一种用于多发性骨髓瘤的生物标志物制造技术

本发明专利技术公开了一种用于多发性骨髓瘤的生物标志物，具体的该生物标志物为DRAP1。本发明专利技术通过基因芯片筛选出在多发性骨髓瘤患者中呈高表达的DRAP1基因，后续试验进一步验证了DRAP1基因与多发性骨髓瘤的相关性，提示DRAP1基因可以作为多发性骨髓瘤的诊断标志物应用于临床诊断中。本发明专利技术还通过实验证明，沉默DRAP1基因的表达，能够显著降低多发性骨髓瘤细胞的增殖，提示DRAP1基因可作为靶标应用于多发性骨髓瘤的临床治疗中。

A biomarker used in multiple myeloma

The invention discloses a biomarker for multiple myeloma, in particular, the biomarker is DRAP1. The present invention by gene chip screening showed high expression of the DRAP1 gene in multiple myeloma patients, follow-up tests further verified the relationship between DRAP1 gene and multiple myeloma, suggesting that the DRAP1 gene can be used as the diagnosis of multiple myeloma markers used in clinical diagnosis. The present invention also proves that silencing the expression of DRAP1 gene can significantly reduce the proliferation of multiple myeloma cells, and indicate that the DRAP1 gene can be used as a target for the clinical treatment of multiple myeloma.

【技术实现步骤摘要】
一种用于多发性骨髓瘤的生物标志物
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种用于多发性骨髓瘤的生物标志物，具体的所述生物标志物为DRAP1。
技术介绍
多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)是一种起源于骨髓浆细胞的血液系统恶性肿瘤，其特点是骨髓中浆细胞克隆性增殖积聚，并分泌单克隆免疫球蛋白或其片段。MM是第二常见的血液系统恶性瘤，好发于60-70岁的老年人，发病原因仍不明确，患者存活期一般为3-5年。其临床表现很多，主要包括贫血、高钙血症、肾损伤、反复感染、以及溶骨性损伤等。造血干细胞移植是治疗MM最有效的方法，但由于受骨髓来源、HLA配型以及高医疗费用等因素的影响，限制了它在临床上的应用。近年来，随着对MM研究的深入，MM药物治疗的总体有效率、缓解率及无病生存率也有较大幅度提高，但随着药物治疗的进程患者容易产生耐药和复发等现象，因此对于MM新型治疗方案的研究具有重要意义。近年来，随着新药的研发，经沙利度胺、雷利度胺和硼替佐咪等治疗的MM患者预后获得了极大的进展，为该病的治疗提供了新的选择。然而，多发性骨髓瘤的复发率依然高居不下，因此，研究开发更多治疗MM的新药及治疗方案，仍为基础研究和临床工作者努力的一个方向。目前在世界范围内，肿瘤仍然是威胁人类健康的主要杀手，对其发病机制及其新型诊断、治疗手段的研究一直是全世界医学研究的重点。肿瘤的形成是一个多阶段、多基因损伤、长时间累积的复杂过程，但究其根本，无外乎是细胞增殖失控、分化受阻和凋亡被抑制等三大方面的问题，因此，对于肿瘤的治疗策略也主要是针对这三点来设计完成的。目前为止，化疗仍然是治疗肿瘤的基本策略，化疗药物发展至今，虽然取得了很大成就，但就其总体来说，其严重的毒副作用限制了它的疗效发挥。近年来，随着多学科综合治疗(multidisciplinaryteam，MDT)的发展，多发性骨髓瘤的治疗取得了一定的进展。精准医疗的提出，为肿瘤的治疗提供了新的手段和方向，精准医疗的关键是利用有效的生物标志物，进行特异性个体化治疗。现有技术如专利201610602127.X、201610599598.X、201610602019.2公开了基因在多发性骨髓瘤发生发展中的重要作用，为多发性骨髓瘤的精准医疗提供了一定的基础，但是其在临床上应用的效率还有待进一步研究。因此，寻找多发性骨髓瘤新的有效分子标志物以及潜在治疗靶点，阐明多发性骨髓瘤的发生发展机制，成为多发性骨髓瘤临床诊断和治疗以及研究的热点。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种与多发性骨髓瘤发生发展相关的生物标志物。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了一种DRAP1基因的用途，用于制备预防或治疗多发性骨髓瘤的药物组合物。进一步，所述药物组合物包括DRAP1的下调剂。所述下调剂选自：以DRAP1或其转录本为靶序列、且能够抑制DRAP1基因表达或基因转录的干扰分子，包括：shRNA(小发夹RNA)、小干扰RNA(SiRNA)、dsRNA、微小RNA、反义核酸，或能表达或形成所述shRNA、小干扰RNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸的构建物；或特异性与DRAP1编码的蛋白结合的结合分子(如能够抑制DRAP1蛋白活性的抗体或配体)。进一步，所述的下调剂选自下组序列的siRNA：SEQIDNO.9、SEQIDNO.10。本专利技术提供了一种用于预防或治疗多发性骨髓瘤的DRAP1的下调剂，所述下调剂选自：核酸抑制物，蛋白抑制剂，蛋白水解酶，蛋白结合分子，其能够在蛋白或基因水平上下调DRAP1基因或其编码的蛋白的表达或活性。在本专利技术中，所述DRAP1的下调剂还可用于抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖。本专利技术提供了一种用于预防或治疗多发性骨髓瘤的药物组合物，所述药物组合物含有：上面所述的DRAP1的下调剂；和药学上可接受的载体。本专利技术提供了一种DRAP1基因的用途，用于筛选预防或治疗多发性骨髓瘤的潜在物质。本专利技术提供了一种筛选预防或治疗多发性骨髓瘤的潜在物质的方法，所述方法包括：用候选物质处理表达或含有DRAP1基因或其编码的蛋白的体系；和检测所述体系中DRAP1基因或其编码的蛋白的表达或活性；其中，若所述候选物质可降低DRAP1基因的表达或活性，(优选显著降低，如低20％以上，较佳的低50％以上；更佳的低80％以上)，则表明该候选物质是预防或治疗多发性骨髓瘤的潜在物质。所述体系选自：细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系。所述候选物质包括但不限于：针对DRAP1基因或其编码的蛋白或其上游或下游基因或蛋白设计的干扰分子、核酸抑制物、结合分子(如抗体或配体)、小分子化合物等。在本专利技术中，所述的方法还包括：对获得的潜在物质进行进一步的细胞实验和/或动物试验，以从候选物质中进一步选择和确定对于预防、缓解或治疗多发性骨髓瘤有用的物质。本专利技术提供了一种DRAP1基因的用途，用于制备诊断多发性骨髓瘤的产品。其中，所述产品包括(但不限于)芯片、制剂或试剂盒。进一步，所述产品包括检测DRAP1基因表达的试剂。进一步，所述试剂选自：特异性识别DRAP1的探针；或特异性扩增DRAP1的引物；或特异性结合DRAP1编码的蛋白的抗体或配体。较佳的，所述的特异性扩增DRAP1基因的引物是引物对，序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。附图说明图1是利用QPCR检测DRAP1基因在多发性骨髓瘤组织中的表达情况图；图2是利用QPCR检测DRAP1在多发性骨髓瘤细胞中的转染情况图；图3是用MTT法检测DRAP1基因对多发性骨髓瘤细胞增殖的影响图。具体的实施方式本专利技术经过广泛而深入的研究，通过高通量方法，采用目前覆盖数据库最广的基因芯片，检测标本中基因在多发性骨髓瘤组织和正常骨髓组织的表达水平，发现其中具有明显表达差异的基因片段，探讨其与多发性骨髓瘤的发生之间的关系，从而为多发性骨髓瘤的早期检测及靶向治疗寻找更好的途径和方法。通过筛选，本专利技术首次发现了多发性骨髓瘤中DRAP1显著性上调。实验证明，通过降低DRAP1的表达水平，能够有效地抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖，提示检测DRAP1基因的表达水平可成为多发性骨髓瘤早期诊断的辅助诊断指标之一，干扰DRAP1基因表达可成为预防或治疗多发性骨髓瘤或多发性骨髓瘤转移的新途径，或多发性骨髓瘤的精准化治疗的新方向。DRAP1基因DRAP1是位于11号染色体长臂1区3带上，一种代表性的人DRAP1基因的核苷酸序列和氨基酸序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。本专利技术中的DRAP1包括野生型、突变型或其片段。本专利技术的人DRAP1核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据已公开的有关核苷酸序列，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。本领域技术人员将认识到，本专利技术的实用性并不局限于对本专利技术的靶标基因的任何特定变体的基因表达进行定量。如果当核酸或其片段与其它核酸(或其互补链)最佳比对时(具有适当的核苷酸插入或缺失)，在至少大约60％的核本文档来自技高网...

【技术保护点】
DRAP1基因的用途，其特征在于，用于制备预防或治疗多发性骨髓瘤的药物组合物。

【技术特征摘要】
1.DRAP1基因的用途，其特征在于，用于制备预防或治疗多发性骨髓瘤的药物组合物。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物组合物包括DRAP1的下调剂。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的下调剂选自下组序列的siRNA：SEQIDNO.9、SEQIDNO.10。4.一种用于预防或治疗多发性骨髓瘤的DRAP1的下调剂，其特征在于，所述下调剂选自：核酸抑制物，蛋白抑制剂，蛋白水解酶，蛋白结合分子，其能够在基因或蛋白水平上下调DRAP1基因或其编码的蛋白的表达或活性。5.一种用于预防或治疗多发性骨髓瘤的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有：权利要求4所述的DRAP1的下调剂；和药学上可接受的载体。6.一种DRAP1基因的用途，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘志国，王思奎，孙长法，
申请(专利权)人：刘志国，王思奎，孙长法，
类型：发明
国别省市：山东,37