幽门螺杆菌胶体金分型检测试纸条及试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种幽门螺杆菌的胶体金分型检测试纸条，所述试纸条包括支撑板，在所述支撑板的表面从加样端依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸收垫这四个部件，所述金标垫上包含胶体金标记抗人IgG的Fc段单抗；所述硝酸纤维素膜上设有包被有HP细胞毒(CagA)抗原、HP空泡毒(VacA)抗原、HP尿素酶亚单位A蛋白抗原和HP尿素酶亚单位B蛋白抗原的四条检测线和质控线，且上述的四条检测线及质控线相互都不重合。本发明专利技术的试纸条属于非侵入性检测技术，能同时检测尿素酶A、尿素酶B、Cag/A和Vac/A 4种幽门螺杆菌抗体，采用国际上公认的标准幽门螺杆菌菌株和质控血清，确保了检测的可靠性。该试纸条操作方法简单、快速、大众化，具有应用前景和潜在的社会价值。

【技术实现步骤摘要】
幽门螺杆菌胶体金分型检测试纸条及试剂盒
本专利技术涉及医学生物
，具体涉及一种致病菌的检测方法，特别涉及致病性幽门螺杆菌的胶体金分型检测试纸条。
技术介绍
现已证实幽门螺杆菌是导致胃溃疡、胃癌等严重消化道疾病的重要致病因素。目前幽门螺杆菌感染率已经达到50％左右。但因为幽门螺杆菌致病性不一致(分为低毒型和高毒型)，并不是所有的幽门螺杆菌感染均需要进行治疗。故诊断出是否被幽门螺杆菌感染以及被何种幽门螺杆菌感染对临床治疗具有重要的指导意义。当前，诊断幽门螺杆菌感染的方法大致分为侵入性和非侵入性两类。1侵入性：1)经胃镜取胃粘膜做幽门螺杆菌培养：尽管幽门螺杆菌培养法最为可靠，视为幽门螺杆菌诊断的金标准，但敏感性不高。加上幽门螺杆菌是微需氧菌，培养需要一定的设备，故一般医院不适其为常规。2)快速尿素酶和组织学检查：两者的联合应用，大大提高了诊断幽门螺杆菌的阳性率，但仅仅能够判断是否由于幽门螺杆菌感染，不能进一步进行分型。检测结果受取材部位，组织块大小，细菌量，检测试剂pH值，观察时间，环境温度等因素影响。组织学检测耗时长，免疫组织化学费用高。2非侵入性：1)细菌培养：复杂，耗时，需要一定实验条件，标本转送培养需专门的转送液并低温保存。2)血清抗幽门螺杆菌抗体检测：检测的抗体是IgG，阳性仅表明过去或现在感染幽门螺杆菌，幽门螺杆菌根除后血清抗体尤其是细胞毒Cag/A抗体可以维持很久，长达数年，因此该结果不能及时判断幽门螺杆菌治疗后的情况。3)碳13/碳14呼气试验：敏感性、特异性虽高，但是碳13呼气试验使用了稳定性同位素，检测需要特殊的质谱仪检测，耗时长，费用高，基层医院不适宜推广碳14呼气试验对人体有放射性，孕妇和小儿慎用。此外，这种呼气试验当检测值处于临界值附近时，结果不可靠。另外，以上方法皆不能分型。可见，现有的主流检测幽门螺杆菌技术尚停留在通过尿素酶试验检测有无幽门螺杆菌感染水平，分型产品欠缺。为解决上述技术问题，本专利技术由此而来。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术中检测幽门螺杆菌技术的缺陷，提供一种简便、高效可以分型检测幽门螺杆菌致病基因的试纸条其试剂盒。为解决上述问题，本专利技术第一方面提供的技术方案是:一种幽门螺杆菌的胶体金分型检测试纸条，所述试纸条包括支撑板，在所述支撑板的表面从加样端依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸收垫这四个部件，所述金标垫上包含胶体金标记抗人IgG的Fc段单抗；所述硝酸纤维素膜上设有包被有HP细胞毒(CagA)抗原、HP空泡毒(VacA)抗原、HP尿素酶亚单位A蛋白抗原和HP尿素酶亚单位B蛋白抗原的四条检测线和质控线，且上述的四条检测线及质控线相互都不重合。且优选，这四条检测线和质控线相互平行。优选地，所述硝酸纤维素膜上设有的四条检测线距离加样端较近一侧，质控线距离加样端较远一侧。优选地，所述质控线上包被有兔抗鼠IgG抗体。优选地，所述HP细胞毒(CagA)抗原对应的基因序列为SeqIDNo.1。优选地，所述HP空泡毒(VacA)抗原对应的基因序列为SeqIDNo.2。优选地，所述HP尿素酶亚单位A蛋白抗原对应的基因序列为SeqIDNo.3。优选地，所述HP尿素酶亚单位B蛋白抗原对应的基因序列为SeqIDNo.4。优选地，所述所述硝酸纤维素膜上设置的四条检测线从加样端依次排列为：包被有HP细胞毒(CagA)抗原的检测线、包被有HP空泡毒(VacA)抗原的检测线、包被有HP尿素酶亚单位B蛋白抗原的检测线和包被有HP尿素酶亚单位A蛋白抗原的检测线。且各个检测线之间间距为3～8mm；最后一条检测线和质控线的间距为3～10mm。优选地，样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸收垫这四个部件，相邻两部件间边缘重叠。金标垫表面涂布或嵌有牛血清白蛋白、吐温20和蔗糖；样品垫表面涂布或嵌有牛血清白蛋白、吐温20和蔗糖。其中，在表面上涂布或嵌有可以采用浸泡后再干燥来进行。优选，浸泡在2％牛血清白蛋白(BSA)、l％Tween-20、2.5％蔗糖、0.05％NaN3、0.01MpH7.2PB溶液中。本专利技术还提供一种幽门螺杆菌的胶体金分型检测试盒，其保护有上述的幽门螺杆菌的胶体金分型检测试纸条。胶体金法是以胶体金作为示踪标记物，应用于抗原抗体的一种新型免疫标记技术，有其独特的优点。基本原理：胶体金是由氯金酸在还原剂如枸橼酸纳、鞣酸等作用下，聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用而成为一种稳定的胶体状态，形成一种带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金能稳定又迅速地吸附蛋白质，而蛋白质的生物活性无明显改变。它可以作为探针进行细胞表面和细胞内多糖、蛋白质、多肽、抗原、激素、核酸等生物大分子的精确定位，也可以用于日常的免疫诊断，进行免疫组织化学定位，由于它不存在内源酶干扰及放射性同位素污染的问题，且利用不同颗粒大小的胶体金还可以作双重甚至多重标记，使定位更加精确。因此在临床诊断及药物检测等方面的应用已受到广泛的重视，也已成为继荧光素、酶、同位素及乳胶标记技术之后的一种新型免疫标记技术。它具备简单、快速、准确及无污染等优点。本项目的快速检测试纸条采用检测抗体分型的胶体金法，通过生物工程技术设计出不同幽门螺杆菌抗原，将其固定在醋酸纤维膜上，检测时根据幽门螺杆菌抗体种类的不同，判断细菌抗体类型，结果可预测疾病的严重程度及转归，为临床是否及早采取干预提供指导。该试纸条属于非侵入性检测技术，能同时检测尿素酶A、尿素酶B、Cag/A和Vac/A4种幽门螺杆菌抗体，采用国际上公认的标准幽门螺杆菌菌株和质控血清，确保了检测的可靠性。该试纸条操作方法简单、快速、大众化，具有应用前景和潜在的社会价值。综上所述，国内外尚无免疫胶体金法快速分型检测幽门螺杆菌试剂，本项目已经具备实验室产品，且经过了初步临床试验。可见，本项目可行性强。而本项目主要是通过基因工程获得优化的抗原表位，对样本中的多种抗体进行检测，从而达到分型检测的目的。与现有方法比较，具有样本获取容易、易于操作、检测时间短、敏感度高、特异性强和成本较低等的特点。本项目产品仅仅需要2-5分钟。实现从加样到检验结果的一步、快速、简捷而精准，首次实现集分型与检测于一体，这将极大地满足客户的需求，同时检测成本比其它试剂低廉，而且能够实现患者自我检测。附图说明图1是本专利技术一实施例的检测试纸条的检测线和质控线排列示意图。其中，1为包被有HPCagA抗原的检测线，2为包被有HPVacA抗原的检测线，3为包被有HPUreB蛋白抗原的检测线，4为包被有HPUreA蛋白抗原的检测线，5为质控线。图2为本专利技术一实施例的幽门螺杆菌的胶体金分型检测试纸条示意图。具体实施方式以下结合具体实施例对上述方案做进一步说明。应理解，这些实施例是用于说明本专利技术而不限于限制本专利技术的范围。实施例中采用的实施条件可以根据具体厂家的条件做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。介绍和概述本专利技术通过举例而非给出限制的方式来进行说明。应注意的是，在本公开文件中所述的“一”或“一种”实施方式未必是指同一种具体实施方式，而是指至少有一种。下文将描述本专利技术的各个方面。然而，对于本领域中的技术人员显而易见的是，可根据本专利技术的仅一些或所有方面来实施本专利技术。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种幽门螺杆菌的胶体金分型检测试纸条，所述试纸条包括支撑板，在所述支撑板的表面从加样端依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸收垫这四个部件，所述金标垫上包含胶体金标记抗人IgG的Fc段单抗；所述硝酸纤维素膜上设有包被有HP细胞毒抗原、HP空泡毒抗原、HP尿素酶亚单位A蛋白抗原和HP尿素酶亚单位B蛋白抗原的四条检测线和质控线，且上述的四条检测线及质控线相互都不重合。

【技术特征摘要】
1.一种幽门螺杆菌的胶体金分型检测试纸条，所述试纸条包括支撑板，在所述支撑板的表面从加样端依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸收垫这四个部件，所述金标垫上包含胶体金标记抗人IgG的Fc段单抗；所述硝酸纤维素膜上设有包被有HP细胞毒抗原、HP空泡毒抗原、HP尿素酶亚单位A蛋白抗原和HP尿素酶亚单位B蛋白抗原的四条检测线和质控线，且上述的四条检测线及质控线相互都不重合。2.根据权利要求1所述的分型检测试纸条，其特征在于，所述质控线上包被有兔抗鼠IgG抗体。3.根据权利要求1所述的分型检测试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上设有的四条检测线距离加样端较近一侧，质控线距离加样端较远一侧。4.根据权利要求1所述的分型检测试纸条，其特征在于，所述HP细胞毒抗原对应的基因序列为SeqIDNo.1。5.根据权利要求1所述的分型检测试纸条，其特征在于，所述HP空泡毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙明宽，蔡长春，贾乙，
申请(专利权)人：蔡长春，孙明宽，贾乙，
类型：发明
国别省市：江西,36