黄芩素在制备治疗癌胰腺癌药物的用途制造技术

技术编号:15772953 阅读:118 留言:0更新日期:2017-07-08 00:05
本发明专利技术属药物制药领域,涉及黄芩素作为SHH信号通路抑制剂在用于制备治疗癌胰腺癌的药物中的用途。本发明专利技术通过动物实验,结果显示,所述的黄芩素通过调控Sonic Hedgehog信号通路抑制胰腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,抑制胰腺癌干细胞自我更新,所述的黄芩素下调PANC-1胰腺癌细胞的IC50,减弱细胞体外运动能力;下调CD44

Use of baicalein in preparing medicine for treating cancer and pancreatic cancer

The invention belongs to the field of medicine and pharmacy, and relates to the use of baicalein as a SHH signaling pathway inhibitor in the preparation of a medicament for treating cancer and pancreatic cancer. The present invention by animal experiments. The results show that the baicalein by regulating Sonic signaling pathway Hedgehog inhibits the proliferation of pancreatic cancer cells, inducing cell apoptosis, inhibition of pancreatic cancer stem cell self-renewal, the baicalein downregulation of PANC-1 pancreatic cancer cells IC50 cells in vitro, decreased exercise capacity; down CD44

【技术实现步骤摘要】
黄芩素在制备治疗癌胰腺癌药物的用途
本专利技术属药物制药领域,涉及人胰腺癌干细胞SHH信号通路抑制剂,具体涉及黄芩素作为SHH信号通路抑制剂在制备治疗癌胰腺癌药物的用途。
技术介绍
胰腺癌预后极差,严重危害人类健康已成为共识,研究显示,胰腺癌肿瘤中有胰腺癌干细胞(CSCs)的存在,胰腺癌干细胞(CSCs)是一群具有类似干细胞功能的肿瘤细胞,其高恶性潜能体现在可无限制的自我更新、可分化成不同类型的肿瘤细胞,从而导致肿瘤复发、转移及放、化疗耐药,最终影响患者预后生存。已有研究表明胰腺癌干细胞对临床预后起着决定性作用,瘤体中富含胰腺癌干细胞的患者往往预示着较短的生存期与较高的肿瘤复发率和转移率。有研究显示SonicHedgehog信号通路在胰腺癌干细胞呈现高表达,广泛地参与了胰腺癌干细胞的生物学功能。靶向调控SonicHedgehog信号通路能显著抑制肿瘤生长,延长生存期,具有良好的临床前景。有研究以″湿热蕴结″为核心的胰腺癌病机理论假说,确立″清热化湿″法用中药复方清胰化积(QYHJ)方治疗胰腺癌,结果显示:临床疗效明显,约8%晚期胰腺癌患者获得5年以上带瘤生存,但其长期带瘤生存作用机制尚未明确。基于此,本申请的专利技术人拟针对所述中药复方中的有效成分尤其是其中的单体黄芩素探索对肿瘤干细胞及SonicHedgehog信号通路的可能调控作用,进一步提供黄芩素作为SHH信号通路抑制剂在制备治疗癌胰腺癌药物的用途。
技术实现思路
本专利技术目的为提供黄芩素在制备SHH信号通路抑制剂制中的新用途,尤其涉及黄芩素作为SHH信号通路抑制剂在制备治疗癌胰腺癌药物的用途。本专利技术通过动物实验,进行中药复方清胰化积(QYHJ)方中不同单体的抗肿瘤作用实验,利用CCK-8法评估QYHJ方中常见的八种单体:野黄芩苷、黄芩素、槲皮素、木犀草素、芹菜素、熊果酸、齐墩果酸和山奈酚对人胰腺癌细胞增殖的抑制作用,抑制胰腺癌干细胞增殖,其机理与下调胰腺癌干细胞表面标志物表达,核转录因子SOX-2、Nanog表达,抑制SonicHedgehog信号通路相性等,结果显示,在相同浓度的条件下,黄芩素对细胞增殖的抑制作用最为明显。本专利技术所述的黄芩素具有式(I)的结构:本专利技术进一步采用黄芩素对人胰腺癌PANC-1干细胞的调控作用及对SonicHedgehog信号通路的影响进行试验:采用CCK-8检测细胞活力,流式细胞仪检测胰腺癌干细胞比例变化,含生长因子的无血清培养成球实验测定胰腺癌干细胞自我更新能力;Westernblot检测胰腺癌干细胞表面标志物及SonicHedgehog信号通路成员蛋白表达变化;复制荷人胰腺癌PANC-1干细胞移植瘤裸鼠,采用免疫组织化学分析对抑瘤效果及胰腺癌干细胞表面标志物及SonicHedgehog信号通路成员蛋白表达进行检测;结果显示,黄芩素可显著下调PANC-1胰腺癌细胞,48h的IC50为37.27uM呈剂量依赖和时间依赖性,细胞体外运动能力明显减弱;黄芩素可显著下调CD44+/CD24+PANC-1胰腺癌细胞活力,黄芩素干预后PANC-1胰腺癌干细胞在含生长因子的无血清培养基中的肿瘤干细胞球数目明显减少(p<0.01);胰腺癌干细胞表面标志物CD24、CD44蛋白表达明显下调,核转录因子OCT-4、SOX-2蛋白水平表达亦减少,SHH、PTCH-1、SMO、GLI2均受到抑制,GLI2RNAi后,OCT-4、SOX-2蛋白水平表达亦减少;实验结果证实,黄芩素通过调控SonicHedgehog信号通路抑制胰腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,抑制胰腺癌干细胞自我更新,可用于制备SHH信号通路抑制剂制,进一步,黄芩素可作为SHH信号通路抑制剂制备治疗癌胰腺癌的药物。附图说明图1,黄芩素抑制PANC-1细胞增殖,诱导细胞凋亡实验结果,其中,A:不同浓度黄芩素干预24h,48h和72h对PANC-1细胞活力的影响;B:划痕实验观察黄芩素对人胰腺癌PANC-1细胞体外运动能力的影响。图2显示了黄芩素下调人胰腺癌PANC-1细胞干细胞比例,抑制胰腺癌干细胞自我更新能力,其中,A不同浓度黄芩素干预24h,48h和72h对PANC-1干细胞活力的影响;B为黄芩素干预3d后对PANC-1细胞细胞中胰腺癌干细胞成球能力的影响。图3显示了流式细胞术对各个胰腺癌细胞系检测结果,其中,A:流式细胞术检测CD44+/CD24+PANC1细胞最多;B为干细胞Hedgehog信号通路各成员的蛋白表达结果;C为PANC1干细胞在细胞成球呈现时间依赖性。图4显示了黄芩素下调人胰腺癌PANC-1细胞干细胞比例并对人胰腺癌PANC1干细胞表面标志物的调控作用,其中,A:不同浓度姜黄素干预48h后PANC-1细胞中胰腺癌干细胞(CD24+CD44+细胞)比例的变化**与DMSO对照组比较,P<0.01;B:对照组和不同黄芩素干预组干预后瘤体克隆形成能力变化;C:黄芩素显著性下调胰腺癌干细胞表面标志物CD24、CD44、CD133,黄芩素显著性下调SonicHedgehog信号通路成员Shh,PTCH1,SMO和核转录因子GLI-2蛋白表达。图5显示了黄芩素对人胰腺癌PANC1干细胞相关信号通路SonicHedgehog信号通路表达的影响。图6,黄芩素对人胰腺癌PANC1干细胞裸鼠皮下移植瘤增殖的影响,其中显示了不同治疗组肿瘤生长情况,A为不同治疗组瘤块大小示意图;B,不同治疗组肿瘤生长曲线。图7,8,9显示了黄芩素对裸鼠原位移植瘤胰腺癌干细胞表面标志物及SonicHedgehog信号通路成员蛋白表达表达的影响及分别的对照组、低剂量组和高剂量的评分。具体实施方式实施例1一、实验材料1.1细胞人胰腺癌PANC-1细胞系购自ATCC(AmericanTypeCultureCollection)。1.2动物BALB/c裸鼠,购自上海斯莱克实验动物有限责任公司,许可证号码:SCXK(沪)2007~0005,4周龄,体重:18~22g;雌性;饲养于SPF级环境中。1.2.主要试剂1.2.1单体:中药单体黄芩素均购自上海中药标准化研究中心。1.2.2细胞培养及体外检测相关试剂:RPMI1640、胎牛血清试剂购自Gibco或Hyclon公司,谷氨酰胺购自Hyclon公司,青链霉素双抗、丙酮酸钠购自Sigma公司。bFGF,EGF,B27购自Invitrogen公司。1.2.3体外增殖检测试剂盒WST-8basedColorimetricAssayCellCountingkit8(CCK-8)购自日本本同仁化学研究所。1.2.4流式细胞仪检测试剂:细胞凋亡检测AnnexinV/PI试剂盒购自Invitrogen公司,CD24-PE抗体,CD44-APC抗体购自BD公司。1.2.5Westenbblot相关试剂:哺乳动物蛋白提取试剂盒、PMFS、蛋白浓度检测试剂盒(BCA法)、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒、5×蛋白上样缓冲液均购自北京康为世纪生物科技有限公司。兔抗人Shh,PTCH1,GLI购自CellSignallingTechnology公司。鼠抗人SMO多克隆抗体,辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG二抗购自SantaCruz公司。封闭液为脱脂奶粉溶于1×TPBS,终浓度5%。PV本文档来自技高网...
黄芩素在制备治疗癌胰腺癌药物的用途

【技术保护点】
黄芩素在用于制备SHH信号通路抑制剂中的用途,所述的黄芩素具有式(I)的结构:

【技术特征摘要】
1.黄芩素在用于制备SHH信号通路抑制剂中的用途,所述的黄芩素具有式(I)的结构:2.按权利要求1的用途,其特征在于,所述的黄芩素通过调控SonicHedgehog信号通路抑制胰腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,抑制胰腺癌干细胞自我更新。3.按权利要求1或2的用途,其特征在于,所述的黄芩素下调PANC-1胰腺癌细胞的IC50,减弱细...

【专利技术属性】
技术研发人员:宋利斌刘鲁明
申请(专利权)人:复旦大学附属肿瘤医院
类型:发明
国别省市:上海,31

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