一种M2巨噬细胞诱导剂制造技术

技术编号:15783503 阅读:226 留言:0更新日期:2017-07-09 05:24
本发明专利技术提供了一种M2巨噬细胞的诱导剂及其制备方法,所述M2巨噬细胞的诱导剂为一种胶原/壳聚糖海绵支架诱导的间充质干细胞条件培养基。所述M2巨噬细胞的诱导剂的制备方法,其步骤包括:a)将间充质干细胞接种在胶原/壳聚糖海绵支架上;b)采用无血清培养基培养所述间充质干细胞‑胶原/壳聚糖海绵支架;c)收集所述间充质干细胞和培养基;d)加入新鲜无血清培养基,并继续培养所述间充质干细胞;和e)收集所述间充质干细胞的条件培养基。本发明专利技术提供的M2巨噬细胞诱导剂能够有效促进巨噬细胞向M2的极化。本发明专利技术的M2巨噬细胞诱导剂可用于治疗肥胖症。

An inducer of M2 macrophages

The present invention provides an inducer of M2 macrophages and a process for the preparation thereof, wherein the inducer of the M2 macrophage is a conditioned medium for induction of mesenchymal stem cell conditioned by a collagen / chitosan sponge scaffold. Inducers of the preparation method of M2 macrophages, which comprises the following steps: a) the mesenchymal stem cells were seeded on collagen / chitosan sponge scaffold; b) using serum-free culture medium the mesenchymal stem cells collagen / chitosan sponge scaffold; c) collecting the mesenchymal mesenchymal stem cells and culture medium; d) adding fresh serum-free medium, and cultured the mesenchymal stem cells; and E) to collect the mesenchymal stem cell conditioned medium. The M2 macrophage inducer provided by the invention can effectively promote the polarization of macrophages to M2. The M2 macrophage inducer of the present invention can be used for the treatment of obesity.

【技术实现步骤摘要】
一种M2巨噬细胞诱导剂
本专利技术属于生物医药领域,尤其涉及一种M2巨噬细胞的诱导剂及其制备方法,和用于肥胖症病药物的应用。
技术介绍
肥胖发生是由于异常或过度的脂肪蓄积。大量证据表明,肥胖和诸多疾病的病理生理相关,如胰岛素抵抗,糖尿病,心血管疾病和癌症等。世界卫生组织最近报道,2014年,18岁及以上的成年人中肥胖超过了6亿,肥胖率为13%。全球肥胖率在1980年和2014年之间翻了一倍以上。因此,肥胖的问题受到越来越多的重视。肥胖伴随着脂肪组织中的慢性低度炎症(Hotamisligil,G.S.,2006.Inflammationandmetabolicdisorders.Nature444,860e867.;Ferrante,A.W.,etal.,2007.Obesity-inducedinflammation:ametabolicdialogueinthelanguageofinflammation.J.Intern.Med.262,408e414.;Stienstra,R.,etal.,2012.Theinflammasomeputsobesityinthedangerzone.Cell.Metab.15,10e18.)。越来越多的研究表明,改善炎症可以改善胰岛素敏感性,减少肥胖小鼠的脂肪细胞大小和改善脂质代谢。例如,通过给予IL-1受体或IL-1b的拮抗剂,高脂饮食小鼠胰岛素敏感性增强(Larsen,C.M.,etal.,2007.Interleukin-1-receptorantagonistintype2diabetesmellitus.N.Engl.J.Med.356,1517e1526.;Ridker,P.M.,etal.,2012.Effectsofinterleukin-1betainhibitionwithcanakinumabonhemoglobinA1c,lipids,C-reactiveprotein,interleukin-6,andfibrinogen:aphaseIIbrandomized,placebo-controlledtrial.Circulation126,2739e2748.)。此外,当CCR2-/-小鼠不能把炎症单核细胞从血液补充入组织时,显示比高脂饮食小鼠更少的肥胖相关代谢的易感性(Weisberg,S.P.,etal.,2006.CCR2modulatesinflammatoryandmetaboliceffectsofhigh-fatfeeding.J.Clin.Invest116,115e124.)。因此,寻求减轻肥胖相关炎症的方法为解决肥胖和肥胖相关胰岛素抵抗带来了希望。巨噬细胞是影响炎症和肥胖相关胰岛素抵抗的关键因素,它们可以分为促炎性巨噬细胞M1和抗炎型巨噬细胞M2。肥胖状态下,促炎巨噬细胞M1大量增殖,加剧脂肪组织和其他器官的胰岛素抵抗。虽然,脂肪组织中的抗炎巨噬细胞M2可抑制炎症,但在肥胖症中,它们相对于巨噬细胞M1的比例低得多。总的来说,在肥胖症中,巨噬细胞M1代替巨噬细胞M2并控制炎症和巨噬细胞的体内平衡,稳定在更高的促炎症“设定点”。这些数据表明纠正脂肪组织的炎症/免疫稳态是必要的。输注M2巨噬细胞可以调节体内巨噬细胞稳态,从而达到改善肥胖的目的。间充质干细胞(MSC)是最重要的多能成体干细胞之一,具有自我更新和自我分化潜能,以及分泌多种因子参与损伤的组织与器官的修复与再生而被广泛应用于多种疾病的治疗。MSCs在体内或体外特定的诱导条件下,可分化为胰岛、神经、血管内皮、骨、软骨、肌肉、肝脏、心肌等多种组织细胞。越来越多的研究证实间充质干细胞(MSCs)通过分泌的细胞因子可发挥免疫调节与降低炎症的作用。研究发现,间充质干细胞可以通过促进M2巨噬细胞极化来缓解炎症反应并改善胰岛素抵抗,(XieZ,HaoH,TongC,etal.Humanumbilicalcord‐derivedmesenchymalstemcellselicitmacrophagesintoananti‐inflammatoryphenotypetoalleviateinsulinresistanceintype2diabeticrats[J].2016,34(3):627-639.)。MSCs效能的治疗机制主要取决于它们的旁分泌活性,MSC能分泌大量的生长因子,目前的研究认为,这些生物活性物质使间充质干细胞具有免疫调节、降低炎症的功能,所有的MSC分泌物中的生物活性因子和细胞因子可以在条件培养基中收集,累积的证据表明MSC条件培养基具有与MSC相似的治疗效果。已有研究证明,干细胞接种到CCSS(collagen/chitosanspongescaffolds)胶原-壳聚糖海绵支架后,干细胞的活性增强,修复效应也随之增强(TongC,HaoH,XiaL,etal.Hypoxiapretreatmentofbonemarrow-derivedmesenchymalstemcellsseededinacollagen-chitosanspongescaffoldpromotesskinwoundhealingindiabeticratswithhindlimbischemia.[J].WoundRepair&Regeneration,2015,24(1):45.)。基于上述研究,本专利技术用CCSS对MSC进行培养,得到激活的间充质干细胞条件培养基,用来促进巨噬细胞向M2的极化,用来改善肥胖和相关胰岛素抵抗。
技术实现思路
本专利技术提供了一种M2巨噬细胞的诱导剂及其制备方法,所述巨噬细胞的诱导剂能够有效促进巨噬细胞向M2的极化,用来改善肥胖和相关胰岛素抵抗。为实现上述专利技术目的,本专利技术采用下述技术方案予以实现:一种M2巨噬细胞的诱导剂,其特征为,是一种胶原/壳聚糖海绵支架诱导的间充质干细胞条件培养基。所述胶原/壳聚糖海绵支架为胶原与壳聚糖混合物冷冻冻干后,于N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶液中摇动获得的。所述的间充质干细胞选自脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞或其组合。进一步的,所述胶原/壳聚糖海绵支架为将胶原和壳聚糖以1:1的比例混合,随后在-80℃下冷冻2小时,然后冻干24小时;干燥后,将混合物浸入含有N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺(EDC)和8mMN-羟基琥珀酰亚胺(NHS)中,同时在室温下缓慢摇动12小时获得。一种M2巨噬细胞的诱导剂的制备方法,其步骤包括:a)将间充质干细胞接种在胶原/壳聚糖海绵支架上;b)采用无血清培养基培养所述间充质干细胞-胶原/壳聚糖海绵支架;c)收集所述间充质干细胞和培养基;d)加入新鲜无血清培养基,并继续培养所述间充质干细胞;和e)收集所述间充质干细胞的条件培养基。进一步的,所述步骤a)中将间充质干细胞接种在胶原/壳聚糖海绵支架上的步骤包括:将所述间充质干细胞单细胞悬浮液滴到胶原/壳聚糖海绵支架顶部表面孵育培养;然后将等量间充质干细胞接种在所述间充质干细胞-胶原/壳聚糖海绵支架构建体上孵育培养。所述步骤c)收集所述间充质干细胞和培养基的本文档来自技高网
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一种M2巨噬细胞诱导剂

【技术保护点】
一种M2巨噬细胞的诱导剂,其特征为,是一种胶原/壳聚糖海绵支架诱导的间充质干细胞条件培养基。

【技术特征摘要】
1.一种M2巨噬细胞的诱导剂,其特征为,是一种胶原/壳聚糖海绵支架诱导的间充质干细胞条件培养基。2.如权利要求1所述的M2巨噬细胞的诱导剂,所述胶原/壳聚糖海绵支架为胶原与壳聚糖混合物冷冻冻干后,于N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶液中摇动获得的。3.如权利要求2所述的M2巨噬细胞的诱导剂,所述胶原/壳聚糖海绵支架为将胶原和壳聚糖以1:1的比例混合,随后在-80℃下冷冻2小时,然后冻干24小时;干燥后,将混合物浸入含有N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺(EDC)和8mMN-羟基琥珀酰亚胺(NHS)中,同时在室温下缓慢摇动12小时获得。4.如权利要求1所述的间充质干细胞选自脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞。5.一种M2巨噬细胞的诱导剂的制备方法,其步骤包括:a)将间充质干细胞接种在胶原/壳聚糖海绵支架上;b)采用无血清培养基培养所述间充质干细胞-胶原/壳聚糖海绵支架;c)收集所述间充质干细胞和培养基;d)加入新鲜无血清培养基,并继续培养所述间充质干细胞;和...

【专利技术属性】
技术研发人员:郝好杰李梓源易军周严恒刘刚陈惠华
申请(专利权)人:北京恒峰铭成生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:北京,11

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