【技术实现步骤摘要】
人表皮生长因子受体Her-2/neu定量检测试剂盒及其制备方法与应用
本专利技术属于医药生物类免疫检测试剂领域,具体涉及一种人表皮生长因子受体Her-2/neu定量检测试剂盒及其制备方法与应用,更具体地说,是涉及一种基于磁微粒分离化学发光法定量检测肿瘤标志物人表皮生长因子受体Her-2/neu的试剂盒及其制备方法,以及应用该试剂盒定量检测肿瘤标志物人表皮生长因子受体Her-2/neu的方法。
技术介绍
人表皮生长因子受体Her-2/neu基因是一种最初在化学物质诱发的大鼠神经母细胞瘤和胶质母细胞瘤的DNA中被发现的原癌基因,也称为c-erB2,其由922个腺嘌呤、1,382个胞嘧啶、1,346个鸟嘌呤和880个胸腺嘧啶组成,位于人染色体17q21上,编码相对分子量为185kDa的跨膜糖蛋白(p185),由1255个氨基酸组成,720-987位属于酪氨酸激酶区。Her-2/neu蛋白是具有酪氨酸蛋白激酶活性跨膜糖蛋白,是EGFR家族成员之一。Her-2/neu基因属于一种胞内具有酪氨酸激酶活性的细胞表面受体家族,且结构上与表皮生长因子受体相关(erbB-1)。Her-2/neu蛋白由胞外的配体结合区、单链跨膜区及胞内的蛋白酪氨酸激酶区三部分组成,由于目前尚未发现能与Her-2/neu蛋白直接结合的配体。其主要通过与家族中其他成员包括EGFR(HERl/erbBI),HER3/erbB3,HER4/erbB4形成异二聚体而与各自的配体结合。Her-2/neu蛋白常为异二聚体首选伴侣,且活性常强于其它异二聚体。当与配体结合后,主要通过引起受体二聚化及胞浆内酪氨酸 ...
【技术保护点】
一种人表皮生长因子受体Her‑2/neu定量检测试剂盒,该试剂盒包括以下试剂组分:校准品、磁分离试剂、酶反应物、稳定增强剂以及化学发光底物;其中:所述校准品是按照以下方法配制得到的:将人表皮生长因子受体Her‑2/neu抗原溶解于含非离子表面活性剂的蛋白缓冲液中配制得到校准品;其中,所述非离子表面活性剂选自Tween 20、Triton X 100、Bronidox中的一种或多种,非离子表面活性剂在蛋白缓冲液中的浓度为0.01%~0.5%;所述磁分离试剂是按照以下方法制备得到的:将链霉亲和素和磁微粒偶联制得链霉亲和素磁微粒,利用长臂生物素标记人表皮生长因子受体Her‑2/neu捕获抗体制得生物素化抗体,然后将生物素化抗体与链霉亲和素磁微粒免疫固定,制得磁分离试剂;所述酶反应物包括碱性磷酸酶标记的人表皮生长因子受体Her‑2/neu示踪抗体;所述稳定增强剂包括MAK33和抗异嗜性抗体干扰的多组分免疫复合物,所述MAK33在稳定增强剂中的终浓度为80~120μg/ml;所述多组分免疫复合物是按照以下方法制备得到的:新生牛血清、小鼠血清、绵羊血清按1:1.5~2.5:0.4~0.6的体积比混 ...
【技术特征摘要】
1.一种人表皮生长因子受体Her-2/neu定量检测试剂盒,该试剂盒包括以下试剂组分:校准品、磁分离试剂、酶反应物、稳定增强剂以及化学发光底物;其中:所述校准品是按照以下方法配制得到的:将人表皮生长因子受体Her-2/neu抗原溶解于含非离子表面活性剂的蛋白缓冲液中配制得到校准品;其中,所述非离子表面活性剂选自Tween20、TritonX100、Bronidox中的一种或多种,非离子表面活性剂在蛋白缓冲液中的浓度为0.01%~0.5%;所述磁分离试剂是按照以下方法制备得到的:将链霉亲和素和磁微粒偶联制得链霉亲和素磁微粒,利用长臂生物素标记人表皮生长因子受体Her-2/neu捕获抗体制得生物素化抗体,然后将生物素化抗体与链霉亲和素磁微粒免疫固定,制得磁分离试剂;所述酶反应物包括碱性磷酸酶标记的人表皮生长因子受体Her-2/neu示踪抗体;所述稳定增强剂包括MAK33和抗异嗜性抗体干扰的多组分免疫复合物,所述MAK33在稳定增强剂中的终浓度为80~120μg/ml;所述多组分免疫复合物是按照以下方法制备得到的:新生牛血清、小鼠血清、绵羊血清按1:1.5~2.5:0.4~0.6的体积比混合,加入硫酸铵沉淀过夜,离心,去上清,将沉淀溶于含0.5%牛血清白蛋白的PBSpH7.2缓冲液中,70~75℃放置0.5~2小时,干燥,制得抗异嗜性抗体干扰的多组分免疫复合物;所述化学发光底物为经缓冲液稀释的APS-5化学发光底物。2.根据权利要求1所述的人表皮生长因子受体Her-2/neu定量检测试剂盒,该试剂盒还包括质控品,该质控品是按照以下方法配制得到的:将人表皮生长因子受体Her-2/neu抗原稀释至含非离子表面活性剂的蛋白缓冲液中配制得到质控品;其中,所述非离子表面活性剂选自Tween20、TritonX100、Bronidox中的一种或多种,非离子表面活性剂在蛋白缓冲液中的浓度为0.01%~0.5%。3.根据权利要求1或2所述的人表皮生长因子受体Her-2/neu定量检测试剂盒,其中,所述校准品是按照以下方法配制得到的:将人表皮生长因子受体Her-2/neu抗原溶解于PBSpH7.2缓冲液中至0.5mg/ml,15分钟后,加入终浓度为1mM赖氨酸反应5~120分钟;将上述反应物,按不同浓度用含非离子表面活性剂的PBS蛋白缓冲液稀释成不同浓度点,并定标,得到校准品;所述含非离子表面活性剂的PBS蛋白缓冲液组分为:磷酸二氢钠50mM,氯化钠75mM,Tween200.02%,TritonX1000.03%,蔗糖1%,酪蛋白0.15%,牛血清白蛋白3%,Proclin3000.02%,氢氧化钠pH6.8。4.根据权利要求1或2所述的人表皮生长因子受体Her-2/neu定量检测试剂盒,其中,所述磁分离试剂是按照以下方法制备得到的:取磁微粒,加入MES缓冲液中,加入sulfo-NHS、EDC,反应,之后去上清,洗涤;加入人表皮生长因子受体Her-2/neu包被抗体反应过夜,备用;加入含BSA、蔗糖、聚乙二醇6000的PBSpH7.2缓冲液,将磁微粒浓缩液置于平皿中,封闭;用pH6.0缓冲液洗涤数次;用含酪蛋白、牛血清白蛋白、Tween20、Proclin300的PBSpH7.2缓冲液复溶;制得磁分离试剂。5.根据权利要求1或2所述的人表皮生长因子受体Her-2/neu定量检测试剂盒,其中,所述酶反应物是按照以下方法配制得到的:碱性磷酸酶标记人表皮生长因子受体Her-2/neu示踪抗体:将...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘劲,
申请(专利权)人:北京大成生物工程有限公司,
类型:发明
国别省市:北京,11
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