一种以水蓼为原料发酵植物促生菌在抗虫中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种发酵水蓼制备杀虫剂的方法，其工艺特点是以水蓼为主要原料，辅以生活垃圾、淀粉类物质及水，以市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47为发酵菌株，按照水蓼：生活垃圾：淀粉类物质:纯净水＝5:1～2:0.01:3～4的比例和体系3％的菌株接种量，发酵温度为25～35℃，转速为100～200rpm，保持pH＝5～8，发酵时间6～9d。本发明专利技术完全发酵，使其中的多种酶、维生素、氨基酸和微量元素充分释放出来，使产品提高杀虫剂的药效及其功能。而且又不影响植物性杀虫剂的生理活性物质。

Application of plant growth promoting bacteria in insect resistance by using Polygonum knotweed as raw material

The present invention provides a method for preparing pesticide fermentation of Polygonum hydropiper, the process is characterized by water pepper as the main raw material, supplemented by garbage, starch and water, using commercially available short small bacillus, Bacillus thuringiensis and Bacillus amyloliquefaciens H47 strains, according to Polygonum hydropiper: garbage starch. Material: pure water = 5:1 ~ 2:0.01:3 ~ 4 and the proportion of the system of the 3% strains inoculation, fermentation temperature is 25 to 35 DEG C, the speed is 100 ~ 200rpm, pH = 5 ~ 8, fermentation time 6 ~ 9d. The invention is fully fermented so that a plurality of enzymes, vitamins, amino acids and trace elements are fully released so as to improve the efficacy and the function of the pesticide. And it does not affect the physiological active substances of botanical insecticides.

【技术实现步骤摘要】
一种以水蓼为原料发酵植物促生菌在抗虫中的应用
一种微生物发酵制备杀虫剂的方法，涉及到用市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47冻干粉，以水蓼为原料发酵制备杀虫剂的方法，属于生物工程及发酵

技术介绍
水蓼是蓼科一年生草本植物，水蓼高20-80cm，直立或下部伏地。茎红紫色，无毛，节常膨大具须根，叶互生，披针形或椭圆状披针形，长4-9cm，宽5-15mm，两端渐尖，均有腺状小点，无毛或叶脉及叶缘上有小刺状毛；托鞘膜质，简状，有短缘毛；叶柄短。穗状花序腋生或顶生，细弱下垂，下部的花间断不连；苞漏斗状，有疏生小脓点和缘毛；花具细花梗而伸出苞外，间有1-2朵花包在膨胀的托鞘内；花被4-5裂，卵形或长圆形，淡绿色或淡红色，有腺状小点；雄蕊5-8；雌蕊1，花柱2-3裂。瘦果卵形，扁平，少有3棱，长2.5毫米，表面有小点，黑色无光，包在宿存的花被内。花期7-8月。我国大部分地区均有分布，生长于湿地、水边或水中。水蓼全草含水蓼二醛，异水蓼二醛，密叶辛木素，水蓼酮，水蓼素-7-甲醚，水蓼素，槲皮素，槲皮甙，槲皮黄甙，金丝桃甙，顺/反阿魏酸，顺/反芥子酸，香草酸，丁香酸，草木犀酸，顺/反对香豆酸，对羟基苯甲酸，龙胆酸，顺/反咖啡酸，原儿茶酸，没食子酸，对羟基苯乙酸，绿原酸，水杨酸，并没食子酸，缬草酸，葡萄糖醛酸，焦性没食子酸，槲皮素-7-O-葡萄糖甙，β-谷甾醇葡萄糖甙，异水蓼醇醛，水蓼醛酸，11-乙氧基桂皮内酯，11-羟基密叶辛木素(valdiviolide)，7，11-二羟基密叶辛木素，八氢三甲基萘醇二醛，八氢三甲基萘甲醇，异十氢三甲基萘并呋喃醇,花白甙等次生代谢产物，也发现水蓼提取物具有一定的杀菜青虫的作用。但传统的植物性杀虫剂多用有机溶剂或煎煮提取，1)不利于节能也有较大的环境风险；2)影响活性物质的稳定性和遗失活性物质；3)增加成本使得开发应用困难较大，作用效果缓慢，因此给植物源杀虫剂的研发和生产带来了巨大的经济困难。利用合适的植物促生菌发酵水蓼，不仅有利于生理活性物质的提取，还不易造成活性物质的失活，促生菌本身还有较好的杀虫防病和促生作用。有利于改善植物生长和增强杀虫效果。有利于环境保护和水蓼本身的有效利用。
技术实现思路
本专利技术利用水蓼的丰富资源，通过微生物进行发酵产生各种次级代谢物及植物促生菌产生酶类、醇类及芳香物质等多类有义代谢产物从而提高杀虫剂的药效及其功能，本专利技术拥有着发酵时间短，有害微生物滋生少甚至没有，避免由于过长时间发酵而产生的病毒，以及能产生脂肽等生理活性物质等优点，从而提高杀虫防病的功效和植物生长的促生作用。本专利技术配方及用法：(1)挑选材料：选择新鲜、质量好的水蓼1kg/L为发酵主原料。(2)材料的处理：先用自来水冲洗，再使用无锡百年尚水饮品有限公司提供的百年尚水清水洗两遍，最后再用0.9％的NaCl溶液侵泡120秒，沥干备用。(3)菌种培养：使用无锡百年尚水饮品有限公司提供的百年尚水配制LB培养基，将原保存菌株活化，培养约48小时得到的菌液备用；(4)接种发酵：均按照接种比例3％，将市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47按一定的比例接入发酵原液，各菌浓度为106CFU/ml，发酵3～9d，转速为100～200r/min,pH值5.0～8.0，温度25℃～35℃。(5)后期处理制作：粗过滤，初步筛掉大颗粒残渣，避免水蓼久放容易造成酸败，过滤条件：过滤筛数目为20～32目。细过滤：进一步滤掉小型颗粒残渣，使液态呈现较清澈的状态，过滤条件：过滤筛数目为80～100目，既得以水蓼发酵原料的杀虫剂。步骤(1)原料的制备方法包括如下步骤：(11)所使用的工具、器具均要灭菌，无油腻。(12)把水蓼用纯净水洗净，再用纯净水或0.9％的盐水浸泡沥干。(13)再将水蓼置于已灭菌的容器中，后加入生活垃圾及淀粉类物质和纯净水，其中发酵原液中体积比水蓼：生活垃圾：淀粉类物质:纯净水＝5:1～2:0.01:3～4，即得水蓼发酵原液。专利技术的有益效果：本利用合适的植物促生菌发酵水蓼，不仅有利于生理活性物质的提取，保持活性物质的稳定性，促生菌本身可通过优势菌株抑制了其他杂菌滋生从而有较好的杀虫防病和促生作用。有利于改善植物生长和增强杀虫效果。有利于环境保护和水蓼植物本身的有效利用。提高杀虫剂的经济价值。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术的技术方案进行清楚、完善地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1一种以水蓼为原料发酵制备杀虫剂的方法，包括以下步骤：(1)选择新鲜、质量好的水蓼做为发酵主要原料。(2)纯净水清水洗两遍，最后再用0.9％的NaCl溶液浸泡，低温杀菌，然后沥干，装入纯净水清洗好的容器中，大概占体积的25％，加入占总液体体积3％的生活垃圾及1％的淀粉类物质为发酵原液备用。(3)配制LB培养基，将原保存菌株活化，80r/min振荡培养约48小时得到的发酵菌液备用；(4)均按照接种比例3％，将市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47按等比分别取接入发酵原液，100r/min振荡培养发酵9d，pH值6.0，温度30℃。(5)先进行粗过滤，过滤筛数目为20～32目。然后细过滤，过滤筛数目为为80～100目，即得水蓼为发酵原料的杀虫剂。实施例2一种以水蓼为原料发酵制备杀虫剂的方法，包括以下步骤：(1)选择新鲜、质量好的水蓼做为发酵主要原料。(2)纯净水清水洗两遍，最后再用0.9％的NaCl溶液浸泡，低温杀菌，然后沥干，装入纯净水清洗好的容器中，大概占体积的30％，加入占总液体体积10％的生活垃圾及1％的淀粉类物质为发酵原液备用。(3)配制LB培养基，将原保存菌株活化，100r/min振荡培养约48小时得到的发酵菌液备用；(4)均按照接种比例3％，将市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47按等比分别取接入发酵原液，120r/min振荡培养发酵9d，pH值6.0，温度30℃。(5)先进行粗过滤，过滤筛数目为20～32目。然后细过滤，过滤筛数目为为80～100目，即得水蓼为发酵原料的杀虫剂。实施例3一种以水蓼为原料发酵制备杀虫剂的方法，包括以下步骤：(1)选择新鲜、质量好的水蓼做为发酵主要原料。(2)纯净水清水洗两遍，最后再用0.9％的NaCl溶液浸泡，低温杀菌，然后沥干，装入纯净水清洗好的容器中，大概占体积的35％，加入占总液体体积15％的生活垃圾及1％的淀粉类物质为发酵原液备用。(3)配制LB培养基，将原保存菌株活化，120r/min振荡培养约48小时得到的发酵菌液备用；(4)均按照接种比例3％，将市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47按等比分别取接入发酵原液，150r/min振荡培养发酵9d，pH值6.0，温度30℃。(5)先进行粗过滤，过滤筛数目为20～32目。然后细过滤，过滤筛数目为为80～100目，即得水蓼为发酵原料的杀虫剂。实施例4一种以水蓼为原料发酵制备杀虫剂的方法，包括以下步骤：(1)选择新鲜、质量好的水蓼做为发酵主要原料。(2)纯净水清水洗两遍，最后再用0.9％的NaCl溶液浸泡，低温本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以水蓼为原料发酵制备杀虫剂的技术，其特点是以质量好的水蓼为主要发酵原料，加入淀粉及生活垃圾，采用市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47，生产制备杀虫剂，其工艺为：1)选用新鲜无病变的水蓼用自来水洗净表面污物，再使用无锡百年尚水饮品有限公司提供的百年尚水清水洗两遍，最后再用0.9％的NaCl溶液侵泡120秒，沥干，放入罐中，按体积比为水蓼：生活垃圾：淀粉类物质:纯净水＝5:1～2:0.01:3～4配制成发酵原液。2)配制LB培养基，将原保存菌株活化，培养约48小时得到的菌液备用；再将市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47按一定的比例接入发酵原液3)发酵体系中，加入体系3％的菌种，发酵温度为25～35℃，转速为100～120rpm，保持pH＝5～8，发酵时间6～9d。4))发酵完成后的发酵液先经粗过滤，过滤筛数目为20～32目；再细过滤，过滤筛数目为80～100目，即可制备得到以水蓼为原料的杀虫剂。

【技术特征摘要】
1.一种以水蓼为原料发酵制备杀虫剂的技术，其特点是以质量好的水蓼为主要发酵原料，加入淀粉及生活垃圾，采用市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47，生产制备杀虫剂，其工艺为：1)选用新鲜无病变的水蓼用自来水洗净表面污物，再使用无锡百年尚水饮品有限公司提供的百年尚水清水洗两遍，最后再用0.9％的NaCl溶液侵泡120秒，沥干，放入罐中，按体积比为水蓼：生活垃圾：淀粉类物质:纯净水＝5:1～2:0.01:3～4配制成发酵原液。2)配制LB培养基，将原保存菌株活化，培养约48小时得到的菌液备用；再将市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47按一定的比例接入发酵原液3)发酵体系中，加入体系3％的菌种，发酵温度为25～35℃，转速为100～120rpm，保持pH＝5～8，发酵时间6～9d。4))发酵完成后的发酵液先经粗过滤，过滤筛数目为20～32目；再细过滤，过滤筛数目为80～100目，即可制备得到以水蓼为原料的杀虫剂。2.根据权利要求1所述的一种发酵水蓼制备杀虫剂的方法，其特征是：均按照接种比例4％，将市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47等比接入发酵原液，各菌浓度为106CFU/ml，转速为100～200rpm，发酵3～9d，pH值5.0～8.0，温度25℃～35℃。3.根据权利要求1所述的一种发...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖祥儒，吴秋兰，甘超，蔡宇杰，管政兵，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32