源）：干燥空气迁移电场强度：（200-500）V/cm迁移管温度：200℃进样量：5μL进样温度：（170-250）℃测试时间：70s2、制备待本文档来自技高网...

【技术保护点】
基于离子迁移技术快速检测孔雀石绿残留混合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、基于孔雀石绿有证标物制备孔雀石绿检测用标准溶液，并将其放入到离子迁移谱中，获得孔雀石绿标准溶液的离子迁移谱谱图；步骤2、制备待测样品，将已匀浆的待测样品至于离心管中，进行快速样品前处理，将其浓缩液放入到离子迁移谱进样器中，获得该待测样品溶液的离子迁移谱图；步骤3、将待测样品溶液的离子迁移谱谱图和标准使用液的离子迁移谱图进行比较，定性待测样品是否含有孔雀石绿残留物。

【技术特征摘要】
1.基于离子迁移技术快速检测孔雀石绿残留混合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、基于孔雀石绿有证标物制备孔雀石绿检测用标准溶液，并将其放入到离子迁移谱中，获得孔雀石绿标准溶液的离子迁移谱谱图；步骤2、制备待测样品，将已匀浆的待测样品至于离心管中，进行快速样品前处理，将其浓缩液放入到离子迁移谱进样器中，获得该待测样品溶液的离子迁移谱图；步骤3、将待测样品溶液的离子迁移谱谱图和标准使用液的离子迁移谱图进行比较，定性待测样品是否含有孔雀石绿残留物。2.根据权利要求1所述的基于离子迁移技术快速检测孔雀石绿残留物混合的方法，其特征在于，所述步骤1中制备预置孔雀石绿检测用标准溶液包括：称取预置量的孔雀石绿固体标准用品，用有机溶剂乙腈稀释并储存；使用时将储存的孔雀石绿稀释液用水/乙腈稀释成孔雀石绿检测用标准溶液备用上机检测；以其标准溶液相对离子迁移率作为参照定性待测样品中孔雀石绿残留物。3.根据权利要求2所述的基于离子迁移技术快速检测孔雀石绿残留物混合的方法，其特征在于，所述孔雀石绿包括显性孔雀石绿和隐色孔雀石绿。4.根据权利要求1所述的基于离子迁移技术快速检测孔雀石绿残留混合物的方法，其特征在于，所述步骤2中制备水产养殖水样待...

【专利技术属性】
技术研发人员：储成群，苑婷婷，姜学涯，李金燕，包颖，李俊，肖毅美，张芳，姚少雄，黄御树，
申请(专利权)人：深圳凯吉星农产品检测认证有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44