一种靶向肿瘤血管Anxa1标记前体NOTA‑IF 7的制备方法技术

一种靶向肿瘤血管Anxa1标记前体NOTA‑IF 7的制备方法，属于有机化学和药物领域。本发明专利技术由双功能螯合剂1，4，7‑ 三氮杂环壬烷‑1，4，7‑ 三乙酸(1，4，7‑triazacyclononane‑1，4，7‑triacetic acid，p‑SCN‑Bn‑NOTA，简写NOTA) 与特异性结合肿瘤血管Anxa1的7肽氨基酸(异亮氨酸‑苯丙氨酸‑亮氨酸‑亮氨酸‑色氨酸‑谷氨酰胺‑精氨酸，IF7) 耦合，经高效液相色谱法（HPLC）一歩法纯化得到NOTA‑IF 7。本发明专利技术所述NOTA‑IF 7的制备方法简便，工艺反应条件温和，产率高，该产品可用于氟‑18、铜‑64和镓‑68等同位素标记，方便制得肿瘤的正电子显像剂。

A targeting tumor vascular Anxa1 labeled precursor NOTA IF 7 preparation method

A targeting tumor vascular Anxa1 labeled precursor NOTA IF 7 preparation method, belonging to the field of organic chemistry and medicine. The invention consists of a bifunctional chelating agent 1, 4, 7 three heterocyclic nonane 1, 4, 7 three acetic acid (1, 4, 7 triazacyclononane 1, 4, 7 triacetic acid, P SCN Bn NOTA, abbreviated NOTA) with specific binding 7 peptide tumor vascular Anxa1 (isoleucine leucine leucine phenylalanine tryptophan glutamine, arginine, IF7) coupling by high performance liquid chromatography (HPLC) and purified by NOTA IF 7 step method. The invention of the NOTA IF 7 simple preparation method, the process of mild reaction conditions, high yield, the product can be used in fluorine 18, 64 and 68 copper gallium isotope labeled, convenient positron imaging agent prepared tumor.

【技术实现步骤摘要】
一种靶向肿瘤血管Anxa1标记前体NOTA-IF7的制备方法
本专利技术一种靶向肿瘤血管Anxa1标记前体NOTA-IF7的制备方法，可用于肿瘤显像剂的研制，在肿瘤药物研制和肿瘤早期诊断等生物应用领域具有重要的作用，属于有机化学和药物领域。
技术介绍
癌症是严重威胁人类健康的疾病，癌症的早期诊断和治疗可以减轻患者痛苦和精神、经济负担，争取让癌症患者早日康复。目前，大多数用于诊断与治疗的靶向药物为单克隆片段，其肿瘤穿透能力差，不能特异地被单核巨噬细胞系统捕获。而多肽具有量小，免疫原性低，良好的组织穿透能力和肿瘤组织亲合力高等优点，靶向药物的研究一直是肿瘤诊断和治疗的热点。1971年，Folkman最早提出肿瘤生长是血管依赖性的，肿瘤血管不仅可向肿瘤提供充足的营养，同时也是肿瘤细胞恶性生长和转移的重要条件。膜联蛋白A1(annexinA1，Anxa11)是膜联蛋白超家族中的一员，它参与细胞信号转导、分化及凋亡等多种重要的生命过程。Anxa1是肿瘤新生血管特异的标志物，是EGFR的底物，可以特异性调节MAPK/ERK信号传导通路，同时作为PLA2的抑制剂等参与信号转导、细胞凋亡、钙离子通道的形成等众多生理过程，其在肿瘤组织及癌前病变中的表达明显高于在相应的正常组织中的表达，其与肿瘤的发生、发展、诊断及治疗密切相关。糖模拟肽（carbohydratemimeticpeptide，CMP），是一短序列肽分子，能模拟生物大分子或细胞表面复杂的糖结构，常用于替代糖分子进行诱导免疫反应制备特异性抗体。CMP分子小，血浆清除快，在药代动力学方面极具优势，备受研究者青睐，现在也多用于筛选受体或抗体的特异性高亲和力配体。如能筛选出一种与肿瘤新生血管特异性结合的CMP，将有较高应用前景。ShingoHatakeyama等在研究糖模拟肽的过程中，发现了一个名为IF7的七肽片段，能有效靶向肿瘤血管，而且基本不引起免疫反应。结合ShingoHatakeyama等的研究，我们发展了以IF7为基础，以Anxa1为靶点，用双功能连接剂p-SCN-Bn-NOTA与IF7进行螯合生成NOTA-IF7，其结构含有大环多胺类螯合基团NOTA，易于实现氟-18、铜-64和镓-68等标记，为肿瘤的诊断提供一种新的显像剂。所得配合物制备简单、价格便宜以及较高靶/非靶比值的优点。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种靶向肿瘤血管Anxa1标记前体NOTA-IF7的制备及纯化方法。功能螯合剂NOTA与IF7耦合，经HPLC一步法纯化得到NOTA-IF7，后者可以提供放射性正电子核素的标记靶点，在抗肿瘤药物研制和分子成像等生物应用领域具有重要的作用。本专利技术的技术方案，具体合成路线如下：一种靶向肿瘤血管Anxa1标记前体NOTA-IF7的制备方法，步骤如下：（1）溶解：称取8mgp-SCN-Bn-NOTA溶解在50μL二甲基亚砜DMSO中，得到溶液a；称取20mgIF7溶解在300μL二甲基甲酰胺DMF中，得到溶液b；（2）NOTA-IF7的制备：将步骤（1）制得的溶液a和溶液b按NOTA︰IF7质量比1-2︰1加到玻璃瓶中，再加50μL二异丙基乙胺DIEA，40℃反应2h；冷却至室温，在反应液中加入30μL乙酸终止反应；（3）纯化：取步骤（2）制备的NOTA-IF7，用制备型高效液相HPLC纯化；流动相A为含质量百分比0.1%三氟乙酸TFA的纯水，B为含质量百分比0.1%三氟乙酸TFA的乙腈，流速20mL/min，进样体积为1mL，检测波长254nm；梯度洗脱，流动相组成从5min的95%A和5%B增加到24min的35%A和65%B，收集15-16min的组分，得到产品靶向肿瘤血管Anxa1标记前体NOTA-IF7。纯化条件为：WatersXBridgeC-18色谱柱150mm×19mm，5μm。所述IF7为7肽氨基酸，具体为异亮氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-亮氨酸-色氨酸-谷氨酰胺-精氨酸。本专利技术的有益效果：（1）NOTA-IF7具有肿瘤的靶向性，是肿瘤显像剂的前体，可通过对其进行氟-18、铜-64和镓-68等同位素标记，方便制得肿瘤的正电子显像剂。（2）NOTA-IF7制备方法简便，工艺反应条件温和，产率高，便于临床、科研及药物开发的进一步应用。附图说明图1是NOTA-IF7的HPLC分离纯化图。图2是NOTA-IF7质谱鉴定图。具体实施方式实施例中所述p-SCN-Bn-NOTA购自市场。IF7见附件公开文献（TumorTargetingbyaCarbohydrateLigand-MimickingPeptide和Targeteddrugdeliverytotumorvasculaturebyacarbohydratemimeticpeptide）。实施例1制备NOTA-IF7：（1）溶解：称取8mgp-SCN-Bn-NOTA溶解在50μLDMSO中，得到溶液a；称取20mgIF7溶解在300μL二甲基甲酰胺（DMF）中，得到溶液b。（2）NOTA-IF7的制备：将步骤（1）制得的溶液a和溶液b按NOTA︰IF7质量比1-2︰1加到玻璃瓶中，再加50μL二异丙基乙胺（DIEA），40℃反应2h，冷却至室温，反应液中加入30μL乙酸终止反应。实施例2NOTA-IF7的分离纯化方法：（1）制备型高效液相HPLC纯化NOTA-IF7用制备型高效液相HPLC纯化，WatersXBridgeC-18色谱柱150mm×19mm，5μm，流动相A为含0.1%TFA的纯水，B为含0.1%TFA的乙腈，流速20mL/min，进样体积为1mL，检测波长254nm。（2）梯度洗脱，流动相组成从5min的95%A和5%B增加到24min的35%A和65%B，收集15.3min左右的组分即为NOTA-IF7。NOTA-IF7的HPLC分离纯化图如图1所示。质谱分析图如图2所示。实施例3纯度鉴定：质谱仪为AB4800型MALDI-TOF/TOF，检测模式为反射模式，激光强度4000，电压0.95KV。HPLC纯化的NOTA-IF7样品用1mL20%乙腈溶解，取0.1μL点靶，测得分子量为1425.6，与理论分子量一致，证实为单一的NOTA-IF7。最后应说明的是：以上所述仅为本专利技术的优选实施例而已，并不用于限制本专利技术，尽管参照前述实施例对本专利技术进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所述记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本专利技术的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术的保护范围内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种靶向肿瘤血管Anxa1标记前体NOTA‑IF 7的制备方法，其特征在于步骤如下：（1）溶解：称取8mg NOTA溶解在50μL二甲基亚砜DMSO中，得到溶液a；称取20mg IF 7溶解在300μL二甲基甲酰胺DMF中，得到溶液b；（2）NOTA‑IF 7的制备：将步骤（1）制得的溶液a和溶液b按NOTA︰IF 7质量比1‑2︰1加到玻璃瓶中，再加50μL二异丙基乙胺DIEA，40℃反应2h；冷却至室温，在反应液中加入30μL乙酸终止反应；（3）纯化：取步骤（2）制备的NOTA‑IF7，用制备型高效液相HPLC纯化；流动相A为含质量百分比0.1%三氟乙酸TFA的纯水，B为含质量百分比0.1%三氟乙酸TFA的乙腈，流速20mL/min，进样体积为1mL，检测波长254nm；梯度洗脱，流动相组成从5min的95% A和5% B增加到24min的35% A和65% B，收集15‑16min的组分，得到产品靶向肿瘤血管Anxa1标记前体NOTA‑IF 7；所述IF7为7肽，具体为异亮氨酸‑苯丙氨酸‑亮氨酸‑亮氨酸‑色氨酸‑谷氨酰胺‑精氨酸。

【技术特征摘要】
1.一种靶向肿瘤血管Anxa1标记前体NOTA-IF7的制备方法，其特征在于步骤如下：（1）溶解：称取8mgNOTA溶解在50μL二甲基亚砜DMSO中，得到溶液a；称取20mgIF7溶解在300μL二甲基甲酰胺DMF中，得到溶液b；（2）NOTA-IF7的制备：将步骤（1）制得的溶液a和溶液b按NOTA︰IF7质量比1-2︰1加到玻璃瓶中，再加50μL二异丙基乙胺DIEA，40℃反应2h；冷却至室温，在反应液中加入30μL乙酸终止反应；（3）纯化：取步骤（2）制备的NOTA-IF7，用制备型高效液相HPLC纯化；流动相A为含质量百分比0.1%三氟...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋孟军，吴鹏西，陈宏伟，朱宝，陈越新，
申请(专利权)人：蒋孟军，吴鹏西，陈宏伟，朱宝，陈越新，
类型：发明
国别省市：江苏,32