基于离子迁移技术快速检测结晶紫残留混合物的方法技术

本发明专利技术公开了基于离子迁移技术快速检测结晶紫残留混合物的方法，包括步骤制备预置结晶紫检测用标准溶液并获得结晶紫标准溶液的离子迁移谱谱图、制备待测样品并获得该待测样品溶液的离子迁移谱图、两者对比定性其是否含有结晶紫残留物。本发明专利技术检测方法简单、方便，快速的定性结晶紫残留物，具有快速，高效、检测结果准确等优点，填补了水产品结晶紫快速检测技术领域的空白。

Method for rapidly detecting residual mixture of crystal violet based on ion migration technology

The present invention discloses ion mobility rapid detection method for the residual mixture crystallization technology based on UV, comprising the steps of preparing a preset crystal violet detected by standard solution and standard solution of crystal violet ion mobility spectrum, preparation of sample and the sample solution to be measured by ion mobility spectrum, both the qualitative comparison whether containing crystal violet residues. The detection method of the invention is simple and convenient, and has the advantages of fast and high efficiency, accurate detection result and the like, and fills the blank of the fast detection technique of the crystal violet of aquatic products.

【技术实现步骤摘要】
基于离子迁移技术快速检测结晶紫残留混合物的方法
本专利技术涉及食品中结晶紫残留物检测
，尤其涉及一种利用离子迁移谱技术快速检测水产品/水体中的结晶紫残留混合物的方法。
技术介绍
离子迁移谱技术（IMS，IonMobilitySpectrometer）是在20世纪70年代初出现的一种新的气相分离和检测技术。离子迁移谱技术借助色谱保留时间的概念，以离子漂移时间的差别来进行离子的分离定性。在早期的研究工作中，IMS装置结构简单和灵敏度高，检出限达ng甚至pg级，引起了人们极大的兴趣。IMS探测极限一般在10-10g左右，探测的时间一般不会超过20s，好的仪器可在10s之内。除此之外，IMS还被用来进行大气污染以及化学工厂中的有毒气体监测，火灾监测，水污染监测等环境监测领域。在食品安全方面，已有文献报道将IMS应用于食品安全方面，如食品储存、检测分析等。但目前尚未应用于结晶紫的检测。结晶紫（Crystalviolet）又名甲基紫10B、甲紫、六甲基紫、六甲基玫苯胺盐酸盐、盐基紫3，绿色带有金属光泽结晶或深绿色结晶性粉末，为副品红的六甲基衍生物，含有少量四、五甲基的衍生物，是一种碱性三苯甲烷紫色染料，紫药水的主要组成成分，溶于水和乙醇，溶液呈紫色，极易溶于乙醇。于浓硫酸中呈红黄色，稀释后呈暗绿光黄色，然后转变成蓝和紫色，微溶于乙醚。结晶紫化合物对鱼类的水霉病、寄生虫病等有很好的疗效，长期以来许多国家曾将其作为水产养殖业的杀菌剂。他们在鱼体内代谢为结晶紫和无色结晶紫的混合物，由于其母体化合物和代谢物均具有潜在的之致癌、致畸、致突变等副作用，20世纪90年代以来许多国家都将其列为水产养殖的禁用药物，但是由于其抗菌效果好、价格便宜，不少违法商家仍在继续使用。我国目前尚无明令要求禁止在食品中使用结晶紫作为杀菌剂，仅发现一份国家卫计委办公厅关于《食品中可能违法添加的非食用物质名单》征求意见稿国卫办食品函〔2014〕843号中规定在流通、餐饮环节的鱼类严禁违法添加结晶紫物质。现国家农业部渔业局也并未把结晶紫列入每年水产品的监控计划中，但据相关文献及市场调研了解到，目前有很多不良商家利用结晶紫替代孔雀石绿作为杀菌剂在水产的养殖、运输等环节使用，故目前生鲜水产品中结晶紫的残留监控存在较大风险漏洞。虽然国家未明令禁止结晶紫在水产品中的使用，但随着政府对于孔雀石绿的监管力度的增加，一些不法商户为规避政府监管，大量启用结晶紫作为替代物。目前对于流通速度较快的生鲜水产品中的结晶紫残留量仍缺乏快速有效的监管手段，市面上尚未发现在售的现场快速检测结晶紫的试剂盒，也是导致结晶紫残留情况愈加严重的原因之一。据文献可知，深圳的水产品有约0.8%的结晶紫检出率，而根据实际调研，实际结晶紫的违法添加情况已远远高于上述数据，检出率甚至已远远超过孔雀石绿的检出率。目前结晶紫混合物的检测方法仅有精确定量检测手段，主要涉及高效液相色谱-紫外可见光检测法（HPLC-UV）、高效液相色谱-（串联）质谱法（HPLC-MS/MS）、高效液相色谱-荧光检测法（HPLC-FLD）等。已有的检测水产品孔雀石绿及结晶紫的国家标准GB/T20361-2006《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色谱荧光检测法》和农业部发布的SN/T1768-2006《水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢产物的快速测定方法》。无论是液相色谱法还是质谱方法均属于定量检测方法，其具有检测灵敏度高、准确度高等特点，但其繁琐的前处理、冗长的检测周期及高额的检测费用明显不适用于鲜活水产品的日常食品安全监管。目前尚无市售的检测结晶紫快速检测方法。因此，针对结晶紫混合物（显性结晶紫和无色结晶紫）快速、准确、定性检测方法仍需完善。
技术实现思路
为了克服现有的技术的不足，本专利技术提供一种基于IMS技术的快速、准确、简便的检测水产品/水体中的结晶紫残留混合物的方法。本专利技术技术方案如下所述：基于离子迁移技术快速检测结晶紫残留混合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、基于结晶紫有证标物制备预置结晶紫检测用标准溶液，并将其放入到离子迁移谱中，获得结晶紫标准溶液的离子迁移谱谱图；步骤2、制备待测样品，将已匀浆的待测样品至于离心管中，对样品进行快速净化样品前处理，将待测样品溶液放入到离子迁移谱进样器中，获得该待测样品溶液的离子迁移谱图；步骤3、将待测样品溶液的离子迁移谱谱图和标准使用液的离子迁移谱图进行比较，定性待测样品是否含有结晶紫残留物。根据上述方案的本专利技术，其特征在于，所述步骤1中结晶紫检测用标准溶液包括显性结晶紫检测用标准溶液和无色结晶紫检测用标准溶液。根据上述方案的本专利技术，其特征在于，所述步骤1中制备预置结晶紫检测用标准溶液包括：称取预置量的结晶紫固体标准用品，用有机溶剂乙醇稀释并储存；使用时将储存的结晶紫稀释液用水/乙醇稀释成结晶紫检测用标准溶液备用上机检测；以其标准溶液相对离子迁移率作为参照定性待测样品中结晶紫残留物。根据上述方案的本专利技术，其特征在于，所述步骤2中制备水产养殖水样的待测样品前处理包括：取上清水样置于离心管中进行乙醇和二氯甲烷液液萃取后，浓缩后的浓缩液过0.22μm水相微孔滤膜，收集滤液；取上清水样直接过0.22μm水相微孔滤膜，收集滤液，分别作为待测样品溶液。根据上述方案的本专利技术，其特征在于，所述步骤2中制备水产品样品的待测样品前处理包括：对样品进行净化、提纯，取上清液浓缩后，浓缩液过0.22μm有机相微孔滤膜，收集滤液作为待测样品溶液。更进一步的，所述浓缩方法为氮吹法。更进一步的，所述提纯方法为QuEChERS法。更进一步的，在提纯过程中，将酸性氧化铝：丙磺酸以3:2比例配比去除芳香族和脂肪族化合物，将杂质，加入25mL洗脱液，震荡混匀10min，并进行9500r/min离心分离5min。更进一步的，所述洗脱液的制备过程为：在13.5mL的乙酸乙酯中加入1.5mL氨水，再加入10mL的甲醇震荡混匀。根据上述方案的本专利技术，其有益效果在于，本专利技术通过使用离子迁移谱技术的检测方法，简单、方便快速的定性结晶紫残留物，具有快速，高效、检测结果准确等优点；同时本专利技术前处理过程，引进固液萃取、液液萃取等简单、低成本、易操作、易推广的净化方法，属于高效环保型高通量快速定性筛查方法，极大的提高结晶紫的快速检测效率，填补了水产品结晶紫检测试剂盒的空白。附图说明图1为本专利技术5ug/ml的显性结晶紫(CV)离子迁移谱图。图2为本专利技术1ug/ml的隐色结晶紫(LCV)离子迁移谱图。具体实施方式下面结合附图以及实施方式对本专利技术进行进一步的描述：如图1-2所示，一种利用离子迁移谱技术检测水产品/水体中结晶紫残留混合物的方法，该方法包括：1、基于结晶紫有证标物制备结晶紫检测用标准溶液，并将其放入到离子迁移谱中，获得结晶紫标准溶液的离子迁移谱谱图。在建立结晶紫（包括显性结晶紫和无色结晶紫）实验用标准溶液时，需要如下步骤：步骤1、分别准确称取一定量的显性结晶紫和无色结晶紫标准品，用乙醇稀释至容量瓶中，配制显性结晶紫和无色结晶紫标准储备液，并贮存在密闭的棕色标准品瓶中，在使用时分别用乙醇/水稀释成1.0ug/mL的显性结晶紫和5ug/mL无色结晶紫实验用标准使用液；步骤2、用20μL微量移液器吸取结晶紫混本文档来自技高网...

【技术保护点】
基于离子迁移技术快速检测结晶紫残留混合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、基于结晶紫有证标物制备预置结晶紫检测用标准溶液，并将其放入到离子迁移谱中，获得结晶紫标准溶液的离子迁移谱谱图；步骤2、制备待测样品，将已匀浆的待测样品至于离心管中，对样品进行快速净化样品前处理，将待测样品溶液放入到离子迁移谱进样器中，获得该待测样品溶液的离子迁移谱图；步骤3、将待测样品溶液的离子迁移谱谱图和标准使用液的离子迁移谱图进行比较，定性待测样品是否含有结晶紫残留物。

【技术特征摘要】
1.基于离子迁移技术快速检测结晶紫残留混合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、基于结晶紫有证标物制备预置结晶紫检测用标准溶液，并将其放入到离子迁移谱中，获得结晶紫标准溶液的离子迁移谱谱图；步骤2、制备待测样品，将已匀浆的待测样品至于离心管中，对样品进行快速净化样品前处理，将待测样品溶液放入到离子迁移谱进样器中，获得该待测样品溶液的离子迁移谱图；步骤3、将待测样品溶液的离子迁移谱谱图和标准使用液的离子迁移谱图进行比较，定性待测样品是否含有结晶紫残留物。2.根据权利要求1所述的基于离子迁移技术快速检测结晶紫残留混合物的方法，其特征在于，所述步骤1中结晶紫检测用标准溶液包括显性结晶紫检测用标准溶液和无色结晶紫检测用标准溶液。3.根据权利要求1所述的基于离子迁移技术快速检测结晶紫残留混合物的方法，其特征在于，所述步骤1中制备预置结晶紫检测用标准溶液包括：称取预置量的结晶紫固体标准用品，用有机溶剂乙醇稀释并储存；使用时将储存的结晶紫稀释液用水/乙醇稀释成结晶紫检测用标准溶液备用上机检测；以其标准溶液相对离子迁移率作为参照定性待测样品中结晶紫残留物。4.根据权利要求1所述的基于离子迁移技术快速检测结晶紫残留混合物的方法，其特征在于，所述步骤2中制备水产...

【专利技术属性】
技术研发人员：苑婷婷，刘振，易绍庭，包颖，李俊，储成群，吴荣顺，曾令宣，尹世军，
申请(专利权)人：深圳凯吉星农产品检测认证有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44