一种FAP纳米抗体Nb12制造技术

技术编号:15781293 阅读:293 留言:0更新日期:2017-07-09 01:02
本发明专利技术公开了针对于FAP多肽分子抗原表位的一种FAP纳米抗体,同时还公布了编码该FAP纳米抗体的基因序列以及能够表达该FAP纳米抗体的表达载体和宿主细胞,并且公开了该FAP纳米抗体的用途。通过本发明专利技术公开的FAP纳米抗体、基因序列及宿主细胞等,可以在大肠杆菌内高效表达出FAP纳米抗体,其与FAP免疫反应特异性好、亲和力高,可应用于制备FAP检测试剂或抗肿瘤药物等。

A FAP nano antibody Nb12

The invention discloses a nano antibody in FAP for FAP peptide epitopes, also released gene sequence encoding the FAP nano antibodies and capable of expressing the FAP nano antibody expression vectors and host cells, and discloses the application of the FAP nano antibody. The inventive FAP nano antibody, gene sequences and host cells, can be highly expressed in Escherichia coli FAP nano antibody, and FAP immune response with high specificity and high affinity, which can be applied to the preparation of FAP reagent or antitumor drugs.

【技术实现步骤摘要】
一种FAP纳米抗体Nb12
本专利技术属于生物医学或生物制药
,更具体地说,涉及一种针对于FAP多肽分子抗原表位分子的纳米抗体(Nb12)、其编码序列及用途。
技术介绍
成纤维细胞激活蛋白(fibroblastactivationprotein,FAP)是肿瘤相关成纤维细胞特异性表达的一种表面抗原,具有二肽基肽酶和胶原酶活性,它基因组稳定,具有促进肿瘤细胞生长,侵袭及免疫抑制的作用。FAP由761个氨基酸组成,在不同哺乳动物细胞中的糖基化水平不同,单体相对分子质量有8.8×104、9.5×104、9.7×104等多种报道,二聚体相对分子质量为1.7×105。FAP的结构分为胞浆区、跨膜区和胞外区三部分,其中胞浆区是由开头6个氨基酸组成的短肽链,跨膜区是由19个氨基酸组成,起到固定作用的疏水跨膜片段,然而FAP分子中氨基酸序列20~761的绝大部分都暴露在细胞外的微环境中,这一部分就是胞外区,是关键的酶催化区。FAP同时具有二肽基肽酶活性和胶原酶活性,能够降解基质中的二肽和Ⅰ型胶原。FAP与属于二肽基肽酶家族的DPPIV(dipeptidylpeptidaseIV/CD26)具有50%的同源性,均具有肽链外切酶活性,常形成复合物。因此,推测FAP可通过调节肿瘤基质中某些肽类生长因子,修饰活性肽并改变其功能,从而促进肿瘤的发生发展。在恶性肿瘤中,FAP阳性的成纤维细胞仅占肿瘤细胞总数的2%,但当其被去除后,癌细胞及基质细胞都会发生迅速的坏死。由此可以看出,FAP对恶性肿瘤的发生和发展具有非常重要的作用,而在肿瘤治疗方面则具有广阔的应用前景。靶向肿瘤微环境,尤其是靶向FAP的治疗策略在肿瘤治疗中扮演着非常重要的角色。在肿瘤发生、发展过程中,肿瘤细胞不仅被动地逃避免疫系统的攻击,同时也主动地抑制其生长环境中的免疫细胞的正常功能,它与其所处的微环境相互作用,形成抑制性肿瘤微环境并促进肿瘤的恶性进展,这些因素的存在为探讨肿瘤发生机制及开辟新的肿瘤免疫治疗方案提供了思路。目前已经发展了几种FAP特异性单克隆抗体,并开始在临床诊断和治疗中得到应用,其对肿瘤组织的亲和力得到了提高。但是这种传统方法存在抗体稳定性差、灵敏度低、生产成本高等缺点。纳米抗体技术,是生物医学科学家在传统抗体的基础上,运用分子生物学技术结合纳米粒子科学的概念进行的抗体工程革命,从而研发出的最新和最小的抗体分子,最初由比利时科学家莱曼德.哈马斯在骆驼血液中发现。普通的抗体蛋白由两条重链和两条轻链组成,而从骆驼血液中发现的新型抗体只有两条重链,没有轻链,这些“重链抗体”能像正常抗体一样与抗原等靶标紧紧结合,但不像单链抗体那样相互黏连聚集成块。以该“重链抗体”为基础的纳米抗体不仅分子量只是普通抗体的1/10,而且化学性质也更加灵活,稳定性好,可溶性高,表达容易且容易获得,并容易偶联其他分子。但是,现有技术中并没有针对FAP研发出适用的纳米抗体。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题在于,针对现有技术中缺乏针对FAP表位的纳米抗体的缺陷,提供一种FAP纳米抗体,同时提供编码该FAP纳米抗体的DNA分子以及该纳米抗体的用途等。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是:本专利技术的第一方面,提供了一种FAP纳米抗体,该FAP纳米抗体为针对FAP表位的纳米抗体,包括两条如SEQIDNO:9所示氨基酸序列的VHH链。本专利技术中该FAP纳米抗体可以简称为Nb12。本专利技术第二方面,提供了一种针对FAP纳米抗体的VHH链,包括框架区FR和互补决定区CDR,所述框架区FR包括下组的FR的氨基酸序列:SEQIDNO:1所示的FR1,SEQIDNO:2所示的FR2,SEQIDNO:3所示的FR3,SEQIDNO:4所示的FR4;所述互补决定区CDR包括下组的CDR的氨基酸序列:SEQIDNO:5所示的CDR1,SEQIDNO:6所示的CDR2,SEQIDNO:7所示的CDR3。框架区结构相对保守,主要起着维持蛋白质结构的作用;互补决定区结构相对多样化,主要负责抗体的识别。优选地,所述针对FAP纳米抗体的VHH链,它具有SEQIDNO:9所示的氨基酸序列。本专利技术第三方面,提供了一种DNA分子,它用于编码选自下组的蛋白质:本专利技术所述的FAP纳米抗体Nb12,或者本专利技术所述的针对FAP纳米抗体的VHH链。优选地,所述的DNA分子,它具有SEQIDNO:8所示的核苷酸序列。本专利技术提供的FAP纳米抗体可通过噬菌体扩增或基因工程重组表达的方式进行大量制备。噬菌体扩增是指将展示有FAP纳米抗体Nb12的噬菌体,通过生物扩增的方式,大量繁殖生产展示有FAP纳米抗体Nb12的噬菌体粒子。基因工程重组表达的方式是指将编码FAP纳米抗体Nb12的基因,通过克隆至表达载体,以蛋白表达的形式进行纳米抗体的大量制备。本专利技术的第四方面,提供了一种表达载体,它含SEQIDNO:8所示的核苷酸序列。本专利技术的第五方面,提供了一种宿主细胞,它可以表达本专利技术的FAP纳米抗体Nb12。本专利技术的第六方面,提供了本专利技术所述的FAP纳米抗体Nb12在制备FAP检测试剂方面的用途。本专利技术的FAP纳米抗体Nb12可以替代传统的FAP抗体,制备FAP检测试剂,用于检测FAP多肽分子。本专利技术还提供了FAP纳米抗体Nb12在制备抗肿瘤药物方面的用途。本专利技术也相应提供了一种FAP检测试剂或抗肿瘤药物,包括如前所述的FAP纳米抗体Nb12。本专利技术的第七方面,提供了本专利技术所述的FAP纳米抗体Nb12在非治疗目的免疫学检测中的用途。该免疫学检测的类型包括酶联免疫吸附检测、胶体金免疫层析、免疫斑点杂交等基于抗原抗体特异性反应的免疫学分析检测类型。本专利技术FAP纳米抗体Nb12在应用时,可以通过噬菌体扩增获得的展示有FAP纳米抗体Nb12的噬菌体粒子直接用于分析检测以及将FAP纳米抗体Nb12经过原核生物或真核生物表达后以蛋白的形式进行免疫学检测分析。本专利技术的第八方面,提供了本专利技术所述的FAP纳米抗体Nb12在制备结合吸附FAP试剂中的应用。例如,可以将本专利技术FAP纳米抗体制成免疫亲和柱,吸附抓取FAP,在富集后供进一步的研究等。实施本专利技术,具有以下有益效果:本专利技术首先合成FAP多肽,并使其具有免疫原性,然后将FAP分子偶联在酶标板上,展示该蛋白的正确空间结构,以此形式的抗原利用噬菌体展示技术筛选免疫纳米抗体基因库(骆驼重链抗体噬菌体展示基因库),从而获得了FAP特异性的纳米抗体基因,将此基因转至大肠杆菌中,从而建立了能在大肠杆菌中高效表达的纳米抗体株;本专利技术方法筛选得到的FAP纳米抗体具有与FAP免疫反应特性,且特异性好、亲和力高,可应用于制备FAP检测试剂或抗肿瘤药物等。附图说明下面将结合附图及实施例对本专利技术作进一步说明,附图中:图1为FAP纳米抗体的氨基酸编号和结构示意图;图2是FAP纳米抗体的DNA电泳图;图3是FAP纳米抗体经镍柱树脂凝胶亲和层析纯化后的SDS-PAGE的电泳图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合附图及实施例,对本专利技术进行进一步详细说明。本专利技术利用噬菌体展示技术,从驼源免疫的单域重链抗体库中筛选能与靶分子FAP抗原特异性结合的单域重链抗体(VHH)噬菌体克隆,而获得本文档来自技高网
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一种FAP纳米抗体Nb12

【技术保护点】
一种FAP纳米抗体,其特征在于,所述FAP纳米抗体为针对FAP表位的纳米抗体,包括两条如SEQ ID NO:9所示氨基酸序列的VHH链。

【技术特征摘要】
1.一种FAP纳米抗体,其特征在于,所述FAP纳米抗体为针对FAP表位的纳米抗体,包括两条如SEQIDNO:9所示氨基酸序列的VHH链。2.一种针对FAP纳米抗体的VHH链,包括框架区FR和互补决定区CDR,其特征在于,所述框架区FR包括下组的FR的氨基酸序列:SEQIDNO:1所示的FR1,SEQIDNO:2所示的FR2,SEQIDNO:3所示的FR3,SEQIDNO:4所示的FR4;所述互补决定区CDR包括下组的CDR的氨基酸序列:SEQIDNO:5所示的CDR1,SEQIDNO:6所示的CDR2,SEQIDNO:7所示的CDR3。3.根据权利要求2所述的针对FAP纳米抗体的VHH链,其特征在于,它具有SEQIDNO:9...

【专利技术属性】
技术研发人员:赵永祥卢小玲
申请(专利权)人:广西医科大学
类型:发明
国别省市:广西,45

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